芎歸六君子湯對大鼠急性心肌梗死的治療作用?

鄭麗莉

(山東協和學院，濟南 250109)

心血管疾病在我國城市居民死因中位居前三位，冠心病心肌梗死是心血管疾病的第一死因[1]。心肌梗死是冠心病中病情最嚴重的一種類型，發病早期致死率極高。冠心病病位在心，然前期研究顯示，根據中醫整體觀念，冠心病與脾胃具有相關性[2]。六君子湯源于《醫學正傳》，由人參、白術、茯苓、甘草、半夏、陳皮組成，功能益氣健脾、燥濕化痰，主治脾胃氣虛兼痰濕證，癥見食少便溏、胸脘痞悶嘔逆者，現代醫學常用于治療慢性胃炎、消化性潰瘍等屬于脾胃氣虛者。芎歸六君子湯在六君子湯基礎上，由加味補血活血之當歸、川芎組成，是治療脾胃氣虛、痰瘀內阻的常用方藥。本研究擬采用芎歸六君子湯治療大鼠冠心病心肌梗死并觀察其治療效果，探討改善脾胃功能對于冠心病治療的影響，為冠心病臨床治療提供新的思路和客觀依據。

1 材料

1.1 動物

SPF級SD雄性大鼠，體質量(200±20) g，由山東省濟南市朋悅實驗動物繁育有限公司提供(合格證號SCXK(魯)20140007)。

1.2 實驗藥物

1.2.1 中藥材 芎歸六君子湯由人參、白術、茯苓、炙甘草、陳皮、姜半夏、川芎、當歸組成，購于建聯藥店，經山東中醫藥大學中藥鑒定教研室鑒定。上述藥材按比例3∶3∶3∶2∶1∶2∶3∶3稱取浸泡2 h，常規煎煮3次藥液混合，60 ℃水浴箱中濃縮至每毫升制劑相當于生藥0.63 g，滅菌4 ℃冰箱保存備用。

1.2.2 對照藥 消心痛，魯南貝特制藥有限公司(國藥準字H19991039)。復方丹參滴丸，天津天士力制藥股份有限公司(國藥準字Z10950111)。

1.3 實驗器材

Power Lab 血流動力學信號采集與分析系統(埃德儀器國際貿易上海有限公司)，Synergy2 酶標儀 (美國伯騰儀器有限公司)，C201 型動物呼吸機(四川成都儀器廠)，精密電子天平(瑞士Precisa公司，XS-225 A)。

1.4 實驗試劑

乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草轉氨酶(AST)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20150413、20150427、20140111)；肌鈣蛋白 I(cTn-1)ELISA試劑盒(江蘇卡爾文生物技術有限公司，批號20150901 A)；NO試劑盒(南京建成生物有限公司，批號20151216),內皮素(ET-1)、前列環素(PGI2)、血栓素(TXA2)ELISA試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，批號CSB-E06979 r，CSB-E13706 r，CSB-E12689 r)。

2 方法

2.1 動物分組

將大鼠按隨機數字表法分為假手術組、模型對照組、西藥對照組(消心痛)、中藥對照組(復方丹參滴丸)和芎歸六君子湯組5組。

2.2 給藥方法

以等效劑量計算，于實驗開始即口服灌胃給藥，每日1次，持續10周。假手術組和模型對照組均給予生理鹽水10 ml/kg，西藥對照組給予消心痛4.2 mg/kg，中藥對照組給予復方丹參滴丸85 mg/kg，中藥組給予芎歸六君子湯6.3 g/kg。

2.3 模型制備

一次性腹腔注射維生素D3 60萬單位/kg,同時每天灌服脂肪乳10 ml/kg(脂肪乳配比，每500 ml含10%膽固醇、20%豬油、1%丙硫氧嘧啶和2%脫氧膽酸鈉),連續10周,制備動脈硬化模型[3]。10周末麻醉，仰臥位固定，氣管插管連接動物人工呼吸機，記錄肢體II導聯心電圖。胸部備皮、消毒、鋪巾，于第2～3肋間偏左4～5 mm處開胸，剪開心包輕壓擠出心臟，迅速結扎冠脈左前降支，肉眼觀察結扎線下心肌顏色變蒼白，搏動減弱，心電圖顯示ST段明顯弓背抬高，表示造模成功。回納心臟，迅速關閉胸腔，待大鼠出現自主呼吸后拔除氣管插管[4]。假手術組只穿線不接扎。

