農產品中氨基甲酸酯類農藥檢測的液相色譜條件優化

盧艷婷 何煥潔

蔬菜具有生長期短、流通快的特點，想要快速、靈敏、準確地檢測出多種未知農藥，就需要對檢測技術提出新的要求。本文在現有標準的基礎上，通過對樣品的前處理和色譜條件優化，采用帶有熒光檢測器FLD 和柱后衍生系統的高效液相色譜儀對農產品中克百威（carbofuran）、滅多威（methomyl） 、涕滅威（aldicarb）、涕滅威砜（aldicarb sulfone） 、涕滅威亞砜（aldicarb sulfoxide）等 5種氨基甲酸酯類農殘進行檢測，目的是為其檢測出一種高效、準確、靈敏且可操作性較強的分析方法。

材料與方法

材料與試劑。

（1）供試材料：從超市購買的普通白菜，重量約3 kg。（2）試劑溶液：1000 mg/ L 的克百威、滅多威、涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜等單一標準溶液（東莞市譜標實驗器材科技有限公司）；美國Pickering 公司生產柱后衍生整套試劑：包括0.05mol/LNaOH溶液（cat. NO CB130） 、OPA 稀釋溶液（cat.NO CB910）、鄰苯二甲醛（O- Phthaladehyde、OPA） （cat. NO 0120）、巰基乙醇（Thiofluor） （cat.NO 3700-2000） （天津美瑞泰克公司） ；美國Agilent 固相萃取氨基柱，容積6 mL，填充物500 mg ；甲醇、乙腈：HPLC級別；去離子水。

主要儀器與設備。美國Agilent1200型高效液相色譜儀（配有熒光檢測器）和美國Pickering PCX5200 型柱后衍生裝置；C18 色譜柱，4.6 mm x25cm，5μm（美國Agilent公司）；實驗室臺式超純水機（默克化工技術有限公司）； SartoriusTE612- L 電子天平；KL512 型氮吹儀。

色譜條件。色譜柱：預柱：C18 預柱，4.6 mm x 4.5 cm；分析柱：C18 色譜柱；熒光檢測器：λex=330 nm，λem= 465nm；柱后衍生：0.05 mol/L 氫氧化鈉溶液，流速0.3mL/min，0PA 試劑，流速0.3 mL/min；進樣量：20μl；反應器溫度：水解溫度，100℃，衍生溫度，室溫。流動相溶劑梯度與流速見表1。數據處理為外標法峰面積定量。

試驗方法。

（1）樣品制備和提取。通過四分法取不少于1kg 普通白菜樣品，將一部分切碎，充分混勻放入均質儀粉碎成漿，放入分裝容器中備用。準確稱取25 g樣品倒入勻漿機中，加入50mL 乙腈，高速勻漿2 min，然后用濾紙過濾，濾液收集到50mL具塞量筒中，量筒中裝有預先烘烤140℃4 h 的氯化鈉5g，過濾完后收集濾液約50ml，蓋上塞子，震蕩lmin，在室溫下靜置分層約30 min。

（2）凈化。從50 mL 具塞量筒中準確吸取10.0mL乙腈溶液，放入150 mL 燒杯中，將燒杯放在80 ℃水浴鍋上加熱，杯內緩緩通入空氣流，將乙腈蒸發至近千；加入2.0 mL 的甲醇+二氯甲烷（5 +95） 的混合液溶解殘渣，蓋上鋁箔待凈化。

將氨基柱用4.0 mL 甲醇+二氯甲烷（5 +95）的混合液預洗，當預洗溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即加入樣品溶解液，用15 mL氮吹管收集洗脫液，用3 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）洗滌燒杯后過柱，并重復1次。將氮鼓風機預洗到50℃，將氮吹管置于氮吹儀中，并且將氮氣蒸發直至幾乎干燥，最后用甲醇+水（15+85）的混合溶液準確定容至2.5 mL。在混合器上混勻后，用0.2 μm的有機濾膜過濾，待測。

結果與分析

樣品前處理實驗的優化。在NY/T 761-2008的預處理方法中，增加氨基柱的預洗和樣品洗脫的混合液中甲醇的比例，即混合液為甲醇+二氯甲烷（5 +95），增強了樣品的洗脫能力，使樣品在固相萃取柱中被淋洗的更徹底，提高了回收率。定容時，用甲醇+水（15 +85）的混合溶液代替純甲醇對濃縮后的樣品進行定容，極大地改善了加標樣品中的涕滅威亞砜和涕滅威砜2 種組分的峰型，降低了基線噪音，提高了分離度和響應值，使兩種組分得到更準確定量，具體見圖1中純甲醇定容后和優化后的甲醇水溶液定容后的樣品加標色譜圖。

色譜條件優化。在NY/T 761- 2008方法的溶劑梯度與流速的基礎上，10 min后，提高甲醇的比例，并將甲醇和水的比例改為50+50。待前面3 個峰出完后，在13min時將甲醇和水的比例改為82 + 18，逐步提高甲醇相的比例，沖洗出進入色譜柱中的雜質，同時提前后2 個組分的出峰時間，待后2 個峰出完后，在 17.30min 時，將甲醇和水的比例改回初始比例（15 +85），平衡流動相。改變流動相溶劑變化時間和比例后，最后1個組分峰的時間提前了8.5min 。說明采用該溶劑梯度與流速不僅可使5 種氨基甲酸酯類農藥完全分離，且分析時間短至17 min內完成。

線性范圍及檢測限。用甲醇水溶液（15+85）對標準儲備液進行稀釋，將各個標準儲備液配制成混標，5種氨基甲酸酯混合標準溶液均為相同的濃度系列0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.2、1.4 mg/L，按照優化的色譜條件，以峰面積Y對各組分質量濃度x 求回歸方程。以儀器3倍的信噪比求出各個成分的最低檢出限，見表2。

按上述色譜條件進行分析，各組分的濃度（X）與峰面積Y有著良好的線性相關性，回歸方程見表2，完全能滿足一般農藥殘留的檢測需要。

精密度和回收率。準確稱取普通白菜25.0 g，添加5 種氨基甲酸酯類的標準貯備液，制成0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/L5 個不同濃度的樣品進行測定。回收率和精密度見表3。5 種氨基甲酸酯類農藥的平均回收率都在93.6 %～100.9%，平均RSD%為2.9 %～4.8 %，完全優于農藥多殘留檢測的回收率和RSD % 要求。

通過前處理方法的改進和色譜條件的優化，可增強樣品凈化后待測組分的洗脫能力以提高回收率和改善待測組分色譜峰形，用此方法檢測蔬菜中的氨基甲酸酯類農藥殘留，不但分析快速（整個進樣過程可縮短8.5 min），分離效果好，而且準確度與靈敏度較高，是一種比較理想的分析方法。