IL-6基因多態性對小兒全身炎癥反應綜合征治療的指導意義觀察

周啟新 郝金斗 劉培輝

全身炎癥反應綜合征是一種臨床上常見的危重癥, 病情進展后可發展為多器官功能障礙綜合征, 嚴重者還會導致多器官功能衰竭, 早期診斷與治療是改善全身炎癥反應綜合征預后及阻止炎癥損傷的關鍵［1］。IL-6基因多態性與IL-6血清水平相關聯, 而且與全身炎性反應綜合征的發生發展密切相關［2］。本研究針對IL-6基因多態性對小兒全身炎癥反應綜合征治療的影響進行探討, 報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇 2016年 12 月～2017年12月入住醫院治療的50例全身炎癥反應綜合征患兒作為觀察組, 另選取同期50例體檢正常的健康兒童作為對照組。所有研究對象家長均對本研究知情, 且簽署了知情同意書；全身炎癥反應綜合征患兒符合相關的診斷標準。觀察組中男27例,女 23例；年齡 0.22～5.50歲 , 平均年齡 (3.65±1.82)歲。對照組中男28例, 女22例；年齡0.25～5.52歲, 平均年齡(3.62±1.76)歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 ①標本采集：留取2 m l兩組研究對象的外周靜脈血, 觀察組在入院后第 2天清晨空腹時留取, 對照組在清晨空腹體檢時留取。1 m l外周靜脈血采用E D T A-N a2抗凝, 另1 m l外周靜脈血在室溫的條件下放置60 min, 在2000 r/min轉速下離心 10 min后留取血清, 并置于-20℃的冰箱中凍存以待備檢。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法對血清I L-6水平進行測定［3］。②單核細胞的D N A提取：采用飽和酚-氯仿法來提取抗凝外周靜脈血的基因組 D N A。③引物設計：根據 I L-6基因-572位點的對應基因序列來設計引物, 其中上5 GTGGGCTGAAGCAGGTGAA, 下游引物5’CTrTGTTGGAGGGTGAGGGT, 均由上海生物工程公司完成合成。④聚合酶鏈式反應(P C R)反應體系與反應條件程序：P C R的總反應體積為 30 μl, 其中有 1 μl模板 D N A(500 n g)、3 μl 10×B u f e r、3 μl 1.5 m m o l/L M g C l2、1 μl 10 m m o l/L d N T P、1 μl上游引物和 1 μl下游引物 (20 μm o l/L)、1.5 μg T a q D N A聚合酶、18.5 μl d d H2O。P C R的反應條件：于96℃的條件下進行預變性5 min, 于96℃下進行預變性40 s, 63℃下進行預變性40 s, 72℃下進行預變性50 s, 共 33個循環, 最后在72℃時延伸10 min。⑤P C R產物檢測：取8 μl P C R產物進行染色, 上樣于含適量的溴化乙錠(E B)2%的瓊脂糖凝膠, 穩壓為140 V, 行15～20 min電泳后進行檢測, 在凝膠成像儀上對擴增結果進行觀察并記錄拍照, 并結合 D N A分子量標準對是否為目的片段進行判斷。⑥I L-6基因提取、擴增。提取外周血白細胞D N A, 設計特異引物, 應用P C R技術擴增目的基因, 應用限制片斷長度多態分析聚合酶鏈反應方法(RFLP/PCR)對兩組I L-6基因D 358 A/C和183 G/A位點多態性及其單體型進行分析。

1.3 觀察指標 觀察比較兩組的C C基因型頻率、G G基因型頻率、C G基因型頻率、G等位基因頻率及I L-6水平。

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差±s)表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組I L-6基因頻率與等位基因頻率比較 觀察組C C基因型頻率低于對照組, G G基因型頻率、C G基因型頻率高于對照組, 差異均有統計學意義(P＜0.05)。觀察組G等位基因頻率明顯高于對照組, 差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組I L-6基因頻率與等位基因頻率比較［n(%)］

2.2 兩組I L-6水平比較 觀察組I L-6水平(292.32±85.43)n g/L高于對照組的(79.32±24.75)n g/L, 差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組I L-6水平比較(±s, n g/L)

表2 兩組I L-6水平比較(±s, n g/L)

