兒童肺炎支原體肺炎肺泡灌洗液中細胞因子分析

郭偉，張同強，徐勇勝，劉福軍

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumoniae，MPP）是常見的兒童社區獲得性疾病，發病率逐年增高，發病年齡呈逐年減小趨勢［1］。盡管MPP大多預后良好，但部分病例可并發多器官、多系統損害，對兒童的生命健康造成很大的危害［2］。在有關MPP發病機制的研究中，細胞因子激活在肺部炎癥反應中的作用受到越來越多的關注，肺炎支原體感染能誘導機體產生各種細胞因子，這些細胞因子通過與細胞表面受體結合，介導和調節免疫功能及炎癥反應［3-4］。本研究以MPP患兒肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中細胞因子為切入點，旨在探討MPP局部病變的發病機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 以2017年1月—12月間收入院的90例MPP患兒為研究對象，年齡1～15歲，性別不限。納入標準：（1）符合MPP的診斷標準［5］。（2）胸部影像學表現為大片狀陰影，占據1個或以上肺段范圍。（3）無混合其他感染的依據，如衣原體、細菌、病毒等病原體感染。（4）不伴有肺結核、支氣管哮喘等其他呼吸系統疾病。（5）既往未診斷患有免疫性疾病，無不明原因的長期發熱、關節腫痛。（6）無近期或長期服用糖皮質激素史，近2個月內未應用免疫球蛋白、干擾素等免疫調節劑和免疫抑制劑。所有患兒按病程分為3組，每組30例。分為發病＜7 d組（A1組），發病7～14 d組（A2組），發病15～30 d組（A3組）。對照組（B組）為同期因支氣管異物（21例）或者慢性咳嗽（9例）行纖維支氣管鏡檢查的患兒，共30例，無退組現象。各組在年齡、性別差異無統計學意義（均P＞0.05），見表1。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 所有研究對象均取得家屬同意后經纖維支氣管鏡進行局部肺泡灌洗，并留取BALF，對照組選擇非病變部位進行局部灌洗，留取BALF。所有標本經離心留取上清液置-20℃冰箱保存待測。

1.2.2 細胞因子測定 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定（ELISA）法檢測BALF中腫瘤壞死因子（TNF）-α、干擾素（IFN）-γ、白細胞介素（IL）-2、IL-4、IL-6和IL-10的含量，試劑盒購自杭州聯科生物技術股份有限公司，嚴格按照說明書進行操作。

1.3 統計學方法 采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，多組樣本間均數比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組內多重比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

MPP患兒BALF中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10水平較對照組明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。IFN-γ、IL-2水平在A1組最高，與A2及A3組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。TNF-α分泌高峰在A1組，高于A2及A3組（P＜0.01），A2與A3組相比無明顯變化。IL-4與IL-6水平在A2組高于A1和A3組，差異有統計學意義（P＜0.05）。IL-10在A1及A2組明顯高于A3組（P＜0.01），而A1組與A2組相比，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

Tab.1 Expression of BALF inflammatory factors in treatment group and control group表1 治療組與對照組BALF炎癥因子表達結果（n=30）

3 討論

肺炎支原體感染后，可促使淋巴細胞、中性粒細胞和上皮細胞產生大量細胞因子及炎癥介質，從而調節人體免疫［4，6］。目前國內外文獻對MPP在細胞因子方面的研究結論不一，爭議頗多。Oishi等［7］研究證實，在肺炎支原體感染急性期，血清TNF-α、IL-18明顯升高，恢復期明顯降低。喬紅梅等［8］研究發現MPP患兒BALF和血清中IL-6、IL-10、TNF-α水平在發病的急性期明顯高于對照組，并且BALF中IL-6、IL-10、TNF-α濃度高于血清中相應細胞因子濃度，血清細胞因子與BALF中相應的細胞因子有相關性，提示患兒血清炎癥水平間接反映肺部炎癥情況，最能直接反映肺部炎癥情況的卻是BALF中的細胞因子水平。另有研究發現，在難治性MPP中，患兒BALF中細胞因子IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ較對照組明顯升高，并且IL-2、IL-8持續高水平可能與難治性MPP患兒激素治療后持續發熱有關［9］。本研究中MPP組各期細胞因子較對照組明顯升高，其中IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-8和IL-10變化與之有類似發現。Guo等［3］研究證實在BALF中，T細胞的激活在急性和嚴重MPP患兒的炎癥反應中期發揮重要作用，并且IL-6水平與疾病的嚴重性及預后有關。康妍萌等［10］研究發現在嚴重MPP患兒BALF中IFN-γ、IL-4水平明顯升高，IL-4/IFN-γ比例亦明顯升高。本研究中BALF中IFN-γ、IL-4水平較對照組明顯升高，提示上述細胞因子參與MPP疾病的發病過程，與上述研究相符合。

