WFDC2編碼的HE4在肺癌診斷和療效監測中的應用價值

羅佳齡， 彭 霞， 林 堃， 李 莉

（上海交通大學附屬第一人民醫院檢驗科，上海 200080）

WFDC2編碼的人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是乳清酸性糖蛋白的一種。近來發現，HE4與卵巢癌密切相關，目前已獲得美國食品與藥品監督管理局的支持，成為一種卵巢癌新的腫瘤標志物[1]。除卵巢癌外，HE4在多種腫瘤中均存在表達異常升高的現象[2]。肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，目前肺癌常用的腫瘤標志物如細胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1）、神經元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE） 、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、鱗狀細胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）相關抗原等往往在腫瘤負荷較重時才顯著升高，敏感性和特異性均不令人滿意，不足以幫助臨床早期發現肺癌。有研究者發現在部分肺癌患者的血清和組織中HE4可呈高水平表達[3-4]。本研究通過檢測肺癌患者血清HE4水平來評價HE4在肺癌診斷中的臨床應用價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2015年2月—2016年1月于上海交通大學附屬第一人民醫院呼吸科、腫瘤科、胸外科住院，首次確診為肺癌的患者226例為肺癌組，其中男154例、女72例，年齡62（56，68）歲。肺癌患者中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者203例，其中Ⅰ和Ⅱ期患者135例，Ⅲ和Ⅳ期無轉移者24例，Ⅲ和Ⅳ期有轉移者44例；小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）患者23例，其中局限期（limited-stage disease，LD）8例，廣泛期（extensive-stage disease，ED）15例。所有病例均經臨床和病理等確診。正常對照組為同期同地常規查體、化驗及影像學等檢查結果無異常的健康體檢者100名，其中男50名、女50名，年齡62（41，70）歲。良性疾病對照組為128例在呼吸科住院的單純性肺部良性疾病（包括肺炎、慢性阻塞性肺病、肺良性腫瘤等，排除含有惡性胸腹水或合并肝、腎、生殖系統疾病或有惡性傾向的病例）患者，其中男69例、女59例，年齡60（49，70）歲。3組研究對象的年齡、性別差異均無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集 抽取所有患者術前清晨空腹肘正中靜脈血3 mL于普通血清管內，立即送實驗室，于4 ℃條件下4 000×g離心10 min， 取上清液置1.5 mL離心管內，-40 ℃保存待用。另選取在上海交通大學附屬第一人民醫院首次確診為肺癌且之后繼續化療的患者，跟蹤1年，1年后再次抽血檢測血清HE4水平。

1.2.2 檢測方法 HE4測定采用酶聯免疫法，試劑盒購自瑞典CanAg Diagnostics公司，儀器為上海科華生物工程有限公司ST-360全自動酶標儀，具體操作嚴格按照說明書執行。SCC相關抗原測定試劑盒購自美國雅培公司，儀器為美國雅培公司生產的i2000全自動微粒子化學發光免疫分析儀。CYFRA21-l、NSE、CEA檢測采用電化學發光法，試劑由德國羅氏公司提供，儀器采用德國羅氏公司生產的E602電化學發光儀，質控品采用英國朗道公司生產的腫瘤高低值質控品，質控判斷標準為Westgard多規則分析。

1.2.3 臨床分期和化療療效評價標準 按照國際抗癌聯盟（the Union for International Cancer Control，UICC）2009年制定的第7版國際TNM分期標準對腫瘤進行分期。化療療效則按照實體瘤的療效評價標準（response evaluation criteria in solid tumors，RECIST）進行評價。

1.3 統計學方法

數據比較及受試者工作特性（receiver operating characteristic，ROC）曲線的曲線下面積（area under curve ，AUC）用SPSS 19.0軟件進行統計分析。計量資料分析結果用中位數（四分位數）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用秩和檢驗，化療前后比較采用Wilcoxon符號秩和檢驗，聯合檢測比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清HE4水平的比較

肺癌組血清HE4水平明顯高于正常對照組和良性疾病對照組（P＜0.05）；不同病理類型肺癌患者血清HE4水平差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 HE4與CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC相關抗原對肺癌診斷效能的比較

采用肺癌患者和正常人的HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關抗原測定值作ROC曲線，并一次同時輸入HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關抗原所有數據進行單步回歸且轉化成聯合參數LOGREGR_Pred1與各項腫瘤標志物作ROC曲線比較。結果發現在診斷肺癌時，HE4的AUC大于其他4項血清腫瘤標志物。見表2和圖1。

