白酒中鄰苯二甲酸酯檢測方法的優化

張立嚴，李艷敏

(北京順鑫農業股份有限公司牛欄山酒廠質量檢測中心，北京順義101300)

白酒是我國的傳統飲料酒，風格獨特、歷史悠久，在每個發展時期，都蘊藏著不同的文化信息，傳播著不同的時代特色和民族風情。近年來，由于某些食品中被檢測出含有鄰苯二甲酸酯類成分，已經引起了社會對于塑化劑導致食品安全危機的強烈關注。

塑化劑(plasticizer)是一類鄰苯二甲酸酯類，廣泛應用于PVC及食品塑料包裝中，比如方便面餐盒、塑料飲料瓶、食品包裝袋等塑料制品中，可有效增加產品的可塑性、柔韌性和膨脹性，其毒性是三聚氰胺的20倍[1-4]。通過對白酒生產過程的全面跟蹤、檢查，了解到白酒的塑化劑屬于特定遷移。白酒中主要成分是乙醇，鄰苯二甲酸酯類在乙醇中遷移率較高，且在白酒的儲、運、銷過程中，不可避免地產生塑化劑的遷移。因此，對白酒中塑化劑檢測、產生原因分析與控制顯得尤為重要[5-7]。

GB 5009.271—2016《食品安全國家標準食品中鄰苯二甲酸酯的測定》標準中規定了內標法和外標法，兩種方法的前處理均較為繁瑣，所以本實驗參照國標方法GB 5009.271—2016中的內標法和文獻[9]，分析前處理中超聲、離心等過程所產生的影響因素，并結合白酒檢測中的實際情況，選擇簡便且合適的前處理方法，摸索出檢測白酒中鄰苯二甲酸酯類塑化劑的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑

樣品：50%vol乙醇溶液，加入一定量鄰苯二甲酸酯類混標，使其濃度約為0.6 mg/kg。

試劑：16種鄰苯二甲酸酯類混標（約1000 μg/mL，1 mL）、鄰苯二甲酸二丁酯-D4內標、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯-D4內標，上海安譜公司；正己烷（色譜純）；超純水。

1.2 儀器與設備

氣相色譜-質譜聯用儀（安捷倫公司，GC 7890A-5975C，配備7693自動進樣器）；萬分之一電子天平（梅特勒公司）；渦旋混合器；超聲波清洗器、離心機。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗條件

色譜條件：DB-5MS石英毛細柱（30.0m×0.25mm×0.25 μm）；進樣口溫度260℃；升溫程序：初始柱溫60℃，保持1 min，以20℃/min升溫至220℃，保持1 min，再以5℃/min升溫至250℃，保持1 min，再以20℃/min升溫至290℃，保持7.5 min；不分流進樣，進樣量為1μL；載氣為高純氦氣（純度≥99.999%），流速為1.0 mL/min。

質譜條件：色譜與質譜接口溫度為280℃；MS電離方式為EI，電子能量70 eV，離子源溫度230℃；容積延遲7 min；選擇離子掃描模式（SIM）。

1.3.2 標準溶液的配制

16種鄰苯二甲酸酯標準中間液（10 μg/mL）：準確吸取16種鄰苯二甲酸酯類混標（1000 μg/mL）1 mL于100 mL容量瓶中，加入正己烷并準確定容至刻度。

1.3.3 標準系列工作液的配制

兩種同位素的鄰苯二甲酸酯內標溶液（100μg/mL）：準確稱取兩種內標各0.01 g（精確到0.0001 g）于100 mL容量瓶中，用正己烷溶解并準確定容至刻度。

兩種同位素的鄰苯二甲酸酯內標的標準使用液（10 μg/mL）：準確吸取兩種內標溶液（100 μg/mL）10 mL于100 mL容量瓶中，用正己烷溶解并準確定容至刻度。

準確吸取一定量的鄰苯二甲酸標準中間液（10 μg/mL），用正己烷稀釋，配制成濃度為0.0 μg/mL、0.02 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的標準系列溶液，同時加入內標標準使用液（10 μg/mL），使內標濃度為0.15 μg/mL左右，臨用時配制。

1.3.4 樣品前處理

（1）完全依照國標中的前處理方法

準確稱取試樣1.0 g（精確至0.0001 g）于50 mL具塞玻璃離心管中，加入2 mL的蒸餾水，分別加入 30 μL DBP-D4、DEHP-D4 內標標準使用液（10 μg/mL），渦旋混勻，再準確加入10 mL正己烷，渦旋1 min，劇烈振搖1 min，超聲提取30 min，1000 r/min離心5 min，取上清液，供GC-MS分析。同時做空白實驗。

（2）除不進行離心過程外，均按上述前處理步驟進行。

（3）除不進行離心和超聲過程外，均按上述前處理進行。

2 結果與討論

2.1 標準曲線的制作

在本實驗條件下，將標準系列工作液分別注入氣相色譜-質譜聯用儀中，測定相應的鄰苯二甲酸酯的色譜峰面積，以標準系列工作液的質量濃度為橫坐標，以相應定量離子的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

