丹參酮ⅡA磺酸鈉對缺血性腦卒中大鼠受損組織的防護作用研究*

杜維平 ，鄧禮娟 ，賈毅敏 ，賴翔宇

（1．重慶三峽中心醫院，重慶 404000； 2．重慶大學附屬腫瘤醫院·重慶市腫瘤研究所·重慶市腫瘤醫院，重慶 400030）

缺血性腦卒中是臨床常見的腦血管疾病，如何有效保護腦細胞、減輕神經功能缺損程度一直是治療的研究熱點[1]。丹參是活血化瘀類中藥的代表，臨床應用歷史悠久，其活血祛瘀、涼血消癰、除煩安神等功效已有多年臨床驗證。近年來，對丹參的有效成分、藥理作用的現代研究不斷深入。丹參單體物質丹參酮ⅡA脂溶性較強，經磺化后水溶性較強，更易被人體吸收。丹參酮ⅡA可改善側支循環、解除微血管痙攣、改善局部組織缺血缺氧所致的代謝障礙，在心腦血管疾病的治療中應用前景良好[2]。本研究中通過動物實驗探討了丹參酮ⅡA磺酸鈉治療缺血性腦卒中的療效及不良反應，現報道如下。

1 材料與方法

1．1 動物、儀器與試藥

動物：SD大鼠，周齡10～12周，動物合格證編號為201602065。飼養條件保持整潔、干燥，室溫21～25℃，相對濕度50% ～60%；動物房內安置白熾燈，維持正常晝夜規律，喂養飼料為標準飼料，大鼠和飼料均購自重慶醫科大學動物實驗中心。

儀器：OLS4100型倒置顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；BSM－620．3型電子精密天平(上海卓精電子科技有限公司)；BPZ－6000LC型恒溫干燥箱(上海和呈儀器有限公司)；LC－20A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；SP－100E型酶標儀(上海閃譜生物科技有限公司)。

試藥：水合氯醛（分析純，南京森貝伽生物科技有限公司，批號為140217）；林格注射液(杭州民生藥業有限公司，國藥準字H33020035，批號為140514)；乳酸脫氫酶（LDH，批號為 20140424）、超氧化物歧化酶（SOD，批號為 20140924）、丙二醇（MDA，批號為 20140315），試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；丹參酮ⅡA磺酸鈉（上海第一生化藥業有限公司，國藥準字H31022558，規格為每支 2 mL∶10 mg）。

1．2 方法

分組：采用隨機數字表法將80只大鼠均分為假手術組(A組)、缺血性腦卒中組(B組)、丹參ⅡA磺酸鈉預處理組(C組)和丹參ⅡA磺酸鈉實驗組(D組)，各20只。4組大鼠的性別、周齡和體質量均無明顯差異（P＞0．05），具有可比性。

建模與給藥：A組做切皮、分離血管手術，手術前腹腔注射無菌生理鹽水2 mL。B組實施改良的Pulsinelli′s四血管阻斷法建立模型，手術前腹腔注射無菌生理鹽水2 mL。C組實施改良的Pulsinelli′s四血管阻斷法建立模型，手術前腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉30 mg／kg。D組實施改良的Pulsinelli′s四血管阻斷法建立模型，術后2 h開放血流時腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉30 mg／kg。

1．3 評價指標

不良反應：給藥后觀察各組發熱、白細胞反應、皮疹等不良反應的發生情況。

腦部利用率：將大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后固定，將腦探針植入左側皮質，林格液以2 μL／min的流速灌流，平衡時間為2 h。連續收集3個空白透析液樣品后尾靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉和丹參酮ⅡA單體，并收集樣品。每隔15 min收集腦透析液。以林格液稀釋2倍后進樣采用高效液相色譜化學發光檢測（HPLC－CL）法分析系統測定。

腦梗死面積：將大鼠處死后，取腦組織切薄片，進行TTC染色，拍攝染色標本照，使用計算機圖像分析軟件（HPIAS－1000）計算梗死區面積。

腦含水量：于再灌注后24 h，處死大鼠，取出完整大腦，留梗死半球。采用電子精密天平測量濕重，再將標本置于恒溫干燥箱烘干至恒重后測干重。腦含水量＝（濕重－干重）／濕重。

其他：觀察在體腦微透析下丹參ⅡA單體和丹參ⅡA磺酸鈉的回收率。比較LDH，SOD，MDA水平。

1．4 統計學處理

采用 SPSS 11．5統計軟件處理。計量資料采用均數±標準差（）表示，計數資料采用百分率表示，運用單因素方差分析和 t檢驗。P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 丹參ⅡA磺酸鈉的腦部利用率

通過在體腦微透析技術發現，丹參ⅡA磺酸鈉平均回收率為（7．37 ±8．26）%，較丹參酮ⅡA單體的（11．51 ±5．23）% 低（t＝9．268，P ＜ 0．05），說明丹參ⅡA磺酸鈉較丹參酮ⅡA單體更易吸收。

