微生態(tài)制劑對(duì)肉雞禽流感和新城疫免疫影響的試驗(yàn)研究

魏園園

（遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 沈陽110164）

規(guī)模化養(yǎng)殖易引起肉雞體內(nèi)微生物菌群平衡失調(diào)，降低肉雞的抗病能力，導(dǎo)致肉雞疾病頻發(fā)，進(jìn)而加劇各類預(yù)防藥物和治療藥物在肉雞產(chǎn)品生產(chǎn)中的大量使用，成為威脅肉產(chǎn)品的品質(zhì)和安全的重要因素[1-4]。因此，肉雞的自身健康是生產(chǎn)高品質(zhì)肉產(chǎn)品的重要保障。肉雞在長期的進(jìn)化過程中，胃腸道內(nèi)的微生物與宿主形成了穩(wěn)定的共生關(guān)系，保持了肉雞體內(nèi)的微生態(tài)平衡，具有抵御致病微生物侵害的功能，使肉雞保持良好的抗病能力[5-7]。但是，工業(yè)化養(yǎng)殖造成的肉雞應(yīng)激、抗生素濫用對(duì)腸道有益菌群的殺滅以及日糧構(gòu)成不合理等多種不利因素均可造成肉雞體內(nèi)的微生態(tài)紊亂[8]，進(jìn)而導(dǎo)致各類惡性疾病的頻發(fā)，對(duì)食品安全帶來嚴(yán)重威脅[9]。

微生態(tài)菌劑是綠色的飼料添加劑，具有調(diào)整并維持腸道內(nèi)正常的微生態(tài)平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫、促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收等多種功能，并能改善飼料轉(zhuǎn)化率、促進(jìn)肉雞生長發(fā)育[10-13]。朊假絲酵母菌具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡、提高飼料消化率、增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力等作用。此外，由于產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞富含維生素B和蛋白質(zhì)，還能提供動(dòng)物所需的部分營養(yǎng)物質(zhì)。其蛋白質(zhì)和維生素B的含量都比產(chǎn)朊假絲酵母高，它能以尿素作為氮源，在培養(yǎng)基中不需要加入任何生長因子即可生長。它能利用五碳糖和六碳糖，能利用糖蜜、木材水解液等生產(chǎn)出可食用的蛋白質(zhì)。

本文通過在肉雞日糧中添加一定量的微生態(tài)制劑，研究飼喂微生態(tài)制劑對(duì)肉雞注射毒株禽流感和新城疫疫苗后的對(duì)血凝抑制抗體滴度水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間地點(diǎn) 本試驗(yàn)于2017年5月22日至7月22日在丹東某大型雞場(chǎng)進(jìn)行，共計(jì)61 d。

1.2 試驗(yàn)材料 微生態(tài)制劑，主要成份：產(chǎn)朊假絲酵母菌≥5.0×106cfu/g由沈陽科豐生物科技（集團(tuán)）有限公司提供。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取快大型白羽肉雞AA+健雛2 200只，隨機(jī)分為5組，即疫苗對(duì)照組、微生態(tài)制劑對(duì)照組、微生態(tài)制劑Ⅰ組、微生態(tài)制劑Ⅱ組和微生態(tài)制劑Ⅲ組。每組2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)220只雞。微生態(tài)制劑組和對(duì)照組均采用常規(guī)方式飼養(yǎng)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案如表1，新城疫疫苗免疫于7日齡和22日齡進(jìn)行，其余的免疫程序按遼寧省畜牧局推薦免疫程序進(jìn)行。

表1 不同毒株禽流感疫苗的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案Table 1 The experiment design of different strains of avian influenza vaccines

1.4 試驗(yàn)疫苗

1.4.1 重組禽流感H5N1亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6，RE-8株） 哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，生產(chǎn)日期20170405，批號(hào)2017021。采用頸部皮下注射，注射劑量按0.3 mL/羽操作。

1.4.2 禽流感（H9）亞型滅活疫苗（SD696株） 哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，生產(chǎn)日期20161009，生產(chǎn)批號(hào)2016006。采用胸部肌肉注射，注射劑量按0.3 mL/羽操作。

1.4.3 雞新城疫弱毒疫苗 齊魯動(dòng)物保健有限公司。

1.5 主要試劑和儀器96孔V型微量反應(yīng)板，微量移液器、阿氏（Alsevers）液、Ph 7.2 0.01 mol/L PBS磷酸緩沖液、1%雞紅細(xì)胞懸液、抗原。

