染色體微陣列用于胚胎停育及自然流產原因的篩查

龐佳倫 馬 娜 彭 瑩 王 華 賈政軍

湖南省婦幼保健院(長沙，410000)

孕早期胚胎停育及自然流產的發生率超過1%[1]，嚴重影響患者的身心健康。輔助生殖技術(ART)雖然大大提高了妊娠率，但60%以上受術者發生自然流產和胚胎停育，查明原因對提高妊娠率及預防自然流產意義重要。盡管造成胚胎停育及自然流產的因素很多且存在諸多爭議，但染色體異常是多數學者認可的最主要原因[2]。染色體異常檢測常采用絨毛細胞培養染色體G顯帶核型分析技術，但分辨率和敏感度較低，漏檢率和誤檢率較高。近年開展的染色體微陣列技術(CMA)在一定程度上克服了上述缺陷，對篩查有顯著的指導意義[3]。本文對此技術的臨床應用進行總結。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2017年8月-2018年3月本院確診為胚胎停育、自然流產并行清宮術的臨床資料(病例組)，納入標準為年齡21～42歲、無嚴重宮內疾病。排除標準[4-5]為患有子宮內膜異位癥、子宮肌瘤等影響胚胎著床、發育的因素，男方精子不成熟。選擇同期正常妊娠女性(對照組)。本研究經過醫院倫理委員會批準，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 染色體檢測

1.2.1采集標本及提取DNA[6]將新鮮絨毛組織標本浸泡在裝有無菌磷酸緩沖鹽液離心管內，采用基因組DNA提取試劑盒提取DNA并檢測濃度及純度，待測DNA含量應 25g，-20℃存儲備用。

1.2.2單核苷酸多態性芯片雜交[7-9]使用CMA分析系統(Affymetrix GCS3000Dx v.2)檢測，Affymetrix Cytoscan 750K 芯片備檢，操作嚴格按照說明書執行。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組對象基本情況

病例組86例，年齡(31.2±0.3)歲(21～42歲)，體質量指數(22.6±1.5)kg/m2；第一胎79例，二胎7例；臨床癥狀表現為下腹疼痛31例(36.0%)，陰道出血32例(37.2%)、精神不佳23例(26.7%)；早期流產46例(53.5%)，晚期流產29例(33.7%)、胚胎停育11例(12.8%)；自然妊娠43例(50.0%)，宮腔內人工受精28例(32.6%)、ART治療15例(17.4%)。對照組33例，年齡(31.5±0.2)歲(20～43歲)，體質量指數(22.9±1.9)kg/m2；第一胎28例，二胎4例；自然妊娠16例(48.6%)，宮腔內人工受精11例(33.3%)、ART治療16例(18.2%)。兩組一般情況比較無統計學差異(P>0.05)。

2.2 不同妊娠結局者絨毛組織CMA異常情況比較

兩組均有不同程度異常染色體和非整倍體。病例組86例中，異常染色體65例(75.6%)、非整倍體56例(65.1%)；早期流產、晚期流產和胚胎停育的異常染色體和非整倍體發生率均高于對照組，且早期流產組高于胚胎停育組(P<0.05)，見表1。

2.3 妊娠方式與絨毛組織CMA異常關系

不同妊娠方式，絨毛組織CMA異常染色體和非整倍體發生率病例組均高于對照組(P<0.05)，但病例組中未見差異(P>0.05)，見表2。

表1 兩組不同妊娠結局者CMA異常類型比較[例(%)]

*與對照組比較#與早期流產組比較P<0.05

表2 兩組不同妊娠方式絨毛組織CMA異常比較[例(%)]

*與對照組同類妊娠方式比較P<0.05

2.4 病例組染色體異常類型

病例組中染色體異常65例中，異常類型分別為常染色體三體23例(35.4%)，常染色體單體15例(23.1%)，常染色體雙三體14例(21.5%)及X單體13例(20.0%)。

3 討論

胚胎停育及自然流產導致因素很多，如子宮異常、生殖道感染及不良環境等，其中色體異常是最為常見也是最重要的病因[10-11]。本次結果顯示，與正常妊娠對照組比較，胚胎停育及自然流產的病例組絨毛組織異常染色體及非整倍體等發生率明顯增高，提示檢測早孕絨毛組織染色體對評估胚胎停育及自然流產有一定臨床價值。同時在早期流產患者中，異常染色體或非整倍體均明顯增高，分析原因可是染色體異常的胚胎著床功能降低，提早出現了發育停滯；而妊娠方式與絨毛組織染色體異常類型未見差異。但有文獻認為[12-13]，與自然妊娠相比，ART出現染色體異常的概率降低，與植入前胚胎經過體外人工優選相關。本文未見這種差異，除了納入的案例相對較外小，可能與CMA技術缺陷有關，比如CMA難以檢測染色體某些突變，無法檢測低水平的嵌合體、堿基的插入或缺失，DNA甲基化異常和其他堿基修飾異常等[14]。

本文病例組出現異常染色體類型包括常染色體三體、常染色體單體、常染色體雙三體及X單體，其中染色體三體發生率最高，與文獻報道相似[12-15]。染色體三體是導致早期胚胎停育的主要因素，產前診斷可最大限度防止染色體異常患兒的出生[15]。有研究認為染色體數目異常還與妊娠女性年齡相關[16-17]，由于本文納入者年齡跨度不大，提示今后有必要納入更多高齡女性案例分析研究。

目前，我國許多醫療機構已經開展了CMA用于產前診斷，但實踐時間不長，實際診斷和操作經驗不足，也給該技術的應用帶來了諸多挑戰。但在發現染色體異常相關的出生缺陷方面的優勢仍無可比擬[19-19]。而應用該技術檢測絨毛組織，對預測妊娠期胚胎停育和自然流產，具有重要臨床指導意義。