2．2 腦梗死面積和腦含水量

由表1可見，4組大鼠間腦梗死面積和腦含水量比較，差異有統計學意義（P＜0．01）。且B組大鼠的上述指標高于 C組和 D組（P＜0．05），而 C組和 D組之間無明顯差異（P ＞0．05）。

表1 4組大鼠腦梗死面積及腦含水量比較（，%，n＝20）

表1 4組大鼠腦梗死面積及腦含水量比較（，%，n＝20）

注：與 A 組比較，*P ＜0．05；與 B 組比較，＃P ＜0．05。表 2同。

組別A組B組C組D組F值P腦梗死面積0 35．23 ± 5．69 26．12 ± 4．53*＃25．88 ± 4．85*＃7．952＜ 0．01腦含水量72．36 ± 6．24 88．43 ± 5．87 80．17 ± 6．22*＃79．85 ± 5．86*＃9．164＜ 0．01

2．3 LDH，SOD，MDA 水平

由表2可見，B組大鼠LDH和MDA水平均高于C組和D組，而SOD水平低于C組和D組(P＜0．05)，C組和D組之間無明顯差異(P＞0．05)。

2．4 不良反應發生情況

由表3可見，4組大鼠發熱、白細胞反應的發生率無明顯差異(P＞0．05)，而C組和D組大鼠皮疹發生率明顯高于其余兩組（P ＜0．05）。

表2 4組大鼠 LDH，SOD，MDA 水平比較（，n＝20）

表2 4組大鼠 LDH，SOD，MDA 水平比較（，n＝20）

組別A組B組C組D組F值P LDH（U ／L）2 435．56 ± 234．32 3 892．12 ± 346．84 3 223．46 ± 245．56*＃3 224．13 ± 263．41*＃13．297＜ 0．01 SOD（U ／mL）235．64 ± 11．37 226．12 ± 12．23 258．35 ± 13．28*＃259．10 ± 13．16*＃8．325＜ 0．01 MDA（nmol／mL）12．33 ± 1．56 14．98 ± 1．07 7．11 ± 0．83*＃6．97 ± 0．25*＃9．128＜ 0．01

表3 4組大鼠不良反應發生情況比較（只，n＝20）

3 討論

缺血性腦卒中是由缺血引起的局灶性神經功能缺失，常突然起病、進展迅速，具有高發病率、高死亡率、高致殘率等特點[3]。腦組織在缺氧狀態下細胞供氧不足，造成ATP減少、細胞內酸中毒、膜電位改變、細胞骨架紊亂等缺血性損傷[4]。迅速恢復缺血區的再灌注對改善患者預后具有重要作用，血流恢復后受炎性反應影響，又會造成缺血－再灌注損傷，可進一步加重腦組織損傷，甚至造成廣泛的神經元壞死[5]。

丹參具有活血祛瘀、養血安神之功效，應用歷史悠久、療效確切。古籍有“一味丹參散，功同四物湯”之說，足見其活血養血之效果[6]。近年來，丹參已有片劑、滴丸劑、注射劑等劑型，現代藥理學研究發現，丹參對免疫功能有雙向調節作用，可改善微循環、清除氧自由基，并具有抗炎、抗腫瘤、鎮痛、降壓等藥理作用[7]。丹參酮ⅡA是從丹參中分離出的脂溶性二萜醌類化合物，是丹參的主要活性成分[8－9]。丹參酮ⅡA有助于改善冠狀動脈側支循環，解除微血管痙攣，改善代謝障礙，清除氧自由基，減少炎性細胞浸潤，治療心血管疾病顯著效果[10]。其還可作為病毒性肝炎、肺纖維化、糖尿病等疾病的輔助用藥[11]。丹參酮ⅡA脂溶性強，到達腦組織的藥物較少，可采用基團修飾方法改變其性質[12－13]。丹參酮ⅡA磺酸鈉是將丹參酮ⅡA經磺化而得到的衍生物，將丹參酮ⅡA的脂溶性改變成水溶性，使其具有更高的生物利用率[14－16]。

本研究結果顯示，丹參ⅡA磺酸鈉利用率較丹參酮ⅡA單體低，說明丹參ⅡA磺酸鈉較丹參酮ⅡA單體更易吸收；采用丹參ⅡA磺酸鈉預處理或造模后治療均可改善缺血性腦卒中大鼠的腦水腫，并縮小梗死灶面積，且兩者效果相當。另外，結果還提示，丹參ⅡA磺酸鈉對缺血性腦卒中的治療作用可能是通過清除氧自由基、抗氧化等機制實現的。4組大鼠發熱、白細胞反應的發生率無明顯差異，而C組和D組大鼠皮疹發生率明顯高于其余兩組，提示丹參酮ⅡA磺酸鈉可能引起皮疹等不良反應，但其具體作用機制尚有待于進一步研究。

綜上所述，丹參酮ⅡA磺酸鈉的利用率較丹參酮ⅡA單體高，可降低LDH和MDA水平，提高SOD水平，對缺血的腦組織起到保護作用，不良反應較小，具有較高的臨床研究價值。

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