1.6 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.6.1 新城疫和禽流感免疫水平的測(cè)定 根據(jù)GB/T 18936-2003《高致病性禽流感診斷技術(shù)》方法，分別于2、7、14、21、28、35、42、49、56日齡采血測(cè)定血凝和血凝抑制抗體水平，每組隨機(jī)采取10只肉雞，采血前禁水禁食12 h，心臟采血或翅靜脈采血1 mL，將血液在2 500 r/min下離心10 min，分離血清于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6.2 免疫抑制試驗(yàn)測(cè)定抗體水平的測(cè)定 每孔加生理鹽水25 μL，在第一列空加25 μL抗體，2倍梯度稀釋，最后一列不加抗體，作空白對(duì)照，每孔加25 μL抗原，搖晃一下，每孔加25 μL 1%紅細(xì)胞懸液，反應(yīng)40 min，觀察結(jié)果。

1.7 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同日齡肉雞 H 5 N 1亞型Re- 6株抗體效價(jià)情況表2為含母源抗體雞群免疫H5N1亞型Re-6株疫苗后抗體的消長規(guī)律。從表2可知，第2日齡的雞群母源抗體滴度最高，隨著個(gè)體發(fā)育時(shí)間的增加，抗體滴度水平呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)；在第10日齡進(jìn)行疫苗免疫后，抗體水平仍繼續(xù)呈降低趨勢(shì)；第21日齡是母源抗體滴度的轉(zhuǎn)折點(diǎn)，疫苗對(duì)照組的抗體滴度水平急劇下降，而微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅱ組的抗體滴度水平降低幅度小，極顯著高于疫苗對(duì)照組（P＜0.01），使雞群具有較高的抗體滴度水平；疫苗免疫后28日齡時(shí)，疫苗對(duì)照組和微生態(tài)制劑組的抗體滴度開始增加，微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅱ組抗體滴度的增加幅度極顯著高于疫苗對(duì)照組（P＜0.01）。第35、40日齡時(shí)，疫苗對(duì)照組和微生態(tài)制劑組抗體仍保持較高的滴度水平，第49日齡時(shí)，疫

苗對(duì)照組的抗體出現(xiàn)明顯的下降，微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅱ組的抗體水平極顯著高于疫苗對(duì)照組（P＜0.01）。第56日齡時(shí)，微生態(tài)制劑Ⅱ組的抗體滴度水平顯著高于疫苗對(duì)照組（P＜0.05）。同時(shí)通過微生態(tài)制劑對(duì)照組可以看出，在沒有進(jìn)行疫苗免疫的情況下，直到21日齡的時(shí)候，對(duì)于H5N1亞型Re-6株疫苗后抗體仍能具有較高的抗體水平。

表2 不同日齡肉雞H5N1亞型Re-6株抗體效價(jià)（log2）Table 2 The valence of antibody of H5N1 Re-6 strain in different age Dorking

表3 不同日齡肉雞H5N1亞型Re-8株抗體效價(jià)（log2）Table 3 The valence of antibody of H5N1 Re-8 strain in different age Dorking

綜上所述，采用H5N1亞型Re-6株疫苗進(jìn)行免疫可以提高抗體滴度水平，在疫苗免疫的同時(shí)添加微生態(tài)制劑可以使H5N1亞型Re-6株疫苗抗體滴度水平增加，并保持較長的時(shí)間。

2.2 不同日齡肉雞 H 5 N 1亞型Re- 8株抗體效價(jià)情況表3為含母源抗體雞群免疫H5N1亞型Re-8株疫苗后抗體的消長規(guī)律。從表中可知，第2日齡的雞群母源抗體滴度具有較高的水平；第7日齡時(shí)，使用微生態(tài)制劑的微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅱ組仍保持較高的抗體滴度水平，并極顯著高于疫苗對(duì)照組（P＜0.01）；在第10日齡疫苗免疫后，抗體水平繼續(xù)呈降低趨勢(shì)，第21日齡是母源抗體滴度的轉(zhuǎn)折點(diǎn)，疫苗對(duì)照組和微生態(tài)制劑組的抗體滴度水平急劇下降，且疫苗對(duì)照組和微生態(tài)制劑Ⅱ組無抗體滴度，微生態(tài)制劑Ⅰ組的抗體滴度與疫苗對(duì)照組呈極顯著性差異（P＜0.01）；第28日齡時(shí)，疫苗對(duì)照組和微生態(tài)制劑Ⅱ組抗體滴度不變化，而微生態(tài)制劑Ⅰ組抗體滴度增加，與對(duì)照組呈極顯著性差異（P＜0.01）；第35日齡時(shí)，微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅱ組的抗體滴度開始增加，與疫苗對(duì)照組呈極顯著性差異（P＜0.01），第40、49、56日齡時(shí)，微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅱ組仍保持較高的抗體滴度水平，并極顯著高于而疫苗對(duì)照組的抗體水平（P＜0.01）。

