高效液相色譜法測定刺梨果酒中維生素C含量

彭小東，李紅洲，陳大鵬，王 歡，常 茜，張 建

(1.貴州省產品質量監督檢驗院，貴陽550013；2.貴州工業職業技術學院，貴陽550008；3.貴州師范大學，貴陽550025)

刺梨（Rosa roxburghiiTratt）是一種具有很高營養價值的水果，富含各種維生素、氨基酸、多糖及微量元素，更有“維C之王”的稱號，每100 g刺梨中維生素C的含量高達2200～2500 mg[1]。刺梨發酵型果酒的酒精度普遍較低，保留了刺梨中的維生素、氨基酸和礦物質等營養元素[2]，比以糧食酒為原料的蒸餾酒有更高的營養價值[3-4]，具有調節人體新陳代謝、促進血液循環、控制體內膽固醇水平、抗衰老等醫療保健作用[5-6]。測定刺梨果酒中的維生素C含量可以為刺梨果酒的開發利用提供參考。現行國家標準GB 5009.86—2016中維生素C的測定方法有：高效液相色譜法、熒光法、2，6-二氯靛酚滴定法[7]。其中高效液相色譜法具有高效、穩定、適用廣等特點，本研究通過對高效液相色譜法測定刺梨果酒中維生素C含量，為刺梨果酒的維生素C提供科學的檢測參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

試樣：某酒類公司生產的刺梨果酒。

試劑：維生素C標準物質：Dr Ehrenstorfer GmbH 公司，CAS：50-81-7；草酸、鹽酸、磷酸、偏磷酸、磷酸二氫鉀均為分析純。

儀器設備：Aglient 1260 II高效液相色譜儀（配紫外檢測器），美國安捷倫公司；混勻振蕩器，Heidolph公司；SB25-12DTD超聲波清洗機，寧波新芝生物科技股份有限公司；移液器，德國普蘭德公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱，Poroshell 120 EC-C18柱(100mm×4.6mm×2.7 μm，美國安捷倫公司)；流動相，0.5% 的磷酸二氫鉀溶液，pH2.0～3.0；流速，1 mL/min；進樣量，10 μL；柱溫，35 ℃；紫外檢測器，檢測波長：250 nm。

1.2.2 標準曲線的繪制

準確稱取維生素C標準物質1.0 g（精確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，超純水溶解并定容，得100 mg/mL的標準使用液，用超純水逐級進行梯度稀釋，獲得2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100 μg/mL標準工作液。

1.2.3 樣品前處理

準確移取1 mL的刺梨果酒樣品于50 mL的容量瓶中，用提取試劑定容至刻度，超聲振蕩提取10 min，過0.22 μm的水系膜，待上機。

1.2.4 計算公式

維生素C含量的計算，見式（1）：

式（1）中：X為樣品中維生素C的含量，mg/L；C為標準曲線定量的樣品維生素C的濃度，μg/mL；C0為空白的維生素C的濃度，μg/mL；V為定容體積，mL；v為取樣體積，mL；d為稀釋倍數。

2 結果與分析

2.1 標準曲線及線性方程

維生素C標準曲線見圖1，由圖1可知，維生素C在0.5～20 μg/mL濃度范圍內線性良好，回歸方程：Y=31.74429X-1.52931，相關系數r=0.9994。

圖1 維生素C的標準曲線

2.2 方法的精密度及檢出限

精密度：對同一濃度的維生素C標液連續6次進樣測定，根據峰面積計算其精密度，結果見表1。

由表1數據可知，6次重復測定的相對標準偏差為0.73%，保留時間穩定（圖2），均在1.652 min，表明該方法的重現性良好。

檢出限：以3倍信噪比（S/N）的計算檢出限，在取樣量為1 mL時，維生素C的方法檢出限為0.99 mg/L。

2.3 不同提取試劑對刺梨果酒中維生素C含量測定的影響

分別以2%的草酸、鹽酸、磷酸、偏磷酸作為提取試劑，對刺梨果酒中的維生素C含量進行測定，并對其進行加標回收試驗，加標量為100 μg/mL，實驗結果見表2。

表1 維生素C測定方法的精密度

表2 不同提取試劑對刺梨果酒中維生素C含量測定的影響

圖2 10 μg/mL維生素C標準溶液疊加色譜圖（n=6）

如表2所示，草酸和偏磷酸作為提取試劑時，測得刺梨果酒中維生素C結果較為一致，且較之其他兩種提取試劑的測定數據要高，鹽酸次之，磷酸最低，RSD為0.33%～1.20%，表明不同提取試劑對刺梨果酒中維生素C測定結果有影響。

4種提取試劑的加標回收率在96.7%～104.8%之間，回收率良好，數值相近。

2.4 不同提取濃度對刺梨果酒中維生素C含量測定的影響

實驗采用不同濃度梯度（0.5%、1%、5%、8%、10%）的提取劑，考察其對刺梨果酒中維生素C含量測定的影響，結果見表3。

如表3所示，從提取劑的濃度來看，草酸、偏磷酸均在8%時，測定結果最大，分別為78.4%和79.1%，鹽酸在1%時最大，三者差異不大。磷酸則隨濃度的升高，測定結果不斷升高，在8%、10%濃度時達到最高，但較之其他幾種提取試劑的測定結果有很大差異，只有提取效果最好組（8%的偏磷酸）的76.5%，其RSD值較之其他幾種提取試劑也較大，表明磷酸提取效果不好。

表3 不同濃度的提取劑對維生素C測定結果的影響

3 結論

采用超聲振蕩提取，高效液相色譜，紫外檢測器檢測，測定刺梨果酒中的維生素C含量。結果表明：該方法線性良好（r=0.9994），重現性較佳（RSD=0.73%），回收率高（96.7%～104.8%）；草酸、偏磷酸提取劑均在8%的濃度下提取效果最佳，鹽酸在1%的濃度時效果最好，三者的提取最佳值相近；磷酸提取效果不好，提取最高值只有效果最好組（8%的偏磷酸）的76.5%，且提取濃度要求高；因此，結合提取效果及經濟效益（提取濃度）考慮，可選用1%的鹽酸作為提取劑。該方法操作簡單、快捷、重現性好、回收率高，適用于刺梨果酒中維生素C的檢測。

[1]熬芹,谷曉平,孟維亮.貴州刺梨研究進展[J].耕作與栽培,2010(6)：1-3.

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[7]中華人民共和國衛生和計劃生育委員會.食品安全國家標準食品中抗壞血酸的測定：GB 5009.86—2016[S].北京：中國標準出版社,2017.