兒童急性白血病患者外周血胸苷激酶1水平變化的臨床意義

萇哲宗　余紅嵐　費(fèi)櫻

[摘要] 目的 探討血清胸苷激酶1（TK1）水平變化對不同類型兒童急性白血病（AL）的診斷價值及臨床意義。 方法 選取貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院及貴陽市兒童醫(yī)院2015年10月～2017年9月86例兒童AL患者為研究組，分為急性B細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病（B-ALL）組38例，急性髓系白血病（AML）組26例和急性T細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病（T-ALL）組22例。同時將急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）患兒分為標(biāo)危組21例、中危組19例和高危組20例，另設(shè)86例健康體檢兒童為對照組。空腹抽取靜脈血，檢測各組的血清TK1水平。 結(jié)果 B-ALL組、AML組以及T-ALL組血清TK1水平均高于對照組，T-ALL組血清TK1水平高于AML組，AML組血清TK1水平高于B-ALL組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。高危組血清TK1水平高于中危組，中危組TK1水平高于標(biāo)危組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 檢測血清TK1水平對兒童AL的篩查和實驗室診斷有重要臨床參考價值；血清TK1的水平與ALL患兒的臨床危險分級有關(guān)，可作為其危險分級的一項參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 急性白血病；急性B細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病；急性T細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病；急性髓系白血病；胸苷激酶1

[中圖分類號] R729 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）04（b）-0071-04

[Abstract] Objective To study the diagnostic value and clinical significance of serum thymidine kinase 1 （TK1） levels in different types of children with acute leukemia （AL）. Methods A total of 86 children with AL from the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University and Guiyang Children′s Hospital from October 2015 to September 2017 were selected as the study group， they were divided into acute B-cell lymphoblastic leukemia （B-ALL） group （38 cases）， acute myeloid leukemia （AML） group （26 cases） and acute T-cell lymphoblastic leukemia （T-ALL） group （22 cases）. At the same time， children with acute lymphoblastic leukemia （ALL） were divided into standard risk group （21 cases）， intermediate-risk group （19 cases） and high risk group （20 cases）， meanwhile 86 healthy children were selected as the control group. Fasting venous blood was collected and serum TK1 levels were measured. Results The levels of serum TK1 in B-ALL group， AML group and T-ALL group were higher than that of control group， the level of serum TK1 in T-ALL group was higher than that of AML group， the level of serum TK1 in AML group was higher than that of B-ALL group， with the statistically significant differences （P < 0.05）. The level of serum TK1 In the high-risk group was higher than that of the intermediate-risk group， the level of serum TK1 in the intermediate-risk group was higher than that of the standard risk group， with the statistically significant differences （P < 0.05）. Conclusion Detection of the level of serum TK1 has an important clinical reference value in the screening and laboratory diagnosis of AL in children. The level of serum TK1 is related to the clinical risk grade of children with ALL， which can be used as a reference index for its risk classification.

[Key words] Acute leukemia； Acute B-cell lymphoblastic leukemia； Acute T cell lymphoblastic leu？鄄kemia； Acute myeloid leukemia； Thymidine kinase 1

