動物病理標本制作及其在教學中的應用

張煜

摘要：主要介紹了動物病理大體標本和病理組織切片的制作過程，包括取材、處理、固定、保存、透明、浸蠟、包埋及切片染色等，同時介紹了動物病理組織標本在獸醫病理學理論教學及實踐或實驗教學過程中的重要作用，在提高學生的學習興趣、培養學生的綜合應用能力方面具有重要意義。

關鍵詞：動物病理標本；實踐教學；考試改革；應用

中圖分類號：G712 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2018）05-0045-02

動物病理學是獸醫基礎學科與臨床學科之間的橋梁，其中家禽的疾病變化比較多見，所以家禽病理標本制作及應用至關重要。學生通過觀察患病器官、組織的病理切片，認識疾病發生發展的規律，理論聯系實際，加深理解和鞏固課堂知識，培養學生掌握家禽常見疾病的病理診斷技術，能夠準確分析疾病，為疾病的診治提供基礎依據[1]。同時病理標本的制作可以滿足多門課程的教學需要，提高學生的學習興趣，節約教學成本，促進教學及考試改革，加快畜牧獸醫專業學科的應用型轉變。

1 病理大體標本及組織切片制作

1.1 取材

采取病料越新鮮越好，一般不超過死后24 h。應選擇病變部與可疑病變部切取，切取時要由表及里，有淺入深并包括周圍正常組織一部分。特殊病料應根據器官的結構特點切取。管狀、囊狀和皮膚組織應注意垂直切取（橫切）。帶有薄膜的組織，要防止切時薄膜分離和脫落。

切取組織塊大小以1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm為宜，最厚不宜超過0.5 cm。組織塊病變一面應平整光滑，另一面可不平整，以便包埋時辨認。切取后，放入事先準備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標記。

1.2 固定和保存

固定的目的是迅速將組織細胞殺死，使細胞中的蛋白質、糖、脂肪等凝固，從而保持與活組織相似的結構狀態。材料取下后應迅速固定。固定液數量應為病理組織塊的5～20倍。由于一般把組織塊浸入固定液后數小時固定液滲入組織液的深度只達2～3 cm，因此可以放置冰箱內固定，使組織內酶失去作用，細菌也能停止滋生。最常用的固定液是10%的福爾馬林溶液，使用時，用40%的甲醛飽和水溶液10 mL加水90 mL配成[2]。

對具有典型病理變化的組織和器官固定和保存后貼標簽，同時制作相應的彩色卡片，并對其做詳細的病理變化描述，便于教學及考試中應用。

1.3 沖洗

固定后的組織塊應將固定液洗去。一般均用流水（自來水）沖洗12～24 h，及時沖洗尚有停止固定的作用，防止固定過度，有利于制片染色。

沖洗時如不方便用流水沖洗，也可用較大容器盛裝水浸洗，每隔一定時間換水一次。整個浸洗時間比流水沖洗應稍長一些。乙醇固定的組織材料不需沖洗。

1.4 脫水

經過固定的組織，沖洗后要進行脫水。脫水的目的在于將組織內的水分用乙醇或其他溶劑置換出來，為石蠟等其他包埋劑浸入組織創造條件。

常用的脫水劑為乙醇。由于乙醇可以任何比例與水結合，對組織穿透力強，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的乙醇中，應從低濃度逐漸到高濃度。脫水必須充分，否則給浸蠟造成困難。

除用乙醇作脫水劑外，還可以用正丁醇。正丁醇微溶于水，能與各種濃度乙醇混合，也能直接溶解石蠟。故組織經正丁醇脫水后，不須經二甲苯透明。用正丁醇作脫水劑，組織塊收縮降低，也不會過硬，故比乙醇優越。

1.5 透明

透明的目的是將組織內的乙醇用礦物油或植物油置換出來，并溶解石蠟，幫助石蠟浸透組織。由于經過透明劑處理的組織塊用肉眼觀察呈透明狀，故稱這一過程為透明。

常用的透明劑為二甲苯，因其穿透力較強，因而組織在二甲苯中停留時間不宜過長，一般透明時間在30 min左右即可。

1.6 浸蠟

浸蠟是指組織經過透明作用以后，放入溶化的石蠟中浸滲，使石蠟浸入組織塊中，冷卻后才能進行切片。

通常選擇熔點在52～56 ℃的石蠟，并視切片時環境的溫度而選擇。室溫高則選用熔點稍高的石蠟，反之則選用熔點較低的石蠟，這樣可防止切片時石蠟太軟或易碎裂。

浸蠟的過程是：二甲苯石蠟混合液（1∶1），1 h；二甲苯石蠟混合液（1∶2），1 h；石蠟（1），1.5 h；石蠟（2），1.5 h。上述過程可在56～58 ℃恒溫箱中進行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛裝。

1.7 包埋

包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。根據需要，包埋的方法常有石蠟包埋法和火棉膠包埋法。

石蠟包埋法：①先將熔化的石蠟倒入包埋框，用加熱的鑷子將欲包埋的組織塊在蠟液內放置好。注意各組織塊之間的距離和每個組織塊的位置和方向。②迅速第二次往平皿內傾倒蠟液，淹沒組織塊。待蠟液出現凝固層后，即輕輕放入冷水盆中或冰箱中使其凝固。石蠟完全凝固后，倒出冷縮的蠟塊片，用加熱的外科刀按組織塊位置修整蠟片待用。

