提取方法對產朊假絲酵母β-葡聚糖性質的影響

馬 霞，劉藍天，沈 麗，邵 麗,*

（1.上海應用技術大學香料香精技術與工程學院，上海 201418；2.萊博藥妝技術（上海）股份有限公司，上海 200233）

酵母β-葡聚糖（yeast β-glucan，YG）是一種最具生物活性的葡聚糖，與一般糖類不同的是，酵母β-葡聚糖不是線性分子的結構，而是一種獨特的三重超微螺旋結構，所以其免疫功能和生物活性最強[1]。β-葡萄糖的生物活性又取決于其結構、分子質量、純度和構象等[2]。有報道稱免疫反應與β-葡聚糖及其分子結構大小、分支結構修飾、構象和溶解度之間有相關性[3]。產朊假絲酵母（Candida utilis）作為美國食品藥品管理局認證的可食用酵母，其細胞壁中也含有β-葡聚糖[4]，且產朊假絲酵母可以利用工業廢水生產可食用蛋白和β-葡聚糖[5]，有很好的研究價值。

酵母β-葡聚糖的制備過程中，對產朊假絲酵母進行破壁是尤其重要的步驟，葡聚糖的提取純度和得率得益于好的破壁效果。朱益波等[6]采用復合酶解生物法處理啤酒酵母的提取物可減少蛋白質的含量，顯著提高產物的純度，同時使提取物的得率提高到13.7%。Williams等[7]采用高壓微射流均質法制備的酵母β-葡聚糖，既保持了β-葡聚糖的生理活性，又能產業化應用，且得到的分子質量不同于其他方法制備的β-葡聚糖。李紅梅等[8]采用自溶超聲波法提取酵母β-葡聚糖得率是未采用自溶處理的2 倍。β-葡聚糖是大分子的多糖，采用不同的破壁方法，可能會引起多糖鏈不同程度的水解[9-13]，帶來多糖純度、理化性質（分子質量分布）和生物活性的差異。

研究表明不同分子質量的β-葡聚糖具有不同的生理活性[14]。戴宏杰等[15]研究發現，堿提多糖具有良好的自由基清除能力和保濕性能。Liepins等[16]的研究表明不同純度和不同含水量的β-葡聚糖之間的生理活性差別較大，含水量少者有較高的免疫活性。目前有關高壓微射流均質法、超聲波法以及復合酶解法等破壁方法提取酵母β-葡聚糖的相關報道很多，也是主流的提取方法，但關于不同提取方法獲得的酵母β-葡聚糖的理化性質和生理功能之間是否存在差異的相關研究不多。本研究擬采用高壓微射流均質法、超聲波法以及復合酶解法提取產朊假絲酵母的細胞壁多糖，并對其多糖的純度、分子質量分布以及清除自由基能力和保濕性能進行比較研究。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

產朊假絲酵母（CICC 1769） 中國工業微生物菌種保藏管理中心；中性蛋白酶、甘露聚糖酶、巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖及果糖標準品 美國Sigma-Aldrich公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazylradical，DPPH）、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol，BHT） 上海Adamas-beta公司；DMEM（Dulbecco’s modified Eagle medium）培養基（胎牛血清） 美國Gibco公司；二甲基亞砜 北京索來寶科技有限公司；0.5%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸 美國Life Technologies公司；逆轉錄試劑盒 日本TAKARA公司；RNA fast200總RNA極速抽提試劑盒 上海飛捷生物技術有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

Panda Plus高壓均質機 上海杭杰生物科技有限公司；超聲波細胞破碎儀 寧波新芝生物科技股份有限公司；離子色譜儀 沃特世科技（上海）有限公司；八角度激光光散射儀 美國Wyatt公司；傅里葉變換紅外光譜儀 德國Bruker公司；紫外-可見分光光度計上海元析儀器有限公司；CO2細胞培養箱 美國Thermo公司；熒光倒置相差顯微鏡 日本Olympus有限公司；熒光定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國ABI公司。