急性白血病（Acute leukemia，AL）是來源于造血系統(tǒng)的惡性腫瘤性疾病，原始細(xì)胞在骨髓異常增生和聚集并抑制正常造血，導(dǎo)致貧血和血小板減少。原始細(xì)胞也可侵犯髓外組織，如腦膜、性腺、胸腺、肝、脾或淋巴結(jié)等，引起相應(yīng)病變。臨床表現(xiàn)可有發(fā)熱、胸骨疼痛、無力、皮膚出現(xiàn)紫癜等；外周血計數(shù)白細(xì)胞數(shù)量增高、正常或減少，鏡檢可發(fā)現(xiàn)有原始或幼稚細(xì)胞。根據(jù)受累的細(xì)胞類型，AL可以分為急性淋巴細(xì)胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）和急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）兩大類[1]。胸苷激酶（thymidine kinase，TK）是DNA補(bǔ)救合成途徑的限速酶，TK1作為TK的一種亞型，存在于細(xì)胞漿中[2]。長期以來，TK被認(rèn)為僅在細(xì)胞周期的S期的DNA復(fù)制過程中發(fā)揮作用。然而，進(jìn)一步的研究表明，TK的缺乏使脫氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate，dTTP）減少，這與DNA損傷的增加有關(guān)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡和突變[3]。自發(fā)現(xiàn)血清TK1以來，其已經(jīng)被用于研究多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤的診斷、分類和細(xì)胞增殖特征[4]。TK1作為血清學(xué)標(biāo)志物已經(jīng)被用于臨床療效觀察以及疾病的緩解和復(fù)發(fā)的監(jiān)測[5]。TK1水平的增加亦被認(rèn)為是ALL和AML患者的不利因素，因此，可作為患者隨訪的監(jiān)測指標(biāo)。由于急性白血病的遺傳異質(zhì)性，本研究根據(jù)AL患者細(xì)胞來源的不同，比較不同細(xì)胞來源的AL患者體內(nèi)血清TK1水平的差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院及貴陽市兒童醫(yī)院2015年10月～2017年9月的86例AL患兒為研究組，同時選取86例健康體檢兒童作為對照組。研究組中，男44例，女42例；年齡2～14歲，平均（7.68±3.55）歲；平均體重（20.35±8.21）kg。對照組中，男45例，女41例；年齡3～14歲，平均年齡（8.35±3.84）歲；平均體重（21.42±8.53）kg。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡2～14歲，符合《兒童急性淋巴細(xì)胞白血病診療建議（第四次修訂）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，患兒及家屬同意及配合試驗，并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：患者存在其他惡性腫瘤、炎癥或其他危重疾病，可對研究的血清腫瘤標(biāo)志物產(chǎn)生失真性干擾；患者存在肝腎功能不全、心功能障礙、神經(jīng)腦血管系統(tǒng)疾病，身體基礎(chǔ)條件較差；患者不配合者；資料不齊全者。

AL分類：應(yīng)用流式細(xì)胞儀將研究組患兒分為急性B細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病（B-ALL）組，AML組和急性T細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病（T-ALL）組。并根據(jù)《兒童急性淋巴細(xì)胞白血病診療建議（第四次修訂）》將急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）患兒按危險度分為3組，即標(biāo)危組，中危組和高危組[6]。

1.2 方法

抽取AL患兒治療前空腹外周血并留取血清樣本，同時抽取健康對照組兒童空腹外周血并留取血清樣本，應(yīng)用酶免疫點(diǎn)印跡化學(xué)發(fā)光法檢測血清TK1含量，TK1細(xì)胞周期分析試劑盒及CIS-1化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀由華瑞同康生物技術(shù)（深圳）有限公司提供。實驗簡要操作流程如下：

①加樣：加3 μL待檢樣本于硝酸纖維素膜上，28～30℃晾干30 min至膜自然翹起，蒸餾水洗膜2次；②封閉：加入10 ml封閉劑，室溫下振搖封閉30 min，倒掉封閉劑；③加入抗TK1-IgY抗體，室溫振搖反應(yīng)120 min，洗滌；④加入生物素化抗IgY二抗，室溫下振搖反應(yīng)40 min，洗滌；⑤加入SA-HRP，室溫振搖反應(yīng)60 min，洗滌；⑥加入ECL發(fā)光試劑，精確反應(yīng)1 min，將膜片用吸水紙吸干，放入壓膜膠片內(nèi)，將壓膜膠片放入化學(xué)發(fā)光成像分析儀內(nèi)反應(yīng)5 min后，進(jìn)行拍攝、分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

