食品微生物學(xué)菌落總數(shù)檢驗中不確定度的評定

田霞

目的：食品微生物學(xué)菌落總數(shù)檢驗中不確定度的評定。方法：現(xiàn)選取2016年5月- 2016年6月需要進行菌落總數(shù)檢測食品樣本共20例作為調(diào)查對象，根據(jù)GB/4789.2- 2010食品微生物學(xué)進行檢測，觀察檢測結(jié)果。結(jié)果：在本次實驗中，在食品微生物學(xué)總菌落數(shù)的檢測中其不確定度的測量結(jié)果為：U為0.0219X2.086=0.046。結(jié)論：在微生物檢測中，其總菌落數(shù)檢測結(jié)果離散性比較大，因此測定的結(jié)果將取對數(shù)以后，采取合并樣本的標準差，求總菌落數(shù)，在不確定度測定檢測結(jié)果中比較適合。

隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展和提高，廣大的人們?nèi)罕娫絹碓街匾暽睿绕涫鞘称沸l(wèi)生這一塊，而且食品是否衛(wèi)生、安全，和食品有關(guān)的問題直接的關(guān)乎到人們?nèi)罕娚眢w的健康問題。菌落總數(shù)測定是用來判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，它反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評價。根據(jù)查閱食品相關(guān)的資料，發(fā)現(xiàn)近年來食品存在質(zhì)量問題的新聞比較頻繁，對此進行深入的了解，發(fā)現(xiàn)有很多的問題都是可以避免的，因此國家的有關(guān)部門，對食品安全生產(chǎn)采取了大力的監(jiān)管，要徹底的杜絕此類問題，要從根本上找原因，經(jīng)過討論得出，導(dǎo)致此類問題的發(fā)生，存在兩點的不足，其一為在食品質(zhì)量的問題中沒有給予高度的重視，其二為在對食品進行檢驗時在技術(shù)上還有不足之處的存在。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣，為此在本文中對食品中微生物的菌落總數(shù)檢測實驗狀況進行詳細的介紹，詳情如下。

資料和方法

資料。現(xiàn)選取2016年5月- 2016年6月需要進行菌落總數(shù)檢測食品樣本共20例作為調(diào)查對象，其食品樣本為奶粉。

注意事項。在選取奶粉樣品時要均勻的選取；（2）保證每一份樣品的菌落的數(shù)量較為完全；（3）在對微生物數(shù)目進行計算時，可以保證其準確度；（4）在操作時，每一位操作人員要嚴格遵照有關(guān)規(guī)定進行操作，保證沒有誤差出現(xiàn)；（5）對樣本進行檢測時，需要相同的測試人員進行測試。

檢驗方法。在食品微生物學(xué)對菌落總數(shù)進行檢驗與測定中要嚴格遵照GB4789.2- 2010。

測試的流程。

（1）取樣本

將采用無菌操作進行稱量25g的樣本，取含量為225ml的滅菌生理鹽水三角瓶，將樣本放入瓶內(nèi)，隨即進行振搖，當(dāng)振搖充分后，將其制作成為均勻的稀釋液，為1∶10。

（2）將樣品進行稀釋

在稀釋的過程中，將采用1ml的滅菌吸管吸取1：10的稀釋液1ml，沿著管壁注入含量為9ml的滅菌生理鹽水試管內(nèi)，隨即進行振搖，當(dāng)振搖充分后，將其制作成1：100均勻的稀釋液；取另外一根1ml的滅菌吸管，按照同樣的操作順序，以十倍的遞增順序進行稀釋液的制作，在制作稀釋液中，每一次稀釋，將換一根滅菌吸管。

（3）稀釋倍數(shù)的選擇

依照樣品衛(wèi)生的情況在1∶1000以及1∶100的稀釋程度中選取，在做十倍遞增的稀釋同時，采取滅菌的平皿將經(jīng)滅菌吸管吸取的稀釋液進行注入，其稀釋液的含量為1ml，每個稀釋將做二個平皿，取45℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基注入到含有稀釋液平皿當(dāng)中，其平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基含量為15ml，隨即對其進行轉(zhuǎn)動，將其混勻，于此同時進行空白對照的制作，瓊脂凝固之后，將其放在孵箱內(nèi)進行培養(yǎng)，其孵箱溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)時間為48h±2h。