1.3 方法

1.3.1 酵母β-葡聚糖的提取

以土豆淀粉廢棄液作為培養基培養產朊假絲酵母，收集菌體，用去離子水多次洗滌，用5%（質量分數，下同）的NaCl溶液配制10%的菌懸液，在65 ℃下誘導細胞壁自溶20 h，經離心（4 500×g，10 min）、洗滌后，將沉淀溶解在20 mmol/L pH 7.5磷酸鹽緩沖液（phosphate buあered saline，PBS）中配制成20%待提取液，于90 ℃、130 r/min下高溫振蕩提取6 h，多次洗滌后得細胞壁沉淀（cell wall precipitation，CWP）[17-20]。

1.3.1.1 高壓微射流均質法提取

將CWP配成10%的懸浮液200 mL，使用高壓微射流均質處理CWP的懸浮液，處理壓力為120 MPa，循環6 次，沉淀用蒸餾水洗滌3 次。所得沉淀再次用高壓微射流第2次處理，壓力為150 MPa，循環3 次，沉淀洗滌3 次，再用高壓微射流按第2次處理條件進行高壓微射流第3次處理，10 000 r/min離心10 min得到的沉淀，洗滌3 次后用無水乙醇去脂脫水，Sevag法除蛋白質后進行冷凍干燥，得到酵母β-葡聚糖樣品H-YG。

1.3.1.2 超聲波法提取

將CWP制備成5%的菌懸液，超聲破壁處理，超聲時間60 min，超聲功率800 W，持續1 s、間隔1 s，探頭直徑為25 mm。得到的超聲波破碎液進行干燥濃縮，索氏抽提去除脂質，Sevag法除去蛋白質后冷凍干燥，得到酵母β-葡聚糖樣品U-YG。

1.3.1.3 復合酶解法提取

將CWP用無水乙醇脫水后進行真空干燥和脫脂處理，干燥后的CWP用去離子水配成料液比為1∶20的溶液，分別加入2%的中性蛋白酶和甘露聚糖酶[21]，pH值調為7.0，在50 ℃中酶解60 min。冷卻至室溫后，抽濾除去酶顆粒，濾液進行高溫滅酶處理，10 000 r/min離心10 min，取沉淀洗滌，溶解后，放入MWCO 14000的透析袋中用去離子水透析24 h，每隔6 h換水一次，再經冷凍干燥得到酵母β-葡聚糖樣品E-YG。

1.3.2 酵母β-葡聚糖的理化性質測定

1.3.2.1 酵母β-葡聚糖含量和得率的測定

以葡萄糖為標準，采用苯酚-硫酸法測定樣品中的酵母β-葡聚糖含量[22]，得到標準曲線的回歸方程：Y＝6.010 3X+0.066 5（R2＝0.998 9）。酵母β-葡聚糖得率r按式（1）計算[23]。

式中：mg為酵母β-葡聚糖的質量/g；mj為酵母菌菌體干質量/g。

1.3.2.2 蛋白質、脂質及水分質量分數的測定

采用GB 5009.5—2010《食品安全國家標準 食品中蛋白質的測定》、GB/T 5009.6—2003《食品中脂肪的測定》和GB 5009.3—2010《食品安全國家標準 食品中水分的測定》的方法測定蛋白質、脂質含量及水分質量分數。

1.3.3 紫外光譜分析

用去離子水將多糖配成0.2 mg/mL的溶液，充分溶解后用紫外-可見分光光度計在190～400 nm波長處對樣品進行全掃描。

1.3.4 單糖組成的測定

采用三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA）水解多糖樣品，參照文獻[19-20]的單糖組成分析方法并修改，用離子色譜進行單糖組成的測定。色譜條件：流動相A：去離子水；流動相B：0.25 mol/L NaOH；流動相C：1 mol/L NaAc；采用梯度洗脫，洗脫程序為：0～30 min流動相A、B、C分別為99.2%、0.8%和0%；30.1～40.0 min流動相A、B、C分別為79.2%、0.8%和20.0%；40.1～60.0 min流動相A、B、C分別為20.0%、80.0%和0%；60.1 min流動相A、B、C分別為99.2%、0.8%和0%。流速為0.45 mL/min；上樣量為25 mL；時間120 min。色譜柱為CarboPac PA20陰離子交換分析柱（150 mm×3 mm），LC30柱溫箱溫度為30 ℃，檢測器為ED50A電化學檢測器。