2.4 檢測指標與方法

戊巴比妥麻醉測定血流動力學；腹主動脈取血，低溫離心10 min，轉速3000 r/min，分離血清或血漿，取左心室。

2.4.1 血流動力學檢測 分離右頸總動脈，結扎遠心端，近心端做切口插入充滿抗凝劑的導管(聯接壓力換能器分析端子)，向前推行至主動脈瓣入口處，待其開放時將導管插入左心室，結扎固定導管。連接 Power Lab 血流動力學信號采集與分析系統，檢測左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室上升最大速率(+dp/dtmax)和左室下降最大速率 (-dp/dtmax)[5]。

2.4.2 心肌酶譜與肌鈣蛋白測定 檢測血清LDH、CK-MB、AST、cTn-1水平，具體操作參照試劑盒說明書。

2.4.3 血管內皮活性物質檢測 硝酸還原酶法檢測血清NO，ELISA法檢測血清ET-1、PGI2、TXA2水平，具體操作參照試劑盒說明書。

2.4.4 心梗面積測定 取心臟4 ℃ 預冷生理鹽水洗去血污，剪去心房、右心室(保留室間隔)及血管、脂肪組織，取左心室-20℃ 速凍后切片，沿心尖向基底部以2 mm為標準連續切片，放入1%TTC 的磷酸緩沖液，置于恒溫 37 ℃水浴箱染色15 min。染色后梗死區呈灰白色，未梗死區呈磚紅色。手術刀片剝離非梗死區心肌，將梗死心肌與未梗死心肌分別稱重，以梗死心肌占左心室肌質量的百分比表示梗死范圍[6]。

2.4.5 心肌組織病理形態學觀察 心尖部心肌用預冷 0.9%NaCl 注射液沖洗、濾紙吸濕，4%多聚甲醛液中固定，石蠟包埋，按4 μm厚度連續切片, HE染色，光學顯微鏡觀察。

2.5 統計學方法

運用SPSS 19.0統計軟件進行統計分析，數值以均數±標準差(±s)表示，組間比較用F檢驗。

3 結果

3.1 芎歸六君子湯對心梗大鼠血流動力學的影響

表1顯示， 與假手術組比較，模型對照組LVEDP升高，LVSP、+dp/dtmax與-dp/dtmax下降(P<0.01)。經過藥物治療均有顯著改善，其中芎歸六君子湯組效果最為顯著(P<0.01)。

表1 芎歸六君子湯對心梗大鼠血流動力學的影響( mmHg,±s)

表1 芎歸六君子湯對心梗大鼠血流動力學的影響( mmHg,±s)

組 別例數LVSPLVEDP+dp/dtmax-dp/dtmax假手術組12145.8±5.09.8±1.3 5311±644761±86模型對照組1296.5±4.3ΔΔ20.9±1.6ΔΔ3128±122ΔΔ2640±93ΔΔ消心痛組12108.2±5.1▲▲15.1±2.5▲▲4155±121▲▲3429±92▲▲丹參滴丸組12112.4±5.1▲▲13.8±2.1▲▲4381±67▲▲★★3739±85▲▲★★芎歸六君子湯組12130.3+5.2▲▲★★●●11.1±1.7▲▲★★●●4756±107▲▲★★●●4149±86▲▲★★●●

注：與假手術組比較：ΔΔP<0.01；與模型對照組比較：▲▲P<0.01；與消心痛組比較：★★P<0.01；與丹參滴丸組比較：●●P<0.01

3.2 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌酶和肌鈣蛋白的影響

表2顯示，與假手術組比較，模型對照組各項心肌酶指標及肌鈣蛋白均顯著升高(P<0.01)，說明心肌出現嚴重缺血壞死。各用藥組心肌酶較之模型對照組顯著降低(P<0.01)，芎歸六君子湯組效果顯著，優于消心痛組(P<0.05)和丹參滴丸組(P<0.01)。

