血清脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白和白細胞介素-17水平與2型糖尿病患者下肢動脈粥樣硬化病變的相關性研究

劉 瑋，鄭亞虹，沈 穎，許慕蓉，萬麗娟，陳明衛

糖尿病下肢動脈粥樣硬化病變(Lower extremity atherosclerotic disease，LEAD)是糖尿病最常見的慢性并發癥之一。在我國根據踝肱指數(ankle-brachinal index，ABI)檢查，50歲以上患者中LEAD患病率高達6.9%～23.8%。LEAD的發病機制較為復雜，目前公認的病理機制包括內皮功能的損害、氧化應激等。近年來，免疫炎癥在LEAD發病中的作用日益受到重視[1]。脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白(adiopocyte fatty acid binding protein，A-FABP)體內分布廣泛，主要是在脂肪細胞和巨噬細胞中表達，在調節脂肪酸的轉運、巨噬細胞轉化為泡沫細胞以及炎癥因子的釋放過程發揮重要作用[2]，與肥胖和代謝綜合征密切相關。白細胞介素-17(interleukin-17， IL-17)主要表達于外周記憶性CD4+T細胞以及血管內皮細胞、嗜酸性粒細胞等，是一種新近發現的強大的促炎細胞因子[3]。目前已有報道A-FABP、IL-17與動脈粥樣硬化疾病密切相關[4-5]，但對2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)合并LEAD中的A-FABP、IL-17濃度變化尚不清楚。該研究通過檢測T2DM合并LEAD患者血清A-FABP、IL-17水平改變，分析A-FABP、IL-17與LEAD發病之間的相關性，以期為T2DM合并LEAD的臨床防治提供指導。

1 材料與方法

1.1病例資料選取2015年10月～2016年8月在安徽醫科大學第一附屬醫院內分泌科住院的臨床診斷為T2DM的患者129例，其中男74例，女55例，年齡39～75(58.82±13.33)歲。根據ABI檢查結果將入選的129例患者分為無下肢動脈粥樣硬化病變組(NLEAD組，n=90)(0.9≤ ABI<1.3)和合并下肢動脈粥樣硬化病變組(LEAD組,n=39)(ABI<0.9)。另選擇性別、年齡匹配的40例健康人群作為對照組 (NC組)，均來自于同一時間來本院進行健康體檢人群。所有研究對象均無急慢性感染性疾病、惡性腫瘤、肝功能異常以及自身免疫性疾病。本研究經安徽醫科大學第一附屬醫院醫學倫理委員會批準，并獲取受試者知情同意。

1.2研究方法

1.2.1資料收集 收集患者性別、年齡、病程，測量收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、身高、體質量，計算體質量指數(BMI)=體質量/身高2(kg /m2) 。

1.2.2生化指標檢測 所有受試者經10 h的空腹過夜，抽肘靜脈血測定血總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹C肽(FCP)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平。采用李霞 等[6]方法根據FCP及FBG，用穩態模型計算胰島素抵抗[HOMA-IR (CP)=1.5+FBG(mmol/L)×FCP(pmol/L)/2 800]及胰島功能[HOMA-islet (CP)=0.27×FCP(pmol/L)/(FBG(mmol/L)-3.5)+50]。

1.2.3ABI的測量 患者取平臥位，將袖帶分別綁扎于上臂及踝上，采用日本ES-1000spm多普勒血流探測儀探頭測量足背、脛后及肱動脈收縮壓值，肱動脈收縮壓取雙側肱動脈收縮壓的高值，一側踝動脈收縮壓取足背與脛后動脈收縮壓的高值，一側踝動脈收縮壓與肱動脈收縮壓的比值即為該側的ABI。

1.2.4血清A-FABP、IL-17的測定 清晨空腹抽取研究對象靜脈血5 ml，調整離心機至2 500 r/min、4 ℃的情況下，對樣本進行10 min的離心，所得血清存放在-80 ℃的冰箱中保存待測。檢測前放置-4 ℃的冰箱中解凍30 min，通過酶聯免疫測定法(ELISA)分別測定血清A-FABP、IL-17的濃度。操作過程嚴格參照試劑盒說明書。

2 結果

2.1三組間一般臨床資料與血清A-FABP、IL-17水平的比較三組間性別、年齡、BMI、DBP、TC、TG、HDL-c、BUN比較，差異無統計學意義；NLEAD組與LEAD組間在FCP、HOMA-IR、HOMA-islet方面比較，差異無統計學意義。與NC組比較，NLEAD組、LEAD組的SBP、LDL-c、HbA1C、A-FABP、IL-17濃度均顯著升高(P<0.05)。此外，LEAD組中SCr也顯著高于NC組(P<0.05)，而NLEAD組血Cr與NC組則差異無統計學意義；與NLEAD組比較，LEAD組中病程、SBP、LDL-c、血Cr、HbA1c、FBG、A-FABP、IL-17濃度均顯著增高(P<0.05)。見表1。

