宮頸癌組織FoxM 1蛋白的表達特點及其與病理學特征、預后的相關性

郭麗梅，戴守勇

上海市浦東醫院1婦產科，2普外科，上海201399

臨床上宮頸癌的病情進展能夠增加患者盆腔內臟器轉移的風險，導致患者生存預后的惡化。流行病學研究顯示，宮頸癌的發病率為（225～674）/10萬，同時在經濟欠發達地區或具有高危型HPV感染的患者中，宮頸癌的發病率可持續上升[1]。基因轉錄水平或細胞生物學相關因子的改變，能夠促進癌細胞的細胞核增殖、細胞異型性的改變。叉頭轉錄因子（fork transcription factor，FoxM1）的表達濃度的改變，能夠增加癌細胞DNA核轉錄基因的激活，促進癌細胞腫瘤相關信號通路的上調，增加癌細胞浸潤或者轉移的風險[2-3]。已證實FoxM1能夠在甲狀腺癌、視網膜母細胞瘤或乳腺癌等惡性腫瘤的發生過程中發揮重要的作用，認為高表達的FoxM1是促進患者臨床分期進展、導致治療遠期預后惡化的重要因子，但在宮頸癌中的分析研究不足。為了進一步探討FoxM1的表達與宮頸癌的關系，從而為宮頸癌的診斷和治療提供理論基礎，本次研究選取手術后宮頸癌組織標本90例，探討FoxM1的表達與宮頸癌患者臨床特征及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月至2012年8月上海市浦東醫院病理科收集的手術后宮頸癌組織標本90例（宮頸癌組）及正常宮頸組織45例（對照組）。納入標準：①宮頸癌患者的診斷標準參考相關標準[3]；②患者年齡19～65歲；③均為上海市浦東醫院手術后宮頸癌組織標本；④手術前患者均未接受放化療、免疫治療；⑤患者接受了術后隨訪。排除標準：①轉移性宮頸癌；②具有放化療史、免疫治療史；③未能接受術后隨訪。宮頸癌組，年齡36～65歲，平均（52.0±9.8）歲；鱗癌76例，腺癌14例；依據國際婦產科聯盟（FⅠGO）分期：Ⅰ期59例，Ⅱ期31例；分化程度：高分化33例，中分化32例，低分化25例；淋巴結轉移15例。對照組，年齡41～65歲，平均（53.0±10.6）歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 指標檢測方法

所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4 mm，采用免疫組化鏈霉卵白素-生物素復合體法（strep avidin-biotin complex，SABC）染色，二氨基聯苯胺（diamionben zidene，DAB）顯色。FoxM1蛋白抗體、PV6000通用型二抗、SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及磷酸鹽緩沖液代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察FoxM1蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 結果判定標準

免疫組化結果判定[5]：FoxM1蛋白的陽性著色表達于細胞質、細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達。①根據著色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色、黑色為3分；②根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。兩種積分相乘總分＜3分為陰性，≥3分為陽性。總分＜3分為“－”表達，3～5分為“+”表達，6～9分為“++”表達，＞9分為“+++”表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.0統-計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier法，組間比較采用Log-rank法；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FoxM 1蛋白表達情況的比較

宮頸癌組織中的FoxM1蛋白陽性表達率為74.44%（67/90），明顯高于對照組的8.89%（4/45），差異有統計學意義（χ2=51.709，P＜0.01）。（表1）

表1 兩組標本中FoxM 1蛋白的表達情況

2.2 宮頸癌組織標本中FoxM 1蛋白表達情況與臨床特征的關系

宮頸癌組織中的FoxM1蛋白陽性表達率與患者的FⅠGO分期、腫瘤分化程度、發生肌層浸潤有關（P＜0.05），與年齡、是否發生淋巴結轉移、是否發生脈管侵犯、是否累及陰道殘端無關（P＞0.05）。（表2）

表2 宮頸癌組織標本中FoxM 1蛋白表達情況與臨床特征的關系[ n（%）]

2.3 宮頸癌組織標本中FoxM 1蛋白表達情況與患者預后的關系

FoxM1蛋白陽性表達的宮頸癌患者的5年生存率為44.44%，與陰性表達患者的68.18%比較，差異無統計學意義（P＞0.05），詳見表3；FoxM1蛋白陽性表達的宮頸癌患者的生存時間短于陰性表達患者，差異有統計學意義（P＜0.05），詳見圖1。

