葡萄糖注射液中注射用血栓通與胰島素配伍穩定性考察*

彭 雯 ，王耀華 ，孫志強 ，孫冬曉 ，賈聚坤 ，孟 巖 ，任曉華

（1．河北省石家莊市第一醫院，河北 石家莊 050011； 2．河北大學附屬醫院，河北 保定 050017）

注射用血栓通是從中藥三七中提取有效活性成分制成的一種純中藥制劑，主要成分為三七總皂苷，具有活血祛瘀、通脈活絡的功效，主要用于治療中風偏癱、瘀血阻絡及腦血管疾病后遺癥、視網膜中央靜脈阻塞屬瘀血阻滯證[1]，廣泛用于心腦血管系統、呼吸系統及內分泌系統疾病等[2]。其藥品說明書規定：本品應以10%葡萄糖注射液250～500 mL稀釋后緩慢靜脈滴注，1日1次。臨床部分患者會同時患有糖尿病，因此需要在注射用血栓通與葡萄糖配伍溶液中加入胰島素，以防糖耐量異常或血糖升高。此方法為臨床經驗性配伍用藥，其安全性無確切依據，國內外文獻鮮有報道。本研究中考察了注射用血栓通與胰島素在葡萄糖注射液中的配伍穩定性，現報道如下。

1 儀器與試劑

1．1 儀器

LC－10ATVP型高效液相色譜儀（日本島津公司）；UV－1901型雙光束紫外分光光度計（普析通用，檢測精度為2%）；DELTA320型 pH計(梅特勒－托利多儀器有限公司，檢測精度為0．1)；GWF－5J型微粒分析儀(天津天河醫療儀器有限公司)。

1．2 試藥

注射用血栓通(廣西梧州制藥股份有限公司，批號為20160107，規格為每支250 mg)；胰島素注射液(江蘇萬邦生化醫藥股份有限公司，批號為1601103，規格為每支10 mL∶400 U)，10%葡萄糖注射液(北京雙鶴藥業股份有限公司，批號為1602025，規格為每瓶250 mL)；胰島素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為7337865，規格為2 mg)；三七總皂苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為150720－201509，規格為20 mg）；甲醇（Fisher公司，4 L，色譜純），乙腈（Fisher公司，4 L，色譜純）；水（屈臣氏蒸餾水，批號為 20160201）；磷酸（H3PO4，批號為 79622 － 500 g），無水硫酸鈉（Na2SO4，批號為 239313－500 g），均購自 Sigma公司，均為分析純。

2 方法與結果

2．1 三七總皂苷含量測定方法的建立[3－5]

2．1．1 檢測波長選擇

精密稱取三七總皂苷，加乙醇溶解，稀釋至0．1 g／L，乙醇為空白對照，在190～400 nm波長范圍內進行掃描。檢測到三七總皂苷在317 nm波長處有較大吸收。重復實驗并參考文獻[5－7]，確定317 nm為三七總皂苷的檢測波長。

2．1．2 方法學考察

線性關系考察：取三七總皂苷標準品，精密稱取0．016 0 g，置100 mL容量瓶中，加乙醇超聲溶解定容，得質量濃度為0．16 g／L的貯備液，精密量取該貯備液1，2，4，8，10 mL，分別置 5 個 100 mL 容量瓶中，并加乙醇定容，超聲充分溶解，制得不同質量濃度的溶液。以質量濃度為橫坐標(X)、吸光度為縱坐標(Y)進行線性回歸，得回歸方程 Y＝4．357×10－3X＋9．216×10－3，r＝0．999 9。結果三七總皂苷質量濃度在 1．6 ～ 16．0 μg／mL 范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗：取線性關系考察項下 6．4 μg／mL的供試品適量，依法制備供試品溶液，連續測定6次。結果的RSD為1．21%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取精密度試驗項下的供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，12 h 時測定吸光度值。結果的 RSD 為1．08%(n＝6)，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

