FID-HPLC法測定黑參中的苯并[a]芘的含量

◎ 郭航宏，王雪丹，張念潔，陶曉杰

（延邊朝鮮族自治州產品質量檢驗所，吉林 延吉 133000）

黑參是指將鮮人參通過蒸汽或其他方法蒸熟后晾干，呈淡黑褐色或黑茶褐色的人參。黑參以其有稀有皂甙含量高而聞名，然而黑參特殊的制作工藝[1]使得苯并芘的檢測成為檢測人參中非常必要的一個指標。苯并芘[2]（Benzopyrene）是苯與芘稠合而成的一類多環(huán)芳烴。最常見的苯并芘是苯并[a]芘。它是一種致癌物質和突變原。目前，國內外對苯并[a]芘含量測定方法報道熒光分析法、氣質聯(lián)用、高效液相法[3]、液質聯(lián)用儀、酶聯(lián)免疫吸附法等。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

日本島津LC-10AT型高效液相色譜儀；SPD-10AD紫外可見檢測器；SIL-10AD自動進樣器；SCL-10A系統(tǒng)監(jiān)控器；乙腈（色譜純）；水（一級去離子水）；標準溶液：乙腈配制的標準溶液儲備液（1 mg/mL）；乙腈稀釋相應的標準工作溶液。對照品：苯并[a]芘（＞99%），天津一方科技有限公司提供；苯并[a]芘專用凈化柱（維泰克科技公司）。

1.2 色譜分析條件

液相色譜條件及系統(tǒng)適應性實驗色譜柱為Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈∶水（80∶20），流速為1.0 mL/min，熒光檢測激發(fā)波長為384 nm，發(fā)射波長為406 nm。色譜圖如圖1所示。

圖1 色譜圖

1.3 對照品的制備

精密移取苯并[a]芘對照品，置于10 mL量瓶中，用乙腈溶解稀釋至刻度，搖勻，得苯并[a]芘對照品溶液作為儲備液。

1.4 樣品的前處理

精密稱取黑參1 g，加入5 mL正己烷，超聲提取離心5 min，轉移出上清液。正己烷重復提取一次。合并上清液，過柱子凈化，濃縮至近干，加入乙腈定容。過0.45 μL濾膜，進樣。供液相色譜測定用。

2 結果與討論

2.1 線性方程、方法檢測限和精密度

標準曲線的繪制：精密吸取苯并[a]芘對照品2.0、4.0、6.0、8.0 mL。分別置10 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20 μL，注入液相色譜儀，按照1.2項下的方法測定，取其中一個標準溶液重復測定6次，以峰面積與質量濃度進行一元線性回歸分析，計算峰面積的相對標準偏差，進行線性關系、線性范圍、檢測限和精密度的測定。苯并[a]芘在較寬的濃度范圍內均具有良好地線性、相關系數(shù)都大于0.999，精密度較好，Y=150 2.5X，最低檢測限0.01 μg/kg，最低檢出限以信噪比為3：1計算峰面積RSD為1.10%。

2.2 穩(wěn)定性實驗

樣品溶液，按照1.2項下的方法在0、2、4、8、16和24 h分別進樣20 μL，測定峰面積，結果表明樣品溶液在24 h內保持穩(wěn)定。RSD為1.85%。

2.3 重復性實驗

取同一批樣品6份，按1.2項方法測定峰面積，RSD為1.12%。

2.4 加樣回收率實驗

精密稱取人參樣品1 g，分別加入一定量的（3個梯度濃度）苯并[a]芘混合對照品溶液，按1.4的制備方法及1.2項條件方法進行測定，進樣分析，每個平行6次平行測定，平均回收率94.59%。

2.5 樣品的含量測定

取樣品按照1.2項下的方法測定6種樣品，每個平行3次平行測定，樣品含量分別為0.240、0.238、0.236、0.232、0.244μg/kg和0.242 μg/kg，RSD為1.87%。

3 結論

苯并[a]芘是在黑參蒸制和干燥的過程中的產物，所以檢測苯并[a]芘是衡量黑參品質的一個至關重要的檢查指標。此方法前處理簡單，易提取，為以后的黑參及黑參相關產品制定標準具有一定的參考價值。

[1]趙天琦，趙 巖，郜玉鋼，等.黑參的研究進展[J].中國現(xiàn)代中藥，2016，18（1）：123-125.

[2]馮亞凈.食品中苯并芘的來源及減控方法的研究[J].糧食與油脂，2017，30（2）：72-75.

[3]曾露露.高效液相色譜法同時測定黑參中4種稀有人參皂苷的含量[J].中國藥學雜志，2017，52（12）：1069-1072.