表3 宮頸癌組織標本中FoxM 1蛋白表達情況與患者預后的關系[ n（%）]

圖1 宮頸癌組織標本中FoxM 1蛋白表達陽性及陰性患者的生存曲線

3 討論

過早的性生活、多次人工流產、HPV感染等因素，均可以促進宮頸癌的發生。宮頸癌的治療預后并不理想，長期的臨床隨訪研究顯示，宮頸癌患者的治療預后特別是5年生存率不足35%，治療后的病死率或中位生存時間等預后指標均無明顯改善[4-5]。免疫靶向治療或生物學治療方式，已越來越成為臨床上惡性腫瘤的重要輔助治療方式。而通過對于宮頸癌惡性腫瘤的發生發展的分子機制研究，能夠為臨床上宮頸癌的免疫靶向治療提供新的靶點，同時能夠為宮頸癌的高危人群隨訪提供血清學指標。

FoxM1蛋白結構上包含了多個糖蛋白結合配體，同時包含了數個絲氨酸結構，其對于體內氧化應激性蛋白酶的激活作用，能夠促進患者體內腫瘤微環境的改變，導致癌細胞的持續性增殖[6-7]。FoxM1在癌細胞內的過度富集，能夠在癌細胞的轉錄調控方面增加p16或p53等癌基因的轉錄上游啟動子的轉錄活性，促進腫瘤相關蛋白的高翻譯，影響細胞周期非依賴性蛋白激酶的活性，導致癌細胞中G1/S期比例明顯上升，而G0期細胞比例明顯下降[8-9]。近年來相關方面的研究表明，FoxM1蛋白主要表達于胎兒體內的肝腎組織、平滑肌組織及部分神經間質成分中，在成人體內的分化成熟組織中的陽性表達率較低[10-11]。FoxM1蛋白能夠導致乳腺癌、神經視網膜瘤放化療治療敏感性的下降，增加乳腺癌等患者的治療后復發率，同時雖然部分研究揭示了FoxM1蛋白與宮頸癌患者病理特征的關系，但對于其與患者臨床預后的關系研究不足。

本次研究通過免疫組化分析研究發現，在宮頸癌腫瘤組織中可以發現FoxM1蛋白的高表達，其陽性表達率明顯高于正常宮頸上皮組織，提示了FoxM1蛋白可能參與了宮頸癌的病情進展過程中，可能能夠影響癌細胞的基因調控、癌細胞的生物學特征，促進癌細胞的凋亡抑制等過程[12-13]：①FoxM1蛋白的高表達能夠影響到細胞內AKT或者MAPK等信號通路的激活，促進癌細胞對鄰近正常宮頸上皮細胞的浸潤；②FoxM1蛋白能夠促進宮頸上皮間質成分中金屬蛋白酶的激活，促進細胞間質成分的分解，從而為宮頸癌細胞的擴散提供基礎。劉波等[14]在研究了部分宮頸鱗癌患者體內的相關生物學因子譜的表達變化后發現，相比于宮頸癌旁組織，FoxM1蛋白在宮頸癌腫瘤組織中的陽性表達率可平均上升25%以上，且患者的治療預后越差，治療后的無瘤生存期越短，FoxM1蛋白的陽性表達率越高。在探討其與宮頸癌患者臨床特征的關系過程中發現，FoxM1蛋白的表達與宮頸癌患者的FⅠGO分期、腫瘤分化程度、發生肌層浸潤等臨床特征有密切關系，提示FoxM1蛋白能夠明顯促進患者的病情進展，這主要考慮與FoxM1蛋白對癌細胞分化成熟誘導因子的表達影響，促進宮頸上皮細胞對于基底膜組織、宮頸癌旁組織的浸潤有關，但本次研究并未發現FoxM1蛋白的表達對宮頸癌患者的淋巴結轉移或脈管浸潤的影響，這可能與其對于癌細胞黏附能力的影響不足有關。在探討FoxM1蛋白與宮頸癌患者臨床預后關系的過程中發現，FoxM1蛋白陽性表達的宮頸癌患者，其遠期生存預后較差，臨床上可以通過評估FoxM1蛋白的表達為宮頸癌患者的遠期生存預后的預測提供參考。

本次研究的創新性在于探討了FoxM1蛋白的表達與宮頸癌患者遠期生存預后的關系。綜上所述，FoxM1蛋白在宮頸癌組織中高表達，同時與宮頸癌患者的臨床分期等病理特征及生存預后有關。

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