高效液相色譜/二極管陣列法快速測定炒瓜子中糖精鈉與安賽蜜

◎ 顏 慧，楊 嘉，王 帥，于 浩

（揚州市產品質量監督檢驗所，江蘇 揚州 225000）

瓜子是日常生活中常見的休閑炒貨食品[1]。糖精鈉和安賽蜜因其甜度高的特點被廣泛地添加到食品中，從而增加食品的甜味，提高口感度，但過量添加食用有害人體健康[2]，因而我國規定了糖精鈉、安賽蜜的使用限量和檢測方法[3]。目前檢測甜味劑的方法有非水滴定法[4]、熒光檢測法[5]、分光光度計法[6]、液相色譜法[7]、離子色譜法[8]、色譜-質譜儀聯用法[9]超高效液相色譜-串聯質譜法[10]等。在食品的檢測工作中，國家標準規定的糖精鈉的檢測方法為GB 5009.28-2016[11]，安賽蜜的檢測方法為GB/T 5009.140-2003[12]，暫時還沒有針對瓜子樣品的分離方法，致使在檢測炒瓜子中的糖精鈉時，易形成重疊峰[13]，影響分離和定量。本法完善部分色譜條件，對炒瓜子中糖精鈉、安賽蜜進行液相色譜分離測定，8 min分離一個樣，可得到滿意的結果。

1　材料與方法

1.1　試劑與儀器

甲醇（色譜純）；乙酸鋅、亞鐵氰化鉀均為分析純；糖精鈉（GBW15001）、安賽蜜（GBW1001711601）標準儲備液；實驗室用水均為一級去離子水；乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取乙酸銨1.54 g，加水定容至1 000 mL，0.22 μm微孔濾膜過濾。

Agilent1260型高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent C18柱4.6 mm×150 mm；超聲振蕩器；真空泵（附抽濾裝置）；電子分析天平：感量0.000 1 g；0.22 μm水相微孔濾膜；高速離心機。

1.2　色譜條件

Agilent C18柱4.6 mm×150 mm；檢測波長230 nm；柱溫25 ℃；進樣量10 μL；甲醇-乙酸銨流動相比例為16∶84（V/V），流速0.60 mL/min。

1.3　樣品前處理

瓜子連殼打碎、混勻，稱取約2.5 g樣品（精確到0.000 1 g）于50 mL比色管中，加水30 mL，斡旋震蕩2 min，超聲萃取20 min，分別加入乙酸鋅溶液（220 g/L）和亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）2.5 mL，加水定容至刻度，靜置沉淀30 min，取上清液10 000 r/min離心5 min，過0.22 μm微孔濾膜，濾液待液相色譜上機測定。

1.4　測定

1.4.1糖精鈉和安賽蜜標準溶液配制

依次吸取糖精鈉溶液標準物質GBW15001（1.00 mg/mL）、安賽蜜溶液標準物質GBW1001711601（1.00 mg/mL）各 0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 mL 和1.50 mL于10 mL容量瓶中，定容至刻度，再從配制成0.01 mg/mL的容量瓶中吸取100 μL、500 μL溶液定容至10 mL，配制成糖精鈉、安賽蜜混合標準溶液系列濃度為 0.000 1、0.000 5、0.005、0.010、0.025、0.050、0.100 mg/mL和0.150 mg/mL。

1.4.2樣品測定

取樣品處理液自動進樣10 μL，以保留時間定性，根據外標法峰面積定量。

計算公式：

公式中，X為樣品測得的含量，單位g/kg；C為由標準曲線得出樣液中待測物濃度，單位mg/mL；V為樣品定容體積，單位mL；M為樣品質量，單位g；0.7563為兩結晶水糖精鈉標準物質與無結晶水糖精的換算系數。

2　結果與分析

2.1　液相色譜圖

所得糖精鈉、安賽蜜標準色譜圖及試樣圖如圖1、圖2所示。

圖1　糖精鈉、安賽蜜標準品的液相色譜圖（0.000 1 mg/mL）

圖2　含糖精鈉、安賽蜜的瓜子試樣的液相色譜圖

2.2　標準曲線線性關系

糖精鈉、安賽蜜混合標準溶液系列濃度為0.000 1、0.000 5、0.005、0.010、0.025、0.050、0.100 mg/mL 和0.150 mg/mL，進樣10μL進行高效液相色譜分析，用峰面積與濃度進行線性回歸，糖精鈉回歸方程分別為Y=41053.4382Amt+0，R=0.99997；安賽蜜回歸方程為Y=54678.1382Amt+0，R=0.99995，方程線性關系良好。

2.3　最低檢出限

取相對濃度較低的標準樣品進行20次檢測，用峰面積計算標準偏差，以3倍標準差，計算出最低檢出限為0.002 g/kg。

2.4　樣品精密度實驗

連續用此方法平行測定樣品，進行6次測定，結果見表1，相對標準偏差為3.11%～5.33%。

表1　精密度測定結果表

2.5　樣品加標回收率測定

稱取2.5 g均勻樣品在標準曲線范圍內加入低、中、高3個濃度的2種標準物質，按照1.3進行樣品前理。對樣品連續分析2次，2種標準物質加標回收率實驗結果見表2。糖精鈉低濃度添加水平回收率為96.9%，中濃度添加水平回收率為98.7%，高濃度添加水平回收率為99.4%，安賽蜜低濃度添加水平回收率為101.7%，中濃度添加水平回收率為98.3%，高濃度添加水平回收率為97.8%，結果表明該方法回收率在95%～110%，符合實驗室準確度要求。

表2　樣品加標回收實驗結果表

2.6　市場抽樣檢測結果

采用本方法，從市場上抽取30份炒瓜子樣品，對樣品中的糖精鈉和安賽蜜進行了檢測，每次樣品平行測定2次，結果保留兩位有效數字，其測定結果見表3。

表3　實際樣品的測定結果表（n=2，g/kg）

3　結語

在優化后的色譜條件下，本方法對炒瓜子中糖精鈉、安賽蜜進行色譜分析，能夠快速測定瓜子中糖精鈉與安賽蜜的含量，很好解決了國標方法中測定炒瓜子中糖精鈉峰拖尾和分離不全的問題，并且該方法樣品處理簡單，重復性和選擇性好，適用于快速測定炒瓜子中的糖精鈉與安賽蜜，可滿足日常快速檢測需求。