微生態(tài)制劑對(duì)照組在前14日齡時(shí)，對(duì)于H5N1亞型Re-8株疫苗抗體滴度具有較高的水平，從21日齡開始，微生態(tài)制劑對(duì)照組和疫苗對(duì)照組對(duì)H5N1亞型Re-8株疫苗抗體滴度水平均呈下降的趨勢(shì)。

綜上所述，采用H5N1亞型Re-8株疫苗進(jìn)行免疫后的抗體滴度水平不明顯，但飼喂微生態(tài)制劑仍能使機(jī)體內(nèi)H5N1亞型Re-8株疫苗保持一定的抗體滴度水平，使抗體滴度增加并保持較長的時(shí)間。

2.3 不同日齡肉雞 H 9亞型SD696株抗體效價(jià)情況表4為含母源抗體雞群免疫H9亞型SD696株疫苗后抗體的消長規(guī)律。從表中可知，第2日齡的雞群母源抗體滴度最高，隨著個(gè)體發(fā)育時(shí)間的增加，抗體滴度水平在第7日齡時(shí)呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)；在第10日齡免疫疫苗后，抗體水平繼續(xù)呈降低趨勢(shì)；第14日齡時(shí)，微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅲ組的抗體水平高于疫苗對(duì)照組極顯著性差異（P＜0.01）。第21日齡是母源抗體滴度的轉(zhuǎn)折點(diǎn)，疫苗對(duì)照組和微生態(tài)制劑Ⅲ組的抗體滴度水平急劇下降，但微生態(tài)制劑Ⅰ組的抗體滴度極顯著高于其他組（P＜0.01）；從第28日齡開始疫苗的抗體水平均呈下降趨勢(shì)，但與疫苗對(duì)照組相比，微生態(tài)制劑Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅲ組的疫苗抗體水平較高，其中微生態(tài)制劑Ⅲ組的疫苗抗體水平均極顯著高于疫苗對(duì)照組（P＜0.01）。

表4 不同日齡肉雞H9亞型SD696株抗體效價(jià)（log2）Table 4 The valence of antibody of H9 SD696 strain in different age Dorking

微生態(tài)制劑對(duì)照組在前14日齡時(shí)，對(duì)于H9亞型SD696株疫苗抗體滴度具有較高的水平，從28日齡開始，微生態(tài)制劑對(duì)照組對(duì)H9亞型SD696株疫苗抗體滴度水平均呈下降的趨勢(shì)。

綜上所述，采用H9亞型SD696株疫苗進(jìn)行免疫后會(huì)增加一定的抗體滴度水平，疫苗免疫的同時(shí)添加微生態(tài)制劑可以提高H9亞型SD696株疫苗抗體滴度水平，并使抗體滴度水平保持較長的時(shí)間。

2.4 新城疫抗體效價(jià)水平情況 疫苗對(duì)照組沒飲用微生態(tài)制劑產(chǎn)品，其他各組都飲用微生態(tài)制劑產(chǎn)品；所有各組都在7、22日齡用齊魯產(chǎn)的新城疫疫苗進(jìn)行新城疫免疫，因此試驗(yàn)第1天和第7天檢測(cè)的指標(biāo)為母源抗體指標(biāo)。

表5 免疫后不同日齡新城疫抗體效價(jià)（log2）Table 5 The valence of antibody of ND vaccine in different age of Dorking

結(jié)果如表5所示，疫苗對(duì)照組在1～7 d的飼養(yǎng)階段，新城疫抗體效價(jià)呈下降趨勢(shì)，而微生態(tài)制劑組肉雞則出現(xiàn)略微上升趨勢(shì)，此階段并未打任何疫苗，因此新城疫抗體效價(jià)來自于母源抗體，各微生態(tài)制劑組新城疫抗體效價(jià)均高于對(duì)照組。在第7天時(shí)，進(jìn)行新城疫免疫，在首免后第一次檢測(cè)新城疫抗體效價(jià)時(shí)，發(fā)現(xiàn)新城疫抗體值呈下降趨勢(shì)，在21日齡時(shí)，各處理組新城疫抗體有上升趨勢(shì)，其中飼喂微生態(tài)制劑的試驗(yàn)組新城疫抗體效價(jià)在21日齡時(shí)均高于對(duì)照組。

在第22日齡時(shí)對(duì)肉雞進(jìn)行第二次新城疫免疫，在第28日齡時(shí)檢測(cè)新城疫抗體效價(jià)指標(biāo)，結(jié)果顯示，疫苗對(duì)照組新城疫抗體效價(jià)比21日齡時(shí)有所提高，但微生態(tài)制劑組卻比21日齡時(shí)有所下降；在第35日齡時(shí)，疫苗對(duì)照組新城疫抗體效價(jià)未檢出，飼喂微生態(tài)制劑的試驗(yàn)組新城疫抗體極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。在40～56日齡階段，肉雞新城疫抗體效價(jià)呈增長趨勢(shì)，其中疫苗對(duì)照組在56日齡時(shí)，已經(jīng)達(dá)到最高值10，這可能是因?yàn)樵谠囼?yàn)后期，由于疫苗對(duì)照組大批雞感染新城疫，肉雞機(jī)體本身應(yīng)對(duì)疾病時(shí)所產(chǎn)生的抗體。