有研究證實血清及BALF中TNF-α在MPP急性期明顯升高［8］，并且與病情嚴重程度呈正相關［11］。但急性期中具體何時分泌高峰少見相關研究。本研究中TNF-α在病程1周內達到高峰，后逐漸下降，至病程15～30 d仍高于對照組。陳丹等［12］研究發現急性期MPP患兒與普通肺炎患兒相比，血清IFN-γ明顯升高；在兒童MPP急性期BALF中亦有相同發現［9］，與本研究結果相類似。本研究更進一步闡述了BALF中IFN-γ隨病程的變化規律，為進一步了解MPP的發病機制提供了依據。IL-2細胞水平在不同的研究中結論不一。有報道在難治性MPP患兒BALF中IL-2持續高水平可能與患兒激素治療后持續發熱有關［9］，而史良俊等［13］研究發現難治性MPP組急性期及恢復期血清IL-2水平均顯著低于MPP組和對照組，考慮與病例選擇、標本收集、標本類型及測量方式不同等有關。本研究中MPP患兒發病1個月內BALF中IL-2水平明顯升高，在發病1周時分泌達到高峰，后逐漸下降，提示細胞IL-2參與MPP發病過程。細胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2主要由Th1分泌，能增強T細胞、NK細胞及B細胞等的免疫活性，本研究中細胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2均在發病＜7 d時達到高峰，可間接提示MPP患兒在病程7 d內以Th1免疫反應為主。

Ye等［14］發現MPP患兒在急性期血清IL-4、IL-6水平明顯高于恢復期，并且IL-4水平與疾病嚴重性有關，同時CD4+/CD8+T細胞比例明顯升高，證明MPP患兒發病機制中Th1/Th2細胞平衡起重要作用。藍引樂等［9］研究證實在難治性MPP患兒BALF中IL-4、IL-6和IL-10較對照組明顯升高，本研究中選取的病例嚴重程度與上述研究相比相對較輕，但細胞因子IL-4、IL-6和IL-10有類似的研究發現，并且動態研究相關細胞因子隨病程的變化規律，證實細胞因子IL-4和IL-6在病程7～14 d達到高峰。喬紅梅等［8］研究發現MPP患兒BALF和血清中IL-6及IL-10水平在發病的急性期明顯高于對照組，并且BALF中IL-6和IL-10濃度高于血清中相應細胞因子濃度。陳良東等［11］研究發現MPP患兒病情嚴重程度與IL-6濃度變化呈正相關，與T細胞亞群CD3+、CD3+CD4+細胞百分率及 CD4+/CD8+變化呈負相關。Ding等［4］研究發現血清細胞因子IL-10在兒童MPP患兒中明顯升高，而輕度MPP患兒較重癥MPP患兒明顯升高，提示IL-10作為重要的細胞因子參與MPP的發病過程，與疾病的嚴重程度相關。IL-4、IL-6和IL-10主要由Th2分泌，主要參與體液免疫反應，而IL-4和IL-6分泌高峰在病程7～14 d，間接反映該期Th2介導的免疫反應可能在MPP的發病機制中起重要作用。

總之，本研究證實細胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10參與MPP的發病機制，并且動態闡述了分泌水平隨病程的變化規律，為進一步治療MPP提供了理論依據。

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