注：與對照組比較, aP＜0.05

組別 例數 I L-6水平觀察組 50 292.32±85.43a對照組 50 79.32±24.75 t 16.9337 P<0.05

3 討論

目前, 對全身炎癥反應綜合征的病因尚未完全明確, 相關研究認為, 全身炎癥反應綜合征是由環境因素和遺傳因素共同作用而形成的多因子病［4］。IL-6是一種臨床上常見的細胞因子, 且血清中的IL-6濃度變化可作為全身炎癥反應綜合征的發展與預后的判斷指標, IL-6對各種類型的淋巴細胞分裂和成熟均具有一定的促進作用, 細胞毒性T淋巴細胞(CTL)與NIA細胞免疫活性提高, 進而增強了兒童免疫力［5］。當出現全身炎癥反應綜合征的相關臨床癥狀時, 患兒血液中的IL-6水平會明顯升高。

本研究數據顯示, 觀察組CC基因型頻率低于對照組, GG基因型頻率、CG基因型頻率高于對照組, 差異均有統計學意義(P＜0.05)。觀察組G等位基因頻率明顯高于對照組, 差異有統計學意義(P＜0.05)。觀察組IL-6水平(292.32±85.43)ng/L高于對照組的(79.32±24.75)ng/L, 差異有統計學意義(P＜0.05)。結果說明：全身炎癥反應綜合征患兒的IL-6基因啟動子區-572C/G多態性分布和健康兒童比較存在差異。G等位基因可能是全身炎癥反應綜合征患兒的遺傳易感基因, 且G等位基因的攜帶者可能因血清 IL-6水平升高而提高了全身炎癥反應綜合征的發病率。分析原因可能為：人的IL-6基因位于第7號染色體上, 全長為5 kb, 其含有內含子4個、外顯子5個, 對其編碼區、上下游序列研究后發現, IL-6基因多態性主要存在的位置為啟動子區-572 G/C、-597 G/A、-174 G/C、-373 AnTn。從理論上說, IL-6的-572 G/C、-597 G/A、-174 G/C、-373 AnTn基因多態性都可能是基因結合序列發生改變, 通過減弱或增強基因表達的調控和表達的水平,進而對人群疾病易感性產生影響［6］。IL-6的-572 G/C、-597 G/A、-174 G/C、-373 AnTn基因多態性會對IL-6的轉錄產生影響, 且和較多疾病中的IL-6水平的特征性升高存在密切的相關性。-572位點的 C/G多態性與-174位點的G/C多態性均和炎癥性的疾病相關, 全身炎癥反應綜合征發病和IL-6基因-174位點 G/C的多態性及-572位點C/G的多態性具有密切的相關性。進而說明全身炎癥反應綜合征的發生和IL-6基因-572 C/G的多態性具有相關性［7,8］。

綜上所述, IL-6基因多態性和全身炎癥反應綜合征疾病的發病存在相關性, 且血清IL-6水平還會對基因多態性產生影響。

［1］藍海欣.布洛芬治療小兒全身炎癥反應綜合征的臨床觀察.當代醫學, 2015, 21(23):127-128.

［2］李國華, 李秀瓊, 羅敏, 等.小劑量肝素對全身炎癥反應綜合征患兒血TNF-α、IL-6的影響.鄂州大學學報, 2016, 23(2):108-109.

［3］周啟新, 郝金斗, 李寧.IL-6R基因SNP及單體型與小兒SIRS的關聯研究.吉林醫學, 2017, 38(7):1274-1276.

［4］劉培輝, 楊躍萍, 鄒嶸, 等.IL-6基因多態性與小兒全身炎癥反應綜合征的相關性研究.中國微生態學雜志, 2011, 23(1):24-27.

［5］焦秀紅.白細胞介素-6受體基因多態性與漢族兒童哮喘易感性的相關性.中國婦幼保健, 2017, 32(12):2682-2684.

［6］包進.新生兒全身炎癥反應綜合征與IL-10基因多態性的相關性研究.吉林大學, 2005.

［7］包進.新生兒全身炎癥反應綜合征與IL-10基因多態性的相關性研究.中國優生與遺傳雜志, 2006, 14(10):11-13.

［8］鄒新英, 劉培輝, 楊躍萍, 等.白細胞介素-6基因-174G/C多態性與小兒全身炎癥反應綜合征的相關性研究.中國婦幼保健, 2011, 26(12):1873-1875.