EGCG-Zn配合物對老年小鼠免疫功能、空間學習及記憶力的影響

錢丹丹 張楠楠 劉 慧 王 珂 張 昀 劉繡華,2

(河南大學民生學院，河南 開封 475000)

茶多酚包括黃烷醇類、黃酮類等多種物質，是茶葉中有保健功能的主要成分，其中主要的活性成分為表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。現代藥理研究證明其具有抗氧化、清除自由基、抗癌、抗突變及調節免疫力等功能〔1～3〕。鋅是人體必需的微量元素，影響多種酶的合成及生物學活性，對機體免疫功能也有一定影響，其體內含量過高或過低都會產生不良影響〔4〕。而老年人缺鋅是一種常見現象，有研究表明在免疫功能低下時，適當的補充鋅能提高免疫力〔5〕。本實驗首次研究EGCG-Zn配合物對老年小鼠免疫功能、空間學習及記憶力的影響，為EGCG-Zn配合物的進一步開發利用提供參考。

1 材料與方法

1.1儀器和試劑 LRH-生化培養箱(上海一恒科學儀器有限公司)，迷宮系列(北京眾實迪創科技發展有限責任公司)，TISSUE-TEAROR手持式勻漿機(上海旦鼎國際貿易有限公司)，EGCG(南京春秋生物工程有限公司)，所有試劑盒購自南京建成生物工程研究所。EGCG-Zn配合物由河南大學天然藥物與免疫工程重點實驗室提供

1.2動物 昆明種小鼠，雌雄各半，清潔級，18個月齡，體重60～70 g，由河南省動物實驗中心提供〔動物合格證號：SCXK(豫)2015-0004〕。

1.3動物分組與給藥 所有小鼠適應性喂養1 w后，隨機分為EGCG-Zn組(8.5 mg/kg)、EGCG組(0.102 mg/kg)、Zn(8.4 mg/kg)組和空白組(等量蒸餾水)，每組10只，雌雄各半。每天給藥前測定體重，實驗開始和結束時各測1次體溫，連續灌胃給藥25 d后處死，進行各指標測定。

1.4小鼠空間學習和記憶能力的測定 采用Morris水迷宮進行定位航行、空間搜索和工作記憶三種實驗，按照張魁華等〔6〕方法操作。

1.5血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性 肝總蛋白、MDA含量，腦總蛋白和過氧化氫(CAT)含量測定均按照試劑盒進行。

1.6統計學方法 采用SPSS21.0統計軟件進行方差分析、q檢驗。

2 結 果

2.1體重、體溫檢測結果 各組實驗前后體重、體溫均無顯著性改變，各組無顯著性差異。見表1。

表1 各組實驗前后體重、體溫值

2.2定位航行實驗 由第3象限入水，各組6 d內潛伏期變化不大，EGCG組最為穩定，空白組和Zn組變化相對較明顯。EGCG-Zn組潛伏期有降低趨勢，較穩定。由第2象限入水，6 d內Zn組和空白組潛伏期變化相對不穩定，Zn組最后1 d潛伏期突增；EGCG組和EGCG-Zn組趨勢相對較穩定，且EGCG-Zn組潛伏期逐漸降低，比空白組潛伏期小。由第4象限入水，各組趨勢都不太穩定，且以空白組最不穩定；EGCG-Zn組較Zn組和EGCG組潛伏期小，各組潛伏期差異無統計學意義(P>0.05)。見圖1。

2.3工作記憶實驗 無論平臺在第幾象限EGCG-Zn組比其他3組穩定性都好，且呈下降趨勢。但與其他各組相比，均無顯著差異(P>0.05)。見圖2。

圖1 各組平臺位于第1象限不同象限入水水迷宮定位航行實驗

圖2 各組不同象限平臺水迷宮工作記憶實驗

2.4空間搜索實驗 3種情況下，EGCG-Zn組和Zn組比其他兩組穿越原平臺次數多，EGCG-Zn組與EGCG組和空白組相比差異有統計學意義(P<0.05)，與Zn組相比無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組抽去平臺不同象限入水水迷宮空間搜索實驗次)