表1 各組血清HE4水平的比較[pmol/L，M（P25，P75）]

2.3 不同臨床分期肺癌患者血清HE4水平的比較

203例NSCLC患者中，Ⅰ和Ⅱ期患者的血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期患者；Ⅲ和Ⅳ期無轉移患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期有轉移患者。23例SCLC患者中LD患者與ED患者血清HE4水平差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2 各腫瘤標志物及5種腫瘤標志物聯合參數對肺癌診斷效能的比較

圖1 HE4、CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC相關抗原單獨和聯合檢測對肺癌診斷的ROC曲線

2.4 HE4對肺癌療效監測的作用

對54例符合要求的肺癌化療患者，化療后1年再次抽血檢測血清HE4水平，發現19例疾病進展患者治療后血清HE4水平升高（P＜0.05），15例部分緩解患者和19例病灶穩定患者化療前后血清HE4水平差異無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

表3 各臨床分期肺癌患者血清HE4水平的比較[pmol/L，M（P25，P75）]

表4 54例化療患者化療前后血清HE4水平的比較 [pmol/L，M（P25，P75）]

3 討論

WFDC2編碼的HE4是由KIRCHHOFF等[5]于1991年在人附睪遠端上皮細胞中發現的。已有研究證明HE4在卵巢漿液性癌及卵巢子宮內膜樣癌細胞中呈高表達，能夠反映卵巢癌細胞的增殖、侵襲和轉移能力，其血清水平對于卵巢癌的早期輔助診斷和治療監測具有較好的臨床價值[6]。

2006年BINGLE等[7]發現部分肺癌細胞可表達HE4，從此開啟了國內外學者們對HE4與肺癌之間關系的研究。IWAHORI等[8]對49例肺癌及18例卵巢癌患者血清HE4水平進行了測定，結果顯示2組患者血清HE4水平均較健康組明顯升高；此外，對其中24例化療后患者的生存率與HE4水平的關系進行分析，發現二者也有一定關系。TOKUISHI等[3]發現HE4-V3剪切變異體在肺腺癌中的表達水平會影響患者的預后。LAMY等[4]認為血清HE4水平越高，NSCLC患者的預后越差。肖然等[9]報道HE4檢測可以明顯提高肺腺癌的檢出率。

本研究結果顯示，肺癌組患者血清HE4水平高于良性疾病對照組和正常對照組（P＜0.05），說明HE4在鑒別良惡性肺腫瘤方面有一定意義。比較肺腺癌、肺鱗癌、SCLC患者血清HE4水平并無明顯差異（P＞0.05），說明血清HE4水平對不同病理類型的肺癌可能沒有指向性，這與于飛等[10]的研究結果基本一致，但如果能夠擴大肺鱗癌和SCLC的例數，結果會更加可靠。本研究繪制的ROC曲線清楚地顯示，HE4的AUC為0.860，比傳統的肺癌血清腫瘤標志物單項指標的AUC都高，而聯合檢測后的AUC可提高到0.906，說明HE4對肺癌的早期診斷有更好的特異性和敏感性，這可能與HE4在呼吸道的先天性防御作用有關。203例NSCLC患者中，Ⅰ和Ⅱ期患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期患者（P＜0.05）；Ⅲ和Ⅳ期無轉移患者血清HE4水平低于Ⅲ和Ⅳ期有轉移患者（P＜0.05）。23例SCLC患者中LD患者和ED患者血清HE4水平有明顯的差異，說明血清HE4水平可能與肺癌的進展程度密切相關，推測HE4的來源與肺腫瘤細胞的增殖、浸潤和轉移過程有關。從54例肺癌患者化療前后的血清水平對比來看，HE4的水平可以反映出化療無效病情進展的情況，部分緩解和治療后病灶穩定的患者，其HE4血清水平基本上沒有太大波動，可以作為輔助監測肺癌化療效果的指標之一，但是仍需要擴大樣本量進行跟蹤分析。

綜上所述，WFDC2編碼的HE4在肺癌的診斷、疾病進展及療效監測方面具有較好的應用價值。隨著HE4在肺癌人群中的深入研究，HE4在肺癌中的應用將日趨廣闊。

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