結核感染T細胞斑點試驗在淋巴結結核中的診斷意義

郭琪，胡嬌，張毅

（西安市胸科醫(yī)院外科，陜西 西安 710000）

淋巴結結核是一種十分常見的肺外結核病，據(jù)以往文獻報道，在兒童中約占全部肺外結核的52.9%，在成人中發(fā)病率略低于兒童，且大多都合并有肺部結核感染[1]。單純的淋巴結結核的診斷往往十分困難，尤其在早期更加困難，主要是因為典型的臨床表現(xiàn)不明顯，影像學缺乏特異性等。既往的結核診斷方法主要有抗酸染色、細菌培養(yǎng)、結核抗體三項檢測、PPD試驗（tuberculin skin test，TST）等，但上述測方法的特異性和靈敏性尚不令人滿意，給結核早期診斷帶來了困難。近年來，隨著科學技術的進步，結核感染T細胞斑點試驗廣泛用于結核病的診斷中，且具有較好的臨床效果[2-3]。但是，既往尚無研究針對單純淋巴結結核進行結核感染T細胞斑點試驗（T-cell spot of tuberculosis，T-spot.TB）實驗的相關性分析，旨在進一步排除肺部結核感染等的影響，單純分析T-spot.TB對于淋巴結結核的意義。

本文通過對2015年9月1日～2017年2月1日就診于西安市胸科醫(yī)院的單純淋巴結腫大的患者（合并有肺部感染灶的排除）進行T-spot.TB和TST實驗，分析比較不同方法對于疾病診斷的靈敏度和特異性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年9月1日～2017年2月1日就診于西安市胸科醫(yī)院的單純淋巴結腫大（合并有肺部感染的排除，既往有結核接觸史的排除），并經(jīng)手術、淋巴結活檢或者穿刺病理進行疾病確診的患者，共計148例。且所有兒童既往均行基礎卡介苗等免疫。

1.2 T-spot.TB實驗 使用肝素抗凝管采集患者5 ml的外周靜脈血，用密度梯度離心法分離出外周血單個核細胞。在已包被抗γ-干擾素抗體微量板的4孔板中，分別加入4種不同的對照物進行對比：陽性對照物為植物血凝素、陰性對照物為AIM-V細胞培養(yǎng)液、結核桿菌特異混合多肽A[早期分泌抗原靶蛋白 6（early secreted antigenic target，ESAT-6）抗原]、結核桿菌特異混合多肽B[培養(yǎng)濾液蛋白10（culture filtrateprotein 10，CFP-10）抗原]，后在上述4孔中每孔中加入含2.5×105個外周血單個核細胞，再將微量板放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～20 h（環(huán)境為37℃，5%CO2），用PBS洗板4次后，加入堿性磷酸酶標記的γ-干擾素抗體，PBS洗脫，顯色，PBS終止，最后計數(shù)斑點數(shù)，以測量孔點數(shù)是陰性對照的2倍以上或者比陰性對照多5個點為判定陽性。

1.3 TST實驗 選取0.1 ml含5個單位的結核桿菌純蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）對患者行前臂尺側皮內(nèi)注射，72 h后觀察結果。硬結的直徑≥10 mm或合并有水泡、雙圈考慮為TST陽性。

2 結果

根據(jù)病理結果，單純淋巴結腫大的患者分為淋巴結核組（48例），急慢性淋巴結炎組（90例），轉移性腫瘤（7例），惡性淋巴瘤（3例）。而在淋巴結結核組內(nèi)，根據(jù)淋巴結腫大位置分組：頸部（30例），腋下（15例），腹股溝（3例）；根據(jù)年齡分組，小于14歲（11例），大于14周歲（37例）；根據(jù)性別分組，男性20例，女性28例。

根據(jù)病理分組，淋巴結核組的TST及T-Spot.TB陽性率均明顯高于非結核組，根據(jù)卡方檢測，差異具有明顯統(tǒng)計學意義（p＜0.01）；根據(jù)配對卡法檢測，比較淋巴結核組患者TST與T-Spot.TB陽性率（分別為66.7%和87.5%），T-Spot.TB陽性率明顯高于TST，差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）。

T-spot.TB對于單純淋巴結核診斷的靈敏度和特異性分別為87.5%和98%；而TST對于診斷的靈敏度和特異性分別為66.7%和85%，差異均具有統(tǒng)計學意義，見表1和表2。

表1 不同疾病的TST及T-Spot.TB結果Table 1 The result of TST and T-spot.TB in different disease

表2 淋巴結核患者TST與T-Spot.TB陽性率比較Table 2 Comparison of positive rates of TST and T-Spot.TB in patients with lymphatic tuberculosis

根據(jù)年齡性別等分組，患者的T-Spot.TB陽性率與性別、包塊位置、年齡等均無相關性，具體見表3。

表3 不同分組的淋巴結核患者的T-Spot.TB陽性率比較Table 3 Comparison of T-Spot.TB positive rates in different groups of patients with lymphoid tuberculosis

3 討論

結核病目前仍是危害公共衛(wèi)生安全的全球問題之一，仍有較高的發(fā)病率和致殘致死率，且近年來仍有逐漸升高的趨勢，文獻報道可能與免疫抑制性疾病發(fā)病率增高有關[4-5]。目前結核病診斷的金標準仍是病原學或病理學診斷，但是在疾病發(fā)病初期很難獲得。

淋巴結結核是肺外結核中發(fā)病率最高的一種，且國內(nèi)有學者報告其患病率高達80%～90%，且大部分均合并有肺部感染[1]。但是，單純的淋巴結結核因缺少特異性表現(xiàn)，往往早期在臨床上很難診斷，甚至會影響治療。所以，探討單純淋巴結結核早期診斷的意義就至關重要，并且具有十分重大的意義。

既往文獻曾有報道T-Spot.TB對于肺外結核的診斷的研究：Youden等報道T-spot.TB對于淋巴結核的靈敏度為55%[6]，這低于本實驗的報道，這可能與國外環(huán)境、飲食生活習慣及治療監(jiān)測水平有關；國內(nèi)魯曦、李王平等曾報道γ-干擾素釋放實驗對于全部肺外結核診斷的整體靈敏度和特異性分別為81%和53%，但對于淋巴結的靈敏度88%[7],這與本研究報道的靈敏度相同，但特異性不如本研究報道，這可能與研究的入院條件有關，本研究單純研究T-Spot.TB實驗與淋巴結結核的相關性，排除肺結核等感染。而這些結果均顯示，T-Spot對于淋巴結核的診斷具有很好的準確性和特異性。

同時，本研究還針對年齡、淋巴結部位、性別等進行分層研究，結果顯示T-Spot對于不同年齡、部位及不同性別的患者均具有相似的診斷準確率。而本次研究入選的所有兒童均接受基礎免疫，說明T-spot研究不受卡介苗免疫的干擾。

綜上所述，結核感染T細胞斑點試驗在診斷淋巴結結核中具有良好的敏感性和特異性，對于單純淋巴結腫大的患者具有重要臨床應用價值。