1.3.5 分子質量的測定

參照文獻[24-26]的方法并修改，采用高效體積排阻色譜與多角度激光光散射聯用儀對分子質量進行測定。色譜柱為TSK PWXL 4000和TSK PWXL 6000串聯，檢測器為示差折光檢測器和DAWN8+型激光檢測器。洗脫程序為等度洗脫，流速0.5 mL/min，柱溫35 ℃，流動相為0.15 mol/L的NaNO3和0.05 mol/L的NaH2PO4溶液。用Astra數據分析軟件采集并分析光散射的數據，計算分子質量。

1.3.6 紅外光譜分析

采用KBr壓片法，對多糖樣品在4 000～500 cm?1范圍內進行紅外光譜掃描。

1.3.7 DPPH自由基清除能力的測定

參照文獻[27]的方法，以VC和BHT作為陽性對照組，在517 nm波長處測定吸光度A，按照公式（2）計算DPPH自由基的清除率。

1.3.8 酵母β-葡聚糖體外保濕性能測定

參照文獻[23]的方法并修改，測定0.1%的酵母β-葡聚糖樣品在0～24 h的體外保濕率，同時以去離子水、甘油、聚乙二醇（polyethylene glycol-400，PEG-400）作為對照。

1.3.9 酵母β-葡聚糖對內源性保濕因子生成的影響

1.3.9.1 HaCaT細胞的培養

將處于對數生長期的HaCaT細胞以3×105～4×105個/孔分至6 孔板內，補足DMEM培養基至1.5 mL。待細胞貼壁過夜后，加入低鈣培養基，同時加入10 μg/mL和20 μg/mL的H-YG、U-YG及E-YG。置于37 ℃、5% CO2飽和濕度條件下培養72 h。

1.3.9.2 細胞總RNA的提取

細胞總RNA的提取按照試劑盒說明書的提取步驟進行。

1.3.9.3 RNA的逆轉錄

反應程序：37 ℃，15 min；85 ℃，15 s；4 ℃，60 min。根據逆轉錄試劑盒說明書進行操作，配制20 μL逆轉錄反應體系。

1.3.9.4 實時熒光定量PCR

以逆轉錄的cDNA為模板，選用β-肌動蛋白（β-actin）作為內參基因，以合成的序列對為特異性引物，按照試劑盒說明書進行實時熒光定量PCR擴增。PCR程序為：95 ℃預變性30 s；95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，進行40 個循環。溶解曲線的設置條件：72 ℃，5 min；95 ℃，15 s；60 ℃，15 s；95 ℃，15 s。以2?△△Ct法計算分析數據。

2 結果與分析

2.1 不同提取方法制備酵母β-葡聚糖的比較

2.1.1 樣品理化性質分析

對3 種提取方法制備的酵母β-葡聚糖的得率和多糖、蛋白質、脂質含量以及水分質量分數的測定結果及樣品的色澤和組織形態觀察比較如表1所示。

表1 3 種提取方法的樣品理化性質測定結果Table 1 Physicochemical properties of H-YG, U-YG and E-YG

從表1可以看出，H-YG、U-YG和E-YG樣品中多糖含量分別為97.5、96.7、96.2 g/100 g，都明顯高于酶堿法提取的多糖含量（86.81 g/100 g）[28]：其中用高壓微射流均質法提取得到的H-YG樣品中多糖的得率最高，為19.6%，高于水提β-葡聚糖法的多糖得率（17.3%）[29-30]；凱氏定氮法測定樣品中蛋白質含量的結果顯示樣品中不含蛋白質，樣品純度明顯高于文獻[27]報道的結果；索氏抽提測得脂肪含量為0.03 g/100 g，說明制備的樣品較純，制備過程不僅綠色可行還能得到純度較高的酵母β-葡聚糖；冷凍干燥后的樣品還含有微量的水分；從色澤和組織形態上觀察樣品，發現H-YG呈較淺的米白色絮片狀固體，U-YG為淡黃色的較細的粉末，E-YG為淺黃色的粉末或片狀固體。所以，不同提取方法制備得到的酵母β-葡聚糖樣品顏色和外觀上存在一定的區別。綜上所述，用這3 種方法制備產朊假絲酵母菌β-葡聚糖得率和純度都相對較高，有較好的研究價值。