Ⅰ第2象限；Ⅱ第3象限；Ⅲ第4象限；與EGCG-Zn組比較：1)P<0.05；與Zn組比較：2)P<0.05

2.5各組血清MDA、SOD，肝臟MDA，腦CAT活性檢測 血清MDA含量，空白組、EGCG組、Zn組、EGCG-Zn組依次降低，EGCG-Zn組與空白組比較差異有統計學意義(P<0.01)，EGCG組和Zn組與空白組比較差異有統計學意義(P<0.05)。空白組血清SOD值最小，EGCG組、Zn組、EGCG-Zn組與空白組比較差異顯著(P<0.05)，但這三組差異無統計學意義。肝臟MDA含量空白組明顯高于其他3組，Zn組、EGCG組、EGCG-Zn組依次降低，EGCG-Zn組與空白組比較有極顯著性差異(P<0.01)，EGCG組和Zn組與空白組比較有顯著性差異(P<0.05)。EGCG組、EGCG-Zn組腦CAT活性比空白組、Zn組腦CAT活性大，其中EGCG-Zn組CAT活性最大，是空白組的近3倍。EGCG-Zn組與空白組比較有極顯著性差異(P<0.01)，EGCG組與空白組比較有顯著性差異(P<0.05)，Zn組與空白組比較無顯著性差異(P>0.05)。見表3。

表3 各組血清MDA、SOD，肝臟MDA，腦CAT活性比較

與空白組比較：1)P<0.01,2)P<0.05

3 討 論

現代研究已證明茶多酚具備較強的抗氧化性和多種生理活性，人體中的SOD可以消除體內過量的自由基，提高人體免疫力，延緩衰老。SOD活性越大證明相關免疫功能越好；MDA含量越低，說明相關免疫功能越好。并且，CAT與SOD通過協同清除自由基發揮抗氧化損傷作用，此時CAT活性相應提高，以抵抗SOD所產生的H2O2〔7〕。本文結果表明，Zn、EGCG、EGCG-Zn配合物對老年小鼠免疫功能低下具有增強作用，EGCG-Zn配合物的效果要優于單獨使用Zn和EGCG。但對于老年小鼠的空間學習和記憶力的影響則不顯著。EGCG-Zn和Zn均對小鼠的空間學習記憶有一定的促進作用，但主要因素可能與Zn相關，與EGCG-Zn配合物關系不大。EGCG、Zn、EGCG-Zn均對老年小鼠的血清MDA活性有一定的降低效應，能延緩小鼠衰老，且EGCG-Zn作用效果最強。EGCG、Zn、EGCG-Zn均對老年小鼠的血清SOD有提高作用，三者之間無明顯區別。EGCG-Zn能顯著降低老年小鼠肝臟中MDA含量，且比Zn、EGCG單獨作用效果要好。EGCG-Zn，EGCG均能有效提高老年小鼠腦CAT活性，且EGCG-Zn效果更好，而Zn單獨作用不能提高老年小鼠腦CAT活性。因此，EGCG-Zn配合物有望開發為一種新的免疫增強制劑。

4 參考文獻

1周寧寧，金 策.茶多酚影響老年小鼠免疫功能的實驗研究〔J〕.海峽藥學，2012;24(5)：21-2.

2葛 建，林 芳，李明揆，等.表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)生物活性研究進展〔J〕.安徽農業大學學報，2011;38(2)：156-63.

3金 亮，李小白，丁華僑，等.不同種類茶葉抗氧化活性及茶湯顏色參數比較〔J〕.中國食品學報，2016;16(2)：242-50.

4聞思婉，楊 凡.免疫功能與血清鋅、硒濃度的相關性〔J〕.內科急危重癥雜志，2013;19(5)：308-11.

5吳學敏，金艷書.微量元素鋅影響老年小鼠免疫功能的實驗研究〔J〕.現代預防醫學，2008;35(1)：191-2.

6張魁華，賴世隆，王 奇，等.補腎益智方對老年性癡呆模型動物定位航行學習記憶功能的改善作用〔J〕.中草藥，2002;33(10)：917-20.

7張向榮，趙志英，張春燕.姜黃素對AD大鼠學習記憶的改善及其與腦組織NO、SOD、MDA和ChAT的關系〔J〕.醫學研究雜志，2012;41(9)：82-6.