HPLC法測定不同產地附子中主要成分的含量

秦利芬 楊玉琴

摘 要：目的 考察不同產地的西南附子中新烏頭原堿，次烏頭原堿和烏頭原堿的含量。方法 采用HPLC進行測定，色譜柱為Diamonsil C18 柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A為四氫呋喃-乙腈（15∶25）；流動相B為醋酸銨溶液（0.1 mol/L），檢測波長λ=235 nm；流速1 ml/min；柱溫25 ℃。結果 不同產地的西南附子樣品中生物堿類成分的含量有著明顯差異，新烏頭堿的含量以貴州小河的最高為0.17%，貴州興義的最低為0.06%；次烏頭堿的含量以四川江油的最高為0.28%，貴州花江的最低為0.13%；烏頭堿的含量以云南騰沖與貴州水口寺的最高為0.04%，四川江油與貴州龍里的最低為0.01%。結論 西南附子中三種烏頭堿的總含量以四川江油和云南騰沖產者最高。另外，HPLC測定法簡單、易行，可為附子的產區擴大研究提供科學依據。

關鍵詞：西南附子；新烏頭原堿；次烏頭原堿；烏頭原堿；HPLC

中圖分類號：R282.5 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.08.019

文章編號：1006-1959（2018）08-0062-03

Determination of Main Components in Aconite from Different Habitats by HPLC

QIN Li-fen，YANG Yu-qin

（Department of Pharmacy，Children's Hospital Affiliated to Kunming Medical University，Kunming 650228，Yunnan，China）

Abstract：Objective To investigate the content of new aconitine， sub aconitine and aconitine in Aconitum monkshood from different habitats.Methods The chromatographic column is determined by HPLC，the column is Diamonsil C18 column（150mm×4.6 mm，5μm），the mobile phase A is tetrahydrofuran acetonitrile（15：25），the mobile phase B is ammonium acetate solution（0.1mol/L），the detection wavelength is λ=235 nm，the velocity is 1 ml/min，and the column temperature is 25℃.Results The contents of alkaloids in the samples from different habitats were significantly different.The content of neoaconine was 0.17% in Guizhou Xiaohe and 0.06% in Guizhou Xingyi.The content of sanaconine was Sichuan Jiangyou.The highest was 0.28%，and the lowest in Guizhou Huajiang was 0.13%；the content of aconitine was 0.04% in Yunnan Tengchong and Guizhou Shuikou Temple，and the lowest in Sichuan Jiangyou and Guizhou Longli was 0.01%.Conclusion The total content of three aconitines in Aconite in the southwest is highest in Sichuan Jiangyou and Yunnan Tengchong.In addition，the HPLC assay is simple and easy to perform，which can provide scientific basis for the expansion of aconite production areas.

Key words：Aconite；New aconitine；Subaconitine；Aconitine；HPLC

附子為毛莨科植物烏頭的子根的加工品。具有回陽救逆、補火助陽、散寒止痛之功效，為回陽救逆之要藥[1]。研究表明，附子的主要化學成分烏頭堿是其有效成分[2]。有效成分含量的多少直接影響其成方制劑的臨床療效，然而不同的產地對其有效成分含量有一定影響。根據系統分析結果，除四川江油縣為附子的傳統產區外，在全國的適宜產區還包含四川、貴州、云南、陜西、湖南、湖北、甘肅、廣西、江西、安徽等10個省區的336個縣市[3]。本文以附子為對象，以新烏頭原堿、次烏頭原堿和烏頭原堿的含量為指標進行研究，比較不同產地的西南附子中三種生物堿的含量。為西南附子質量評價奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Aglient 1100高效液相色譜儀，包括四元泵、在線脫氣機、自動進樣器， 和DAD檢測器，HP1100/ WIND3D英文工作站（美國安捷倫公司）；0.45 μm 微孔濾膜（天津市津騰實驗設備有限公司）。AE240雙量程電子分析天平，可根據需要進行調整為萬分之一和十萬分之檔（梅特勒-托利多上海有限公司）。