2.1.2 紫外光譜分析

圖1 H-YG、U-YG和E-YG樣品的紫外全掃描光譜圖Fig. 1 UV scanning spectra of H-YG, U-YG and E-YG

在波長190～400 nm范圍內對H-YG、U-YG和E-YG樣品進行紫外掃描，從圖1中可以看出，H-YG、U-YG和E-YG在280 nm和260 nm處均沒有吸收峰，說明H-YG、U-YG和E-YG中不含有蛋白質和核酸等雜質。所以，酵母β-葡聚糖H-YG、U-YG和E-YG可廣泛應用于純度要求較高的產品中。

2.1.3 單糖組成分析

圖2 混合標準品的單糖組成色譜圖Fig. 2 High performance anion exchange chromatograms of mixed monosaccharide standards

圖3 E-YG樣品的單糖組成色譜圖Fig. 3 High performance anion exchange chromatogram of monosaccharides in E-YG

H-YG、U-YG和E-YG樣品經TFA水解后，采用高效離子色譜測定單糖組成。以E-YG樣品的單糖離子色譜圖為例（圖3），對照圖2混合標準品單糖的圖譜，單糖組成離子色譜圖樣品的出峰時間與其一致，均為14.9 min，對應葡萄糖，說明這3 種提取純化方法得到的H-YG、U-YG和E-YG樣品中不含其他單糖組分，都是由葡萄糖聚合形成的葡聚糖。

2.1.4 紅外光譜分析

圖4 3 種不同制備方法得到的多糖的紅外光譜圖Fig. 4 Infrared spectra of H-YG, U-YG and E-YG

從圖4中可以看出，3 種方法提取的酵母β-葡聚糖的圖譜大致相同，都含有典型的糖類特征吸收峰，在3 336、3 324、3 329 cm?1處有強的—OH吸收峰；在2 925、2 927、2 925 cm?1處有—CH、—CH2的吸收峰；在1 634、1 649、1 649 cm?1處為多糖的水合振動峰。H-YG、U-YG、E-YG分別在1 035、1 039、1 075 cm?1處有吡喃糖的特征吸收峰。在890 cm?1附近的峰為β型的糖苷鍵特征峰。H-YG、U-YG和E-YG圖譜在890 cm?1附近都有吸收，說明H-YG、U-YG和E-YG葡聚糖樣品糖環構型都是β-D-吡喃葡萄糖環。3 種樣品在810 cm?1附近均無吸收峰，證明樣品中沒有甘露糖的存在。

2.1.5 酵母β-葡聚糖的分子質量

表2 3 種提取方法得到的樣品分子質量Table 2 Molecular masses of H-YG, U-YG and E-YG

采用高效體積排阻色譜與多角度激光光散射聯用儀對3 種方法提取的酵母β-葡聚糖進行分子質量分布分析，結果如表2所示。H-YG、U-YG和E-YG的mw分別為1.611×106、4.763×106、2.661×105g/mol，平均分子半徑分別為67.5、33.3、43.7 nm，復合酶解法提取的β-葡聚糖mw較小，說明復合酶解法可能在提取的過程中降解了部分葡聚糖的連接鍵。mw/mn是多糖的多分散系數（d），d值越接近1，說明樣品中分子質量分布的越集中。高壓微射流均質法和超聲波法提取的樣品H-YG和U-YG的mw較為相近，但從多糖的分散系數來看，高壓微射流均質法制備的酵母β-葡聚糖樣品H-YG的分子質量分布窄，而U-YG的分子質量分布較寬，H-YG優于U-YG。同時，可以看到對3 種方法提取的酵母β-葡聚糖的分子半徑也是不同的，說明多糖的分子構象也是存在差異的，進而可能會引起功能之間的差異。超聲波法和復合酶解法提取的樣品U-YG和E-YG的平均分子半徑相差不大。研究表明，大分子質量的β-葡聚糖能夠顯著降低血脂、血糖濃度，保護心血管[30]。綜上分析，H-YG、U-YG和E-YG樣品有應用于降血糖、降血脂等保健食品中的潛力。

2.2 酵母β-葡聚糖清除DPPH自由基的能力

圖5 3 種方法提取樣品對DPPH自由基的清除能力Fig. 5 DPPH radical scavenging capacity of H-YG, U-YG and E-YG