重復性試驗：取同一批三七總皂苷對照品，按線性關系項下方法制備5份供試品溶液，分別精密吸取1．6 μg／mL進樣測定，記錄峰面積。結果三七總皂苷的RSD為1．31%(n＝5)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取樣品(批號為20160107)，精密稱定6份，每份約1 mg，分別加入一定量的三七總皂苷標準品，置100 mL容量瓶中，加乙醇搖勻，充分溶解后定容。測定其吸光度值，計算回收率，結果見表1。

表1 三七總皂苷加樣回收試驗結果(n＝6)

2．1．3 干擾試驗

模擬臨床用藥，取樣品250 mg溶于10%葡萄糖注射液500 mL中，并加入8 U胰島素作為供試品；取樣品250 mg溶于500 mL乙醇作為空白對照，分別均勻混合后測定其吸光度值，平行測定3次，結果無差異。表明此條件下加入胰島素的葡萄糖注射液不影響三七總皂苷的含量測定。

2．2 胰島素含量測定方法的建立[6－7]

2．2．1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex luna C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)；流動相：0．2 mol／L 硫酸鹽溶液（取無水硫酸鈉 28．4 g，加水溶解并加磷酸 2．7 mL，用乙醇胺調節pH 至 2．3，定容至 1 000 mL)－乙腈(74 ∶26)；流速：1．0 mL ／min；柱溫：40 ℃；檢測波長：317 nm；進樣量：20 μL。

2．2．2 溶液制備

按照臨床經驗性用藥，將注射用血栓通250 mg與10%葡萄糖注射液500 mL溶解后加入8 U胰島素，充分混合均勻，得供試品溶液。取胰島素對照品1．923mg，精密稱定，用0．01 mol／mL稀鹽酸配制成10 U／mL對照品貯備液。

2．2．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取上述對照品貯備液0．05，0．10，0．30，0．50，1．00 mL 定容至 100 mL 容量瓶中，得質量濃度為 0．005，0．01，0．03，0．05，0．10 U ／mL的胰島素溶液。取上述溶液各20 μL進樣，按擬訂色譜條件進樣分析，記錄峰面積，以質量濃度為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝6．192 3×103X－4．028 1，r＝0．999 9。結果表明，胰島素質量濃度在0．005～0．100 U／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取線性關系項下配置的10 U／mL胰島素溶液連續進樣6次，按擬訂色譜條件分析，記錄峰面積。結果的 RSD為0．87%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取線性關系項下配置的10 U／mL胰島素溶液，在放置 0，1，2，4，6，8 h 后分別進樣，按擬訂色譜條件分析，記錄峰面積。結果的 RSD為1．04%(n＝6)，表明供試品溶液在8 h內穩定性好。

重復性試驗：取同一批胰島素對照品，按擬訂方法制備供試品溶液5份，分別精密吸取供試品溶液進樣，記錄峰面積。結果的 RSD為1．25%(n＝6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取線性關系項下配置的10 U／mL供試品溶液，分別加入8，10，12 U胰島素注射液，每組重復進樣2次，計算回收率。結果見表2。

表2 胰島素加樣回收試驗結果(n＝6)

2．2．4 干擾試驗

模擬臨床用藥，將注射用血栓通凍干粉250 mg溶于10%葡萄糖注射液500 mL中，并加入8 U胰島素，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（圖1）。可見，此條件下注射用血栓通與葡萄糖注射液的配伍不會影響胰島素的含量測定。

2．3 配伍穩定性試驗

模擬臨床用藥方式，分別配置配伍液(A溶液、B溶液)，A溶液為注射用血栓通凍干粉250 mg溶于10%葡萄糖注射液500 mL中，B溶液為注射用血栓通凍干粉250 mg溶于10%葡萄糖注射液500 mL后加入8 U胰島素注射液，充分搖勻并置于室溫下，在 0，1，2，4，6，8，12 h時分別觀察及測定其外觀、pH、不溶性微粒、含量[8－9]。