2.2A-FABP、IL-17與其他因素的相關分析Pearson相關分析顯示，A-FABP與BMI、HbA1c、SBP、HOMA-IR、Scr、IL-17呈正相關，r值分別為0.224、0.164、0.147、0.183、0.173、0.203，P值分別為0.008、0.031、0.048、0.017、0.024、0.011；而A-FABP與年齡、病程、TC、TG、HDL-c、FCP、FBG、BUN、HOMA-islet均無明顯相關性。IL-17與LDL-c、HbA1c、SBP呈正相關，r值分別為0.162、0.255、0.152，P值分別為0.047、0.001、0.042；與HOMA-islet呈負相關，r值為-0.204，P值為0.013；而IL-17與年齡、病程、BMI、TC、TG、HDL-c、FCP、FBG、BUN、Cr、HOMA-IR均無明顯相關性。

表1 三組間一般情況及生化指標的比較

與NC組比較：*P<0.05；與NLEAD組比較：#P<0.05；P1值：三組間比較；P2值：NLEAD組與LEAD組比較

2.3LEAD的Logistic逐步回歸分析在T2DM患者中(包括LEAD組及NLEAD組)，在單因素分析基礎上，以有無LEAD為應變量，單因素分析P<0.1的變量為候選變量(包括年齡、病程、SBP、BMI、HbA1c、LDL-c、Cr、HOMA-islet、A-FABP、IL-17)基礎上，進行Logistic回歸分析，結果顯示LDL-c、A-FABP、IL-17為 LEAD發病的獨立危險因素。見表2。

表2 LEAD危險因素的Logistic回歸分析

3 討論

近年研究顯示，多種脂肪因子、炎癥因子的水平改變與T2DM及其慢性并發癥的發生發展密切相關。本研究顯示，T2DM組血清A-FABP、IL-17水平較NC組均顯著升高，相關分析顯示，A-FABP與胰島素抵抗呈正相關，IL-17與胰島功能指數呈負相關關系，提示A-FABP、IL-17均可能參與T2DM發病過程。然而在最近發表的一些研究中，卻沒有發現T2DM與健康對照人群中A-FABP、IL-17水平存在顯著差異[7-8]。可能與種族差異、研究對象選擇不同等因素有關。

有研究[9]顯示T2DM合并大血管病變患者血清IL-17水平明顯增高，但該研究納入的大血管病變除了LEAD以外，還包括心腦血管疾病，因此對T2DM合并LEAD血清IL-17水平的變化仍不清楚。目前關于T2DM合并LEAD患者血清A-FABP變化的研究甚少。最近發表的一項研究[10]顯示，T2DM合并周圍血管病變患者血清A-FABP水平較無周圍血管病變患者顯著增高，并與女性患者周圍血管病變發病關系更加密切。本研究顯示，LEAD組A-FABP、IL-17水平均顯著高于NLEAD組，Logistic回歸分析表明，A-FABP、IL-17均是影響LEAD的獨立危險因素，可使LEAD的發病風險分別增加1.945倍和2.372倍，提示T2DM患者中，A-FABP、IL-17與LEAD的發生發展密切相關。此外，相關分析顯示，A-FABP 與BMI、HbA1c、SBP、HOMA-IR均呈正相關；IL-17與LDL-c、HbA1c、SBP均呈正相關關系；A-FABP 與IL-17呈正相關，提示A-FABP、 IL-17作為脂肪因子/促炎細胞因子，彼此之間可能存在交互影響，并可通過與多種心血管危險因素相互作用，參與到LEAD發病進程中[5,10]。

目前有關A-FABP、IL-17參與LEAD的發生、發展的具體機制尚未闡明。目前研究顯示，動脈粥樣硬化是血脂紊亂與炎癥反應共同參與的慢性疾病。巨噬細胞中A-FABP過表達，可使三酰甘油和膽固醇沉積，形成泡沫細胞，促進動脈粥樣硬化的形成，此效應可能與A-FABP調控腫瘤壞死因子α、巨噬細胞炎癥蛋白-1α、單核細胞趨化蛋白-1等炎癥因子、化學趨化因子產生與炎癥反應有關[11]。在肥胖小鼠體內A-FABP基因敲除可以對抗動脈粥樣硬化，改善胰島素抵抗及脂代謝異常。IL-17與IL-17受體結合后，調節免疫應答，可誘導白介素-6、腫瘤壞死因子-α、趨化因子等的表達，產生致炎作用，促進炎癥進程[3]。在T2DM大鼠模型中，主動脈內膜中IL-17 mRNA及蛋白表達增加，IL-17可參與血管內膜損傷以及大血管病變的炎癥反應過程[12]。體外實驗發現，IL-17能上調或協同基質金屬蛋白酶-9、γ-干擾素、C反應蛋白表達[13-15]。

導致LEAD發生的危險因素眾多，目前公認的危險因素主要包括血糖、血壓、吸煙、糖尿病病程、脂代謝紊亂、慢性腎臟病等[16]。在本組資料中LEAD組的SBP、LDL-c、Cr、HbA1c、FBG水平均較NLEAD組增高，Logistic回歸分析表明，LDL-c是影響LEAD的獨立危險因素，表明嚴格控制血壓、血脂及血糖，預防慢性腎臟病發生對降低LEAD發生風險有積極的作用。

總之，本研究顯示，T2DM合并LEAD患者外周血A-FABP、IL-17水平明顯增加，A-FABP、IL-17可能參與LEAD的發病過程，具體的致病機制有待進一步研究闡明。

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