以BHT和VC作為陽性對照物，比較H-YG、U-YG和E-YG清除DPPH自由基的能力。由圖5可以看出，H-YG、U-YG和E-YG樣品都具有DPPH自由基清除能力，隨著樣品質量濃度的增加清除率也逐漸增大。結果表明，產朊假絲酵母的β-葡聚糖都具有DPPH自由基清除能力，有一定的抗氧化活性，不同方法提取得到的樣品之間的抗氧化活性沒有明顯區別，U-YG樣品的DPPH自由基清除能力相對較強，為45.2%，在此結果的基礎上，可以通過酵母β-葡聚糖的增溶提高其自由基清除能力，進一步提高酵母β-葡聚糖在抗氧化活性方面的應用潛力，從而將其廣泛應用于抗氧化產品的開發。

2.3 酵母β-葡聚糖的保濕能力

2.3.1 酵母β-葡聚糖體外保濕能力

圖6 酵母β-葡聚糖的保濕率Fig. 6 Moisture retention capacity of H-YG, U-YG and E-YG

0.1%的酵母β-葡聚糖樣品H-YG、U-YG、E-YG、去離子水、甘油以及PEG-400在0～24 h范圍內的保濕效果如圖6所示。H-YG、U-YG、E-YG、甘油及PEG-400都可以明顯緩解水分的散失，在去離子水中加入這些樣品都可以起到保濕的效果，且都高于彭永健等[23]研究中最佳質量分數5%多糖的保濕率（60%）。PEG-400的保濕效果最強，H-YG和常用的保濕劑甘油在0～8 h的保濕效果相當，但H-YG在8～24 h的保濕效果明顯優于甘油。從24 h的實驗結果可知，保濕效果依次為：PEG-400＞H-YG＞甘油＞E-YG＞U-YG＞去離子水。綜上分析，H-YG有較強的保濕鎖水能力，具有作為需要保持一定濕度的生鮮食品的優良保濕劑的潛力。

2.3.2 酵母β-葡聚糖促進內源性天然保濕因子的生成

圖7 H-YG（A）、U-YG（B）和E-YG（C）樣品對HaCaT細胞分化絲聚蛋白和caspase14表達的影響Fig. 7 Effects of H-YG (A), U-YG (B) and E-YG (C) on the expression of filaggrin and caspase14 in HaCaT cell differentiation marker

選用人皮膚細胞HaCaT來研究β-葡聚糖的內源保濕性能，絲聚蛋白和半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-14（caspase14）在維持表皮細胞的穩態平衡及形成天然保濕因子中起重要作用，可保持角質層的含水量，達到皮膚保濕作用。天然保濕因子的產生又與絲聚蛋白和caspase14的表達有正相關的密切關系。由圖7可知，在低鈣條件下，用樣品H-YG、U-YG和E-YG（10、20 μg/mL）處理細胞72 h，通過實時熒光定量PCR檢測發現，10 μg/mL和20 μg/mL的H-YG、U-YG及E-YG樣品能夠提高人角質形成細胞株HaCaT細胞分化絲聚蛋白和caspase14的表達水平。其中，H-YG樣品在10 μg/mL質量濃度即可顯著促進HaCaT細胞分化絲聚蛋白和caspase14的表達。從圖7可以看出，樣品H-YG、U-YG和E-YG都具有促進內源性天然保濕因子生成的功能，H-YG樣品的促進天然保濕因子表達生成作用最為明顯，綜上分析，對HaCaT細胞分化絲聚蛋白和caspase14的促進表達效果依次為：H-YG＞E-YG＞U-YG，高壓微射流均質法提取的酵母β-葡聚糖H-YG可從源頭上對細胞起到較好的保濕效果，在生鮮食品等領域中具有非常好的應用前景。

3 結 論

本實驗比較了高壓微射流均質法、超聲波法及復合酶解生物法提取產朊假絲酵母β-葡聚糖所得H-YG、U-YG和E-YG的理化性質、功能特性（抗氧化和保濕性能）等的差異。3 種方法都屬于比較天然綠色的提取方法，單從提取純度上講，3 種方法都適合酵母β-葡聚糖的提取。通過比較分析，發現這3 種方法提取的β-葡聚糖在提取率、分子質量分布、多糖的分散系數以及平均分子半徑上都存在差異，進而表現為H-YG、U-YG和E-YG清除DPPH自由基能力和保濕性能的不同。β-葡聚糖作為長鏈的多糖分子，采用不同的破壁方法可能會引起多糖鏈的不同程度的水解，帶來多糖理化性質和生物活性的差異。本實驗為酵母β-葡聚糖的應用及后續進一步了解其結構和功能的關系、研究多糖的初級結構和高級結構（鏈構象）提供了一定的理論依據。

[1] OLIVEIRA K S M, DI BASTIANI M, CORDEIRO L M C, et al.(1→6)- and (1→3)(1→6)- β-glucans from Lasiodiplodia theobromae MMBJ: structural characterization and pro-inflammatory activity[J].Carbohydrate Polymers, 2015, 133: 539-546. DOI:10.1016/j.carbpol.2015.07.060.