各組分線性相關系數r為0.9990～0.9999，結果見表1。

表1 各組分相關系數

2.2 前處理方法的比對與選擇

依據國標中內標法進行樣品分析，并對樣品前處理進行具體比較，同一樣品采用3種不同前處理方式進行處理，所得結果如表2。樣品中各組分含量均為0.60 mg/kg。

第一組實驗為1.0 g樣品中加入2 mL蒸餾水、10 mL正己烷。第一組實驗數據的相對偏差見表3。

表2 第一組不同前處理方法各組分結果 (mg/kg)

從表2、表3可以看出，3種前處理方法所得數據結果差異不大，但不離心、不超聲的前處理方法所得的結果略低于經過超聲和離心處理的樣品結果，可能的原因是在超聲或離心的過程中導致了溶劑正己烷的揮發，所以結果略有偏高。加入10 mL正己烷進行萃取時，樣品濃度稀釋倍數增大，導致結果偏差也較大。

表3 第一組實驗數據的相對偏差

第二組實驗為1.0 g樣品中加入2 mL蒸餾水、2 mL正己烷，前處理方法不做超聲和離心處理。結果見表4。

由表4可看出，在加入相同體積的蒸餾水時，稀釋倍數小的樣品數據結果相對偏差低于稀釋倍數高的樣品，且檢測結果接近真實值。

對兩組實驗結果進行分析總結，離心、超聲過程與直接萃取的檢測白酒中鄰苯二甲酸酯含量無明顯影響，但離心和超聲過程中容易造成溶劑的揮發，最終導致結果的偏高。因此，將國標中的前處理方法進行簡化，對結果的影響不顯著。

2.3 優化后的方法回收率

選擇本廠的4個典型白酒樣品進行加標回收實驗，加標濃度分別為0.4 mg/kg和0.8 mg/kg，結果見表5。

對4個白酒樣品分別進行加標，采用優化后的前處理方法，由表5可知，加標濃度為0.4 mg/kg的樣品各組分回收率在81.75%～118.55%之間，加標濃度為0.4 mg/kg的樣品各組分回收率在84.67%～115.55%之間。

2.4 精密度實驗

表4 第二組實驗數據結果及相對偏差

根據簡化的檢測方法測定1#、3#加標樣品，參照國標中精密度要求為：在重復性條件下獲得的2次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。結果見表6。

結果表明，依據該方法測定1#、3#加標樣品，2次測定結果各組分的精密度在0.53%～3.84%之間，均符合國標要求。

2.5 多次測定結果的相對偏差

根據優化的檢測方法測定2#加標樣品，連續測定10次，計算其相對標準偏差，結果見表7。

該樣品10次測定結果的相對標準偏差均小于5%，說明該方法的重復性較好。

3 結論

本實驗參照國標GB 5009.271—2016《食品安全國家標準食品中鄰苯二甲酸酯的測定》中內標法對白酒中鄰苯二甲酸酯含量進行檢測。針對特定實驗對象，對國標方法中的前處理方法進行比對分析，研究出適合測定白酒中鄰苯二甲酸酯的簡化實驗方法，取消了標準中離心和超聲的前處理過程，并大大縮短了樣品處理的時間。該方法采用質譜選擇離子監測方式（SIM），根據各鄰苯二甲酸酯類物質的主要特征離子的相對豐度及保留時間定性，內標法定量。在線性范圍內，方法具有良好的重復性、回收率，操作簡便、快速、靈敏度高，對白酒中鄰苯二甲酸酯的檢測和白酒產品質量的控制提供技術指導，對維護白酒食品的安全具有一定的促進作用。

表6 精密度實驗結果

表7 相對標準偏差

[1]靳秋梅,孫增榮.鄰苯二甲酸酯類化合物的生殖發育毒性[J].天津醫科大學學報,2004,10(S1)：15-18.

[2] 郭春海,薄海波,賈海濤,等.食品接觸材料PVC中32種增塑劑在4食品模擬物中的遷移規律研究[J].包裝工程,2011,32(7)：9-13.

[3] 孫海燕.3種脂溶性溶劑對PVC膜中鄰苯二甲酸酯類增塑劑溶出量的測定[J].科技信息,2010(33)：15-16.

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[5]曹國慶.白酒中塑化劑的危害與檢測方法概述[J].科技資訊,2012(36)：74-75.

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[8]衛生部辦公廳關于通報食品及食品添加劑鄰苯二甲酸酯類物質最大殘留量的函：衛辦監督函[2011]551號[A].2011.

[9] 邵棟梁.GC-MS法測定白酒中鄰苯二甲酸酯殘留量[J].化學分析計量,2010,19(6)：33-35.