1.2試藥 對照品均購于中國藥品生物制品檢定所；附子藥材均采自西南三省，經貴陽中醫學院生藥教研室王祥培教授鑒定為為毛茛科植物烏頭的子根；甲醇和乙腈為色譜純（德國默克公司）；水為娃哈哈純凈水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相A為四氫呋喃-乙腈（15：25）；流動相B為醋酸銨溶液（0.1 mol/L），洗脫程序為見表1；檢測波長λ=235 nm；流速1 ml/min；柱溫25 ℃；進樣量10 μl[4]。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 取新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿對照品適量，置25 ml容量瓶中，加異丙醇-二氯甲烷（1：1）混合溶液制成濃度為（新烏頭堿：0.2820 mg/ml，次烏頭堿：0.2817 mg/ml，烏頭堿：0.0802 mg/ml）的混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 按照2010版藥典附子項下供試品溶液的制備方法進行制備，即得。

2.3系統適用性試驗 分別取混合對照品溶液、供試品溶液各10 μl，按2.1項下色譜條件進樣。結果：樣品中三種烏頭堿與其他成分完全分離，且分離度大于1.5，理論塔板數按苯甲酰新烏頭堿計算大于3000，見圖1。

2.4樣品含量測定 精密稱取不同產地的附子樣品，按照中國藥典（2010版）附子項下供試品溶液的制備方法進行制備，即得。照2.1項下色譜條件測定，計算含量。結果見表2、圖2～圖3。

3 討論

由圖2知：不同產地的西南附子樣品中生物堿類成分的含量有著明顯差異，新烏頭堿的含量以貴州小河的最高為0.17%，貴州興義的最低為0.06%；次烏頭堿的含量以四川江油的最高為0.28%，貴州花江的最低為0.13%；烏頭堿的含量以云南騰沖與貴州水口寺的最高為0.04%，四川江油與貴州龍里的最低為0.01%。這可能與各地不同的氣候因素有關。采用spss19.0單因素方差分析及SNK多重比較法對不同來源的附子中三種烏頭堿的總含量進行比較分析，結果見圖3，三種烏頭堿總含量高低為：四川江油=云南騰沖>貴州小河=貴州八公里=貴州水口寺>貴州畢節>貴州龍里=貴州花江>貴州興義。四川江油與云南騰沖兩者之間的總含量差異無統計學意義，同為最高，二者類似的原因可能是兩地的氣候和海拔比較相似，而整個貴州地區的都偏低可能與貴州常年的陰雨天氣有關。因為植物有效成分的形成和積累與其生態環境中水質、土壤、光照和氣候等有密切關系[5]。

目前，人們認可的附子產區為傳統產區四川江油。而本實驗對西南不同產地的附子進行含量分析，結果提示，云南騰沖與四川江油的附子兩者之間的總含量差異無統計學意義，同為最高；其他不同產地的附子中，各生物堿的含量有著明顯的差異，可按對附子中各種生物堿的不同需求選擇不同的產地。此結果可為更深層次的研究附子提供科學依據。

參考文獻：

[1]黃兆勝.中藥學[M].北京：人民衛生出版社，2002：225.

[2]張智琳.淺析四逆湯類方治療心力衰竭的特點[J].中華中醫藥雜志，2005，2（4）：225-227.

[3]趙潤懷，王繼永，孫成忠，等.基于TCMGIS-I的道地藥材附子產地適宜性分析[J].中國現代中藥雜志，2006，8（7）：4-8.

[4]國家藥典委員會.中國藥典.Ⅰ部[S].北京：化學工業出版社，2010：178.

[5]何曉曦，孔令提，張澤生，等.不同產地和不同采收期荷葉中生物堿的含量變化[J].天然產物研究與開發，2013，25（5）：652-655，661.

收稿日期：2018-2-9；修回日期：2018-2-22

編輯/成森