[2] BSZCZYK K, WILCZAK J, HARASYM J, et al. Impact of low and high molecular weight oat beta-glucan on oxidative stress and antioxidant defense in spleen of rats with LPS induced enteritis[J]. Food Hydrocolloids, 2015, 51: 272-280. DOI:10.1016/j.foodhyd.2015.05.025.

[3] NYMAN A A, AACHMANN F L, RISE F, et al. Structural characterization of a branched (1→6)-α-mannan and β-glucans isolated from the fruiting bodies of Cantharellus cibarius[J]. Carbohydrate Polymers, 2016, 146: 197-207. DOI:10.1016/j.carbpol.2016.03.052.

[4] BENITO-ROMAN O, ALONSO E, COCERO M J, et al. β-Glucan recovery from Ganoderma lucidum by means of pressurized hot water and supercritical CO2[J]. Food and Bioproducts Processing, 2016, 98:21-28. DOI:10.1016/j.fbp.2015.12.007.

[5] BZDUCHA-WRBEL A, BAEJAK S, MOLENDA M, et al. Erratum to: biosynthesis of β-(1,3)/(1,6)-glucans of cell wall of the yeast Candida utilis, ATCC 9950 strains in the culture media supplemented with deproteinated potato juice water and glycerol[J]. European Food Research and Technology, 2015, 240(6): 1281-1282. DOI:10.1007/s00217-014-2406-6.

[6] 朱益波, 翟麗君, 朱明, 等. 啤酒廢酵母中β-D-葡聚糖非降解提取工藝[J]. 食品科學, 2011, 32(20): 121-125.

[7] WILLIAMS R, DIAS D A, JAVASINGHE N, et al. Beta-glucandepleted, glycopeptide-rich extracts from brewer’s and baker’s yeast(Saccharomyces cerevisiae) lower interferon-gamma production by stimulated human blood cells in vitro[J]. Food Chemistry, 2016, 197:761-768. DOI:10.1016/j.foodchem.2015.11.015.

[8] 李紅梅, 王偉潔, 侯堃, 等. 自溶超聲波耦合法提取啤酒廢酵母中β-1,3-D-葡聚糖[J]. 精細化工, 2014, 31(1): 45-49. DOI:10.13550/j.jxhg.2014.01.008.

[9] KIM K S, YUN H S. Production of soluble β-glucan from the cell wall of Saccharomyces cerevisiae[J]. Enzyme & Microbial Technology,2006, 39(3): 496-500. DOI:10.1016/j.enzmictec.2005.12.020.

[10] RIEDER A, KNUTSEN S H, BALLANCE S. In vitro, digestion of beta-glucan rich cereal products results in extracts with physicochemical and rheological behavior like pure β-glucan solutions-a basis for increased understanding of in vivo eあects[J]. Food Hydrocolloids, 2017, 67: 74-84. DOI:10.1016/j.foodhyd.2016.12.033.[11] YIN H F, FAN G J, GU Z X. Optimization of culture parameters of selenium-enriched yeast (Saccharomyces cerevisiae) by response surface methodology (RSM)[J]. LWT-Food Science and Technology,2010, 43(4): 666-669. DOI:10.1016/j.lwt.2009.11.010.

[12] 劉松, 董曉芳, 佟建明. 多糖提取和抗氧化活性評價方法的研究現狀和進展[J]. 動物營養學報, 2016, 28(11): 3391-3399. DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2016.11.004.

[13] ZHU F, DU B, XU B. A critical review on production and industrial applications of β-glucans[J]. Food Hydrocolloids, 2016, 52: 275-288.DOI:10.1016/j.foodhyd.2015.07.003.