（4）對菌落進行技術(shù)計數(shù)

將每個平皿中菌落數(shù)進行計數(shù)，其計數(shù)方式為采用菌落計數(shù)器進行記錄，菌落數(shù)則在30～300CFU之間稀釋度中進行選擇，乘以稀釋倍數(shù)為報告菌落的總數(shù)。

評定奶粉菌落總數(shù)測定中的不確定度

在本次實驗中，由實驗人員取20個奶粉的小樣，在時間間隔較短的時間內(nèi)，依照GB/4789.2- 2010的方法進行重復(fù)的測試，將20個樣品的總菌落數(shù)測試的結(jié)果進行得出，在本次實驗的過程，在取樣時依照GB/4789.2-2010的規(guī)定中嚴格的執(zhí)行，可確保樣品時穩(wěn)定、均勻的。以下為不確定度的因素來源分析，如下。

（1）在稱量中，使用天平進行檢定合格，基本沒有影響；

（2）樣品的均勻性，對樣本稀釋后，為稀釋液，大致均勻，基本沒有影響；

（3）在樣品培養(yǎng)時的溫度，經(jīng)過校對以后，其波幅是處于正常的范圍，沒有影響；

（4）其樣品培養(yǎng)的時間，均在正常的范圍，沒有影響；

（5）人員的不同，在這之間有一定的差異存在；

（6）同一個人員，在進行多次重復(fù)的操作，在每一次操作的過程中，可能有小誤差的存在；

（7）移液器，經(jīng)過檢驗是合格，但在每一次取樣時，在液器外面的液滴量，都有一定的小差異存在；

（8）細微營養(yǎng)沒有均衡，其體現(xiàn)為傾倒計數(shù)瓊脂0.2mL～2mL之間的差異；

（9）在對樣品進行培養(yǎng)時，裝有樣品平皿厚薄有所不均勻，因此有可能導(dǎo)致培養(yǎng)溫度不均勻；

參與本次調(diào)查的20件樣品，在檢測前和檢測后存在5min時間差異，依照20min繁殖一代速度，這之間存在一定的差異，而在本次檢測過程中有可能導(dǎo)致誤差出現(xiàn)的因素，將體現(xiàn)于總菌落數(shù)計數(shù)之上。

實驗標準計算不確定度

依照貝塞爾公式進行計算，可將檢驗結(jié)果對數(shù)值標準偏差合并樣本的標準差計算出來，其公式為：S p={∑[（lg xi- lg x）2]/20（2-1）}1/2=[0.013823/20]1/2=0.026、uc=S p=0.026=0.019，其擴展的不確定度為U=ku c，置信水平選取為P=95%、V=20，得：t95（20）=2.086，因此擴展的不確定度：U為0.0219X2.086=0.046。

由此可見，檢測結(jié)果當(dāng)采用平行樣對數(shù)值平均值進行表示，取值的區(qū)間應(yīng)在0.045左右，檢測結(jié)果采用平均值進行表示時，其相對對數(shù)值取值的分布應(yīng)在反對的數(shù)取值的區(qū)間值內(nèi)。而檢驗結(jié)果的發(fā)散性比較高時，應(yīng)采取對合并樣本標準差對檢驗結(jié)果不確定度中的最佳的選擇，這種選擇對每個樣本都適用。伴隨檢驗結(jié)果的增加，加入合并樣本的數(shù)量越來越多，將對合并樣本標準差進行重新計算，確定不確定度取值的范圍。

食品質(zhì)量問題和人們生活健康有著直接的關(guān)系，在本次討論詳細的說明了在食品微生物學(xué)總菌落數(shù)的檢測中的不確定度，并將相關(guān)的數(shù)字模型進行建立，希望在我國食品安全的保障中，盡到微薄之力。