3.3 芎歸六君子湯對心梗大鼠血管內皮活性物質的影響

表3顯示，與假手術組比較，模型對照組ET-1、TXA2顯著升高，NO、PGI2顯著降低(P<0.01)。與模型對照組比較, 各給藥組顯著改善(P<0.01)，芎歸六君子湯組效果優于消心痛組和丹參滴丸組(P<0.01)。

表2 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌酶和肌鈣蛋白的影響(±s)

表2 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌酶和肌鈣蛋白的影響(±s)

組 別例數LDH(U/L)CK-MB (U/L)AST(U/L)cTn-1(ng/ml)假手術組12254±24530±48516±5540±7模型對照組122380±193ΔΔ1934±96ΔΔ896±58ΔΔ314±30ΔΔ消心痛組121549±161▲▲1565±90▲▲788±43▲▲200±21▲▲丹參滴丸組121257±185▲▲★1366±83▲▲★740±50▲▲196±9▲▲芎歸六君子湯組12878±98▲▲★●●975±69▲▲★●●697±65▲▲★94±10▲▲★●●

注：與假手術組比較：ΔΔP<0.01；與模型對照組比較：▲▲P<0.01；與消心痛組比較：★P<0.05；與丹參滴丸組比較：●●P<0.01

表3 芎歸六君子湯對心梗大鼠血管內皮活性物質的影響(±s)

表3 芎歸六君子湯對心梗大鼠血管內皮活性物質的影響(±s)

組 別例數ET-1(ng/L)NO(μmol/L)PGI2(ng/L)TXA2(ng/L)假手術組125.76±1.0745.77±2.65167.98±10.9510.49±1.04模型對照組1215.30±1.00ΔΔ28.50±1.17ΔΔ115.39±11.44ΔΔ28.48±1.88ΔΔ消心痛組1211.34±1.30▲▲34.53±1.84▲▲134.65±9.48▲▲21.60±1.57▲▲丹參滴丸組1210.58±1.43▲▲35.33±1.87▲▲150.75±11.20▲▲★★18.72±1.34▲▲★★芎歸六君子湯組127.97±1.16▲▲★★●●40.28±1.37▲▲★★●●159.34±8.49▲▲★★15.49±1.00▲▲★★●●

注：與假手術組比較：ΔΔP<0.01；與模型對照組比較：▲▲P<0.01；與消心痛組比較：★★P<0.01；與丹參滴丸組比較：●●P<0.01

3.4 芎歸六君子湯對大鼠心梗面積的影響

表4顯示， 與假手術組比較，模型對照組心肌梗死面積較大，差異有統計學意義(P<0.01)。各用藥組顯著降低心肌梗死面積，其中芎歸六君子湯組效果最為顯著(P<0.01)。

表4 芎歸六君子湯對大鼠心梗面積的影響(±s)

表4 芎歸六君子湯對大鼠心梗面積的影響(±s)

組 別例數左室重(mg)梗死心肌重(mg)梗死范圍(%)假手術組12616.58±9.4900模型對照組12625.50±5.76 126.33±6.9320.19±0.95ΔΔ 消心痛組12640.00±5.6195.25±3.5514.96±0.44▲▲丹參滴丸組12636.67±6.5890.58±4.3814.39±0.60▲▲芎歸六君子湯組12629.62±10.8375.83±3.4911.85±0.51▲▲★★●●

注：與假手術組比較：ΔΔP<0.01；與模型對照組比較：▲▲P<0.01；與消心痛組比較：★★P<0.01；與丹參滴丸組比較：●●P<0.01

圖1 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌組織病理改變的影響(光鏡×400)

3.5 芎歸六君子湯對心梗大鼠心肌組織病理改變的影響

圖1顯示，HE染色顯示，假手術組心肌結構正常，肌原纖維排列整齊，無腫脹變性壞死；模型對照組發生大面積局灶性病變，變性壞死明顯，心肌纖維呈長波浪形，排列紊亂、斷裂，心肌間質大量炎細胞浸潤；消心痛組部分纖維斷裂，細胞水腫變性，間質增寬，大量炎細胞浸潤；丹參滴丸組心肌細胞部分腫脹，心肌纖維排列較為整齊，較多炎細胞浸潤；芎歸六君子湯組心肌細胞輕度腫脹變性，心肌纖維排列基本整齊，少量炎細胞浸潤。