將研究組患兒分為B-ALL組、AML組以及T-ALL組，其中B-ALL組38例（44.2%）、AML組26例（30.2%）及T-ALL組22例（25.6%）。三組的血清TK1水平分別為（4.50±1.36）、（7.24±1.67）和（9.28±2.13）pmol/L，對照組的血清TK1水平為（1.02±0.41）pmol/L。B-ALL組、AML組以及T-ALL組血清TK1水平均高于對照組血清TK1水平，T-ALL組血清TK1水平高于AML組，AML組血清TK1水平高于B-ALL組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。

再將60例ALL患兒按危險度分為3組，其中標(biāo)危組21例（35%），中危組19例（31.7%）和高危組20例（33.3%）；三組的血清TK1水平分別為（3.61±0.65）、（4.66±0.91）和（6.31±1.07）pmol/L。高危組血清TK1水平高于中危組，中危組TK1水平高于標(biāo)危組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。

3 討論

AL是兒科常見血液系統(tǒng)惡性疾病[7]。TK1是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)胸苷含量的重要的酶[8]。TK1的活性與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，細(xì)胞周期中，有多種機(jī)制調(diào)節(jié)其mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入S期時，TK1的mRNA和蛋白質(zhì)水平增加[9]。TK1在G1期晚期開始表達(dá)，到S期增加20倍，其相應(yīng)的DNA合成增加，而到G2期開始減少。S期mRNA和蛋白質(zhì)水平的調(diào)節(jié)與TK1和細(xì)胞增殖密切相關(guān)[10]。在大多數(shù)正常或病理狀況下，TK1具有95%的酶活性，當(dāng)細(xì)胞增殖停止時，TK1水平減低；但是，在增殖細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中，TK1水平在G1期急劇增加直到S期晚期結(jié)束，從G2期開始又開始增加[11]。血清TK1水平和各種癌癥的不同階段、復(fù)發(fā)、緩解的相關(guān)性已經(jīng)被證實[12]。腫瘤組織中的TK1水平與腫瘤細(xì)胞的生長速度相關(guān)，可能揭示了血液系統(tǒng)惡性腫瘤、腦腫瘤、結(jié)直腸癌、前列腺癌和乳腺癌的預(yù)后[13]。實體瘤患者體內(nèi)的血清TK1水平可能會提示有腫瘤細(xì)胞的增生性活動[14]。因此，TK1在腫瘤疾病中的功能和作用已被廣泛研究。

ALL在兒童白血病中占大多數(shù)，其病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不十分清楚[15]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展及診療技術(shù)和水平的不斷提高，ALL患兒可以實現(xiàn)長期生存或者治愈，在一些發(fā)達(dá)國家，ALL的5年無事件生存率已達(dá)到90%左右[16]，臨床上，對于兒童ALL的診斷及化療療效觀察，依賴于骨髓穿刺、細(xì)胞病理檢查等手段。而減少骨髓穿刺和細(xì)胞病理檢查次數(shù)，尋找其他輔助檢查指標(biāo)對疾病進(jìn)行初篩、輔助診斷、療效觀察成為很多學(xué)者研究探索的方向[17-19]。有文獻(xiàn)報道，血清TK1水平的檢測對于兒童ALL的初篩、輔助診斷以及療效觀察均有臨床價值[20]。基于以上分析，本研究將ALL患兒按細(xì)胞來源不同分為B-ALL組和T-ALL組。B-ALL組和T-ALL組的血清TK1水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；本研究還將ALL患兒分為標(biāo)危組、中危組和高危組其中高危組的TK1水平高于中危組，中危組的TK1水平高于標(biāo)危組，三組間的TK1水平差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；這與國外O′Neill[12]和Votava[21]等的研究報道相一致。

綜上所述，血清TK1作為一個細(xì)胞增殖的標(biāo)志物對兒童AL（包括AML和ALL）的篩查和實驗室診斷有重要臨床參考價值；血清TK1的水平對ALL患兒的臨床危險分級有重要參考意義，可作為其危險分級的一項參考指標(biāo)。

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