白軍等[13]在2013年的研究中報(bào)道過，當(dāng)新城疫抗體效價(jià)達(dá)到4log2時(shí)，攻毒保護(hù)率為80%，當(dāng)抗體水平≥5log2時(shí)，攻毒保護(hù)率為100%。微生態(tài)制劑對(duì)照組其新城疫抗體水平在0～14日齡時(shí)呈下降趨勢(shì)，但其數(shù)值顯示，其功毒保護(hù)率達(dá)到80%以上，在21日齡時(shí)升高，在隨后的28和35日齡檢測(cè)過程中新城疫抗體效價(jià)變化較小，于40日齡時(shí)下降，隨后于40～56日齡階段升高。整體來看，微生態(tài)制劑對(duì)照組在不進(jìn)行新城疫免疫的情況下，其對(duì)新城疫病毒的功毒保護(hù)率在80%以上，表明微生態(tài)制劑對(duì)新城疫具有抑制作用。

3 結(jié)論

本研究分別選用禽流感H5N1亞型Re-6株、H5N1亞型Re-8株和H9亞型SD696株疫苗進(jìn)行免疫，并與同時(shí)添加微生態(tài)制劑的試驗(yàn)組進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明，禽流感H5N1亞型Re-6株和H9亞型SD696株疫苗產(chǎn)生的抗體滴度水平較高，并且添加微生態(tài)制劑的試驗(yàn)組可以提高疫苗產(chǎn)生的抗體滴度，在一定程度上使抗體滴度保持較長的時(shí)間，且提高機(jī)體對(duì)禽流感病毒的免疫能力。

對(duì)新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果表明，飼喂微生態(tài)制劑對(duì)新城疫病毒有抑制作用，可以使雞對(duì)新城疫病毒的保護(hù)率提高到80%以上，因此，飼喂微生態(tài)制劑對(duì)肉雞的新城疫免疫抗體提高具有一定的促進(jìn)作用。

[1]張敏，裴蕾，張?chǎng)?不同微生態(tài)制劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、養(yǎng)分消化率和腸道菌群的影響[J].飼養(yǎng)試驗(yàn)，2017，38（3）：28-32.

[2]周亞強(qiáng)，崔一喆，武超，等.復(fù)合微生態(tài)制劑的制備及其對(duì)雛雞生長性能的影響[J].飼料工業(yè)，2017,38（23）：45-51.

[3]江興華，陳玉文，趙華娥，等.雞新城疫、禽流感（H9N2 HP株）二聯(lián)滅活疫苗在商品蛋雞和商品肉雞上的免疫效果[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2017，（2下)：128-130.

[4]郭永祥，劉道新，邱立新，等.禽流感免疫預(yù)防的探討[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（5）：85-88.

[5]雷彩俠，李俊平，李啟紅，等.禽流感滅活疫苗（H5N2,N28株）和重組禽流感滅活疫苗（H5N1,Re-1株）免疫雞和鴨后抗體消長規(guī)律的比較研究[J].中國獸藥雜志，2006，40（2）：9-13.

[6]邱權(quán)，詹志春，周櫻，等.飼料中微生態(tài)制劑應(yīng)用研究[J].飼料工業(yè)，2016，37（2）：55-58.

[7]程小果，王慧，程寧，等.新城疫的合理免疫機(jī)常見疫苗使用誤區(qū)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，37（6）：116-120.

[8]吳延功，丁國義，宋翠平，等.新城疫的流行特點(diǎn)與防控措施[J].中國家禽，2012，34（5）：5-7.

[9]韓青松，盧星梅，段龍川，等.新城疫的流行于防控[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58（10）：1842-1845.

[10]申杰，趙娜，魏金濤，等.飲水型復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能、血清生化指標(biāo)及腸道菌群的影響[J].飼料工業(yè)，2016，37（23）：32-36.

[11]章振華，李林，沈佳，等.雞新城疫-傳染性支氣管炎-禽流感（H9亞型）三聯(lián)滅活疫苗對(duì)H9亞型禽流感流行毒株保護(hù)效果[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（9）：11-14.

[12]劉穎，唐秀英，吳鳳鳴.禽流感疫苗的研究進(jìn)展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，31（2）：86-89.

[13]白軍，劉淑紅，焦鐵軍，等.雞新城疫、禽流感（H9亞型）二聯(lián)油乳劑滅活疫苗免疫效力試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（3）：58-61.