4 討論

脾胃主運化水谷和水液，是后天之本，氣血生化之源。心主血脈，心之氣血來源于中焦脾胃。《侶山堂類辯》曰:“血乃中焦之汁，流溢于中以為精，奉心化赤而為血。”脾胃健運則心氣充足，心血充沛，心血管功能才能正常。脾失健運一則水谷不化，氣血乏源，心無所倚，神無所主；二則水液不化，助濕生痰，阻于血脈，流于經絡，氣血停滯，聚而為瘀；三則脾胃居于中焦，斡旋氣機，脾胃氣滯，上逆于心。由此，脾胃失常累及于心，心之氣血不足或瘀滯則發為胸痹。

《金匱要略·胸痹心痛短氣病脈證治》指出，胸痹，心中痞，枳實薤白桂枝湯主之，人參湯亦主之。鄧鐵濤和沈紹功等專家均提出采用補氣活血或補氣祛痰法治療冠心病。現代醫學研究證明，高脂血癥是冠心病的獨立危險因素，脂質代謝異常源于消化系統，屬于中醫脾胃腸范疇。胃腸與心血管系統均受植物神經支配，胃腸壁在化學或機械性刺激下促進兒茶酚胺分泌，誘導冠脈痙攣缺血。因此，冠心病與脾胃具有相關性，從脾胃論治冠心病具有歷史淵源和現代研究基礎。

冠心病心肌梗死后，肌原纖維變性、溶解、斷裂、壞死，肌絲增寬，肌節斷裂，血流動力學改變，心室舒縮功能下降。LVSP、LVEDP、+dP/dtmax、-dP/dtmax是反映血流動力學的重要指標。LVSP、+dp/dtmax代表左室收縮功能，LVEDP、-dp/dtmax反映舒張功能。本實驗結果顯示，心梗造模后，LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax顯著下降，LVEDP顯著上升，提示左心室收縮和舒張功能出現障礙。芎歸六君子湯能顯著改善血流動力學和心室舒縮功能，調整心肌順應性。

心肌酶廣泛存在于心肌細胞中，在心肌能量代謝中具有重要價值。肌鈣蛋白是肌肉的主要調節蛋

白，心梗后心肌細胞缺血缺氧，細胞膜通透性升高，心肌酶和肌鈣蛋白復合物釋放入血，導致血液中含量升高。心肌損傷程度和范圍不同，升高幅度也不同。該實驗結果顯示，模型組心肌酶譜和肌鈣蛋白含量顯著升高，表明心肌損傷使通透性增加。各給藥組尤其是芎歸六君子湯組能顯著降低其含量，提示芎歸六君子湯能維持心肌細胞膜結構的完整性，減輕心肌損傷。

血管內皮功能不僅是冠心病的基礎起始步驟,還是該病發展過程中的關鍵步驟[7]。血管內皮能夠產生和釋放血管活性物質，調節血凝和纖溶，參與炎癥和免疫反應，調節白細胞、血小板對內皮表面黏附、脂質氧化和血管通透性，維持心血管系統穩態。心梗后心肌缺血誘發血管內皮損傷，促使細胞因子釋放，導致微循環障礙和心肌細胞增殖。該研究顯示，芎歸六君子湯能調節內皮活性物質釋放，緩解血管痙攣，降低血液高凝，抑制血栓，促進微血管內環境穩定。

心梗患者廣泛存在氣虛痰濁血瘀病機，芎歸六君子湯以黨參、白術、茯苓、甘草健脾補氣，促進脾胃運化和氣血化生；半夏、陳皮化痰理氣，消除痰脂；川芎、當歸活血祛瘀，理氣行滯，8藥和參共奏補氣生血、化痰祛瘀之效，不僅能改善脾胃功能，還能促進心肌供血，消除痰濁瘀滯。該研究結果顯示，芎歸六君子湯能改善心肌梗死大鼠心室舒縮功能和順應性，降低心肌梗死面積，改善心肌酶、血管內皮功能和組織病理學變化，對于心肌梗死具有良好的治療作用。該結果表明，改善脾胃功能、促進運化，能夠化生氣血、消除痰瘀，促進心肌供血和細胞穩定，緩解血管痙攣、血液高凝，減輕心肌損傷，對于治療心肌梗死大有裨益。關于其治療機制，尚有待下一步研究予以深入闡釋。