[14] ROCA C, CHAGAS B, FARINHA I, et al. Production of yeast chitin-glucan complex from biodiesel industry byproduct[J].Process Biochemistry, 2012, 47(11): 1670-1675. DOI:10.1016/j.procbio.2012.04.004.

[15] 戴宏杰, 孫玉林, 楊梅語, 等. 擬目烏賊生殖腺堿提多糖的抗氧化及吸濕保濕特性[J]. 食品科學, 2016, 37(2): 31-38. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201602006.

[16] LIEPINS J, KOVACOVA E, SHVIRKSTS K, et al. Drying enhances immunoactivity of spent brewer’s yeast cell wall β-D-glucans[J].Journal of Biotechnology, 2015, 206: 12-16. DOI:10.1016/j.jbiotec.2015.03.024.

[17] FREIMUND S, SAUTER M, KAPPELI O, et al. A new non-degrading isolation process for 1,3-β-D-glucan of high purity from baker’s yeast Saccharomyces cerevisiae[J]. Carbohydrate Polymers, 2003, 54(2):159-171. DOI:10.1016/s0144-8617(03)00162-0.

[18] KOYAMA Y, ZHAO R, IKE M, et al. Candida utilis, assimilates oligomeric sugars in rice straw hydrolysate via, the Calcium-Capturing-by-Carbonation (CaCCO) process for glutathione- and cellbiomass production[J]. Bioresource Technology, 2014, 172: 413-417.DOI:10.1016/j.biortech.2014.08.097.

[19] MOKHTARI S, JAFARI S M, KHOMEIRI M. The cell wall compound of Saccharomyces cerevisiae, as a novel wall material for encapsulation of probiotics[J]. Food Research International, 2017, 96:19-26. DOI:10.1016/j.foodres.2017.03.014.

[20] 劉紅芝, 王強, 周素梅, 等. 酵母β-葡聚糖的功能活性及其分離提取研究進展[J]. 食品科學, 2006, 27(11): 552-556. DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2006.11.138.

[21] 趙月菊, 薛燕芬, 馬延和. β-甘露聚糖酶的結構生物學研究現狀和展望[J]. 微生物學報, 2009, 49(9): 1131-1137. DOI:10.13343/j.cnki.wsxb.2009.09.001.

[22] 宋博, 趙峽, 李國強. 1 種南海軟珊瑚多糖的提取、分離及活性評價[J]. 中國海洋藥物, 2016, 35(5): 1-6. DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2016.05.001.

[23] 彭永健, 張安強, 馬新, 等. 玉竹多糖超聲提取工藝優化及其保濕性研究[J]. 食品科學, 2012, 33(14): 96-99.

[24] 唐川, 吳迪, 楊焱, 等. 猴頭菌細胞壁多糖的提取和其結構特征[J].食品與生物技術學報, 2016, 35(8): 871-877. DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2016.08.013.

[25] SHAO L, WU Z, ZHANG H, et al. Partial characterization and immunostimulatory activity of exopolysaccharides from Lactobacillus rhamnosus KF5[J]. Carbohydrate Polymers, 2014, 107(1): 51-56.DOI:10.1016/j.carbpol.2014.02.037.

[26] WANG Y J, MAINA N H, EKHOLM P, et al. Retardation of oxidation by residual phytate in purified cereal β-glucans[J]. Food Hydrocolloids,2017, 66: 161-167. DOI:10.1016/j.foodhyd.2016.11.019.

[27] 楊學山, 祝霞, 李潁, 等. 葡萄酒泥酵母制備水溶性β-D-葡聚糖工藝優化及其純化后抗氧化性分析[J]. 食品科學, 2016, 37(14): 24-31.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201614005.

[28] 宮艷艷, 徐學明. 不同提取方法對酵母葡聚糖性質的影響[J]. 食品工業科技, 2008(9): 162-165. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2008.09.035.

[29] 潘妍, 吳昊, 羅晶杰, 等. β-葡聚糖提取分離工藝及其分子量測定研究[J]. 食品科學, 2009, 30(20): 49-52.

[30] LIU X Y, WANG Q, CUI S W, et al. A new isolation method of β-D-glucans from spent yeast Saccharomyces cerevisiae[J].Food Hydrocolloids, 2008, 22(2): 239-247. DOI:10.1016/j.foodhyd.2006.11.008.