圖1 高效液相色譜圖

外觀：將A溶液和B溶液分別加入干凈的10 mL具塞比色管中，在澄明度檢測儀下對其進行澄明度、顏色的觀察，記錄 0，1，2，4，6，8，12 h 時瓶中藥液有無變化，是否存在白點、碎屑、不溶物等及顏色改變。結果顯示，在不同時間點內，A溶液、B溶液外觀均澄清透明、無渾濁、沉淀產生，但在6 h后均有顏色變深的趨勢。

pH：將A溶液和B溶液在精密酸度計下測定0，2，4，6，8，12 h 時的 pH，結果見表 3。對兩組數據進行 t檢驗，無顯著性差異(P＞0．05)。表明注射用血栓通與胰島素在10%葡萄糖注射液中的配伍液12 h內pH穩定。

表3 配伍液在不同時間點pH和外觀變化

不溶性微粒：將A溶液、B溶液配伍液在澄明度檢測儀下按照2015年版《中國藥典(二部)》微粒檢測法中的光阻法檢查不同時間點的微粒數，記錄≥10 μm、≥25 μm的微粒數，同一樣品連續測定5組，取平均值[10－12]，結果見表4。藥典規定大于10 μm不溶性微粒數應不大于25粒／mL，大于25μm的不溶性微粒數應不大于3粒／mL。由表4可見，兩組配伍液微粒數在2 h內變化不大；2～8 h配伍液微粒數有所上升，但均符合藥典規定；12 h測定的微粒數已超出藥典要求。

表4 配伍液不溶性微粒數試驗結果（n＝5，粒／mL）

表5 配伍液中三七總皂苷和胰島素含量測定結果（n＝3，%）

含量測定：取B溶液，在317 nm波長下對三七總皂苷的含量進行紫外分光光度檢測，記錄其吸光度值；再精密量取 10 μL，按 2．2項下色譜條件進樣分析，記錄色譜峰面積和保留時間。以0 h時的含量為100．00%，分別測定配伍液中三七總皂苷和胰島素的含量變化情況，平行測定3次，詳見表5。結果表明，12 h內配伍液中三七總皂苷和胰島素的含量略有下降，但變化很小，相對含量均大于98．25%。

3 討論

采用2015年版《中國藥典(二部)》中高效液相色譜法考察胰島素在配伍液中的變化，結果重復性好、靈敏度高，結果可靠。三七總皂苷的含量測定方法有重量法、比色法、高效液相色譜法。其中，重量法由于雜質不易除凈，試驗結果通常偏高；高效液相色譜法測定較復雜，需要對三七總皂苷中的每種成分分別進行方法學考察。因此，本試驗采用比色法對三七總皂苷進行研究。

由本研究結果可知，在室溫下，注射用血栓通與胰島素在10%葡萄糖注射液中配伍，12 h內無渾濁及沉淀產生，pH穩定，無明顯變化；溶液外觀在6 h內無變化，6 h后顏色均有變深趨勢；不溶性微粒2 h內穩定，2～8 h有所上升，但仍符合藥典要求，12 h后不溶性微粒超過藥典規定的數值；配伍液中的主要成分三七總皂苷及胰島素含量無明顯變化，且胰島素保留時間穩定。可見，注射用血栓通與胰島素在10%葡萄糖注射液中的配伍液在6 h內穩定。

中藥注射液成分復雜，其中的主要成分和未能除盡的雜質成分與溶劑配伍后，隨著放置時間的延長發生一系列復雜的化學反應，導致溶液外觀顏色改變、微粒數增加[12－13]，因此配伍液應在6 h內使用，并建議使用精密輸液器或采用終端過濾裝置，減少微粒對人體造成的損害[14]。臨床使用中也盡量縮短放置時間，現配現用，以確保用藥的安全性。通過以上內容的研究，并對研究結果進行全面評價，可基本闡明注射用血栓通與胰島素在葡萄糖注射液中配伍后的穩定性，為臨床合理應用提供了理論參考。

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