1.8 組織切片

不同的切片制備方法其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。常用的切片工具包括組織切片機、切片刀和自動磨刀機等。以下主要介紹石蠟切片法。

組織經石蠟包埋后制成的蠟塊用切片機制成切片的過程稱為石蠟切片，為目前病理診斷常用的切片制作方法。在切片前應先切去標本周圍過多的石蠟（此過程稱為修塊），但也不能留得太少，否則易造成組織破壞及連續切片時分片困難。一般切4～6 μm的切片，特殊情況可切1～2 μm。要觀察病變的連續性，可制作連續切片。除此之外，石蠟包埋的組織便于長期保存，因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用、最普遍的一種方法。

1.9 蘇木精—伊紅染色法

蘇木精—伊紅染色方法，簡稱HE染色方法，是生物學和醫學領域細胞與組織學研究最廣泛應用的染色方法。在病理學實驗中稱為常規染色方法。病理細胞和組織學的診斷、教學和研究都是用HE染色方法觀察正常和病變組織的形態結構。因此病理學工作者必須學習和掌握這種染色方法。

2 病理標本在專業教學中的應用

2.1 激發學生學習興趣、提高學生綜合能力

在動物病理實驗過程中，專業術語枯燥抽象，面對復雜的病理變化和發病機理，學生在學習過程中容易混淆病理學的某些基本概念，更不能準確運用到相關病理變化的組織學觀察中。為了更好解決這些問題，在觀察大體標本時，運用病例教學法，創設情境，舉出真實生動的臨床事例，吸引學生的注意力。因為每一個大體標本都擁有一個故事，這個故事生動、真實，看得見，摸得著，易于形成深刻的記憶，并起到激發學習興趣的作用，使學生在分析病例、觀察病變過程中帶著問題積極主動地查找資料，尋找答案，通過對病例標本的觀察與討論，可以培養學生分析問題、解決問題和創新的能力[3]。例如可以將實驗室收集的雞新城疫、雞馬立克、傳染性法氏囊、壞死性腸炎及沙門氏菌病等家禽常見疾病的標本分組，每類疾病標本貼上相同的代號，由學生對病理標本進行描述討論，并且根據病變組合判斷病因，寫出實驗報告[4]。最后，在進行歸納總結時，教師轉換為主講人，科學嚴謹地分析病例。

2.2 推進高校專業課程的考試及評價方式改革

目前高校的考試評價主要以期末考試的方式來評定，方式較單一，往往以書面的形式展開，考試內容則更注重基礎的理論知識，對學生知識的實際應用能力的重視不足，這樣的考試評價嚴重影響了學生的學習效果，使學生缺乏學習動力，使學生的所學知識和實際應用嚴重脫軌，嚴重阻礙了學生創造性思維的發展[5]。而動物標本的制作及應用過程可以以學生為主體，在整個過程可以對動物生理學、解剖學、病理學、臨床診斷學等多門課程進行考核，內容更加全面化，同時可以在標本制作過程中鍛煉學生的動手能力、案例分析能力、解決問題的能力，發掘學生的創新能力。并且可以考核學生的學習態度、素質等綜合能力，使考核評價方式多元化，由教師和學生共同參與，為學生建立起多元化的考試方式。同時，可以根據專業課的實際情況，對每名學生進行多門專業課程的綜合能力考核，讓學生更深刻理解一些專業知識的內在聯系，對課程橋梁的作用有更深刻的認識。

2.3 促進高校教學模式改革，加快應用技術型大學建立

目前，大部分高校仍保留著原有的教育思想，教育模式仍以教師為中心，對學生的教學仍然停留在教師傳授知識而學生學習知識的軌道上。機械的課堂理論知識教學脫離實踐，使理論知識和實踐應用常常出現脫節問題，使學生的實際分析問題能力和操作能力嚴重不足[6]。對于動物醫學專業教學中的理論和實踐脫節問題，動物病理標本制作及在教學中的應用，可以豐富專業教師的案例教學內容；在注重理論知識的前提下，還可以加強相關實踐課程的開展，培養學生的綜合能力，豐富自身的教學資源；促進了教育理論與實踐的良性互動；強化實踐育人觀念和實踐教學環節，提升了學生動手能力、應用專業知識解決實際問題的能力和創業創新能力，加快了高校應用技術型能力的提升。

參考文獻：

[1] 趙德明.獸醫病理學[M].第三版.北京：中國農業出版社，2012.

[2] 郭虹彩，李青山，張 浩.動物病理標本的制作[J].中國畜牧獸醫文摘，2017，33（2）：48.

[3] 王健琳，尹燕博.動物病理標本在獸醫病理教學過程中的應用[J].考試周刊，2011（4）：209-210.

[4] 賴為明，耿 毅.發揮病理標本在動物病理學實驗教學中的作用[J].實驗科學與技術，2015，26（1）：50-52.

[5] 賴曉華.高校教學模式與考試評價體系改革研究[J].課程教育研究，2017（12）：2-3.

[6] 馮 妥.論高校實踐教學課程考試與評價的改革構想[J].中國科教創新導刊，2011（2）：19.