聚山梨酯80對維生素K₁注射液質量的影響

陳辰 顧春燕 黃臻輝

摘 要 目的：考察不同廠家聚山梨酯80對維生素K1注射液質量的影響。方法：采用氣相色譜法測定聚山梨酯80中脂肪酸的含量，并考察使用不同廠家聚山梨酯80制備的維生素K1注射液的穩(wěn)定性。結果：聚山梨酯80中油酸含量越高，其他脂肪酸含量越低表明其純度越高，質量越好，制備的維生素K1注射液產(chǎn)品越穩(wěn)定。結論：聚山梨酯80的質量是影響維生素K1注射液質量的重要因素。

關鍵詞 聚山梨酯80 維生素K1注射液 氣相色譜法 脂肪酸

中圖分類號：R944.12 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2018）13-0084-03

Effect of polysorbate 80 on the quality of vitamin K1 injection

CHEN Chen*， GU Chunyan， HUANG Zhenhui**

（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Objective： To evaluate the effect of polysorbate 80 on vitamin K1 injection by comparing the quality of polysorbate 80 from different manufacturers. Methods： The content of fatty acids in polysorbate 80 was determined by gas chromatography and the stability of vitamin K1 injection prepared with polysorbate 80 from different manufacturers was investigated. Results： The higher the oleic acid content in polysorbate 80， the lower the other fatty acid content， the higher is the quality of vitamin K1 injection and furthermore the prepared vitamin K1 product is more stable. Conclusion： Polysorbate 80 is an important factor affecting the quality of vitamin K1 injection.

KEY WORDS polysorbate 80； vitamin K1 injection； gas chromatography； fatty acid

藥物制劑是由活性成分和輔料組成。輔料是制劑生產(chǎn)過程中必不可少的重要組成部分，藥用輔料不但賦予藥物具體的用藥形式，而且常常影響藥物的穩(wěn)定性、藥效發(fā)揮及制劑質量，可以說沒有輔料就沒有制劑[1]。

聚山梨酯80（polysorbate 80）化學名聚氧乙烯20山梨醇酐單油酸酯，為淡黃色至橙黃色的黏稠液體，是由山梨醇、脂肪酸和環(huán)氧乙烷等聚合形成的高分子混合物。聚山梨酯80是一種常用的藥用輔料，可作為乳化劑、增溶劑、潤滑劑或穩(wěn)定劑等，在注射劑中的應用極為廣泛。近年來含聚山梨酯80的維生素K1注射劑等多有不良反應發(fā)生，甚至出現(xiàn)嚴重不良反應現(xiàn)象，越來越引起人們的重視。研究表明，聚山梨酯80是引起不良反應的主要原因之一，其安全性越來越引起人們的關注[2-4]。

由于維生素K1水溶性很弱，穩(wěn)定性較差，故須在注射劑中添加聚山梨酯80作助溶劑[5]，且用量較大，占該制劑輔料用量的61%（w/w）。因此，維生素K1注射液的質量（穩(wěn)定性）除了與原料本身性質有關外，還與加入的輔料如聚山梨酯80質量有關。目前我國提高了對聚山梨酯80的質量要求，現(xiàn)行《中國藥典》2015版將聚山梨酯80作為藥用輔料、增溶劑和乳化劑等，較2010版藥典新增加了對脂肪酸含量的要求，并且對聚山梨酯80（供注射用）也有了明確的質量要求，從而進一步提高了注射劑中聚山梨酯80的質量[6]。本研究以制劑的穩(wěn)定性為評價指標，對不同來源的聚山梨酯80經(jīng)相同工藝制備的維生素K1注射液進行考察，評價聚山梨酯80質量對制劑穩(wěn)定性的影響。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

聚山梨酯80（A公司，批號：20140502；B公司，批號：20141001；C公司，批號：309363C）；14%三氟化硼甲醇溶液、肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、棕櫚油酸甲酯、硬脂酸甲酯、亞油酸甲酯、亞麻酸甲酯以及油酸甲酯對照品（Sigma-Aldrich公司）；正庚烷（國藥集團化學試劑有限公司）；維生素K1（山東廣通寶藥業(yè)有限公司，批號：20140502）；維生素K1對照品（英國藥典，批號：003041）。

1.2 實驗儀器

7890A氣相色譜儀、石英毛細管柱（0.25 mm×100 m，以88%氰丙基聚硅氧烷為固定液）、氫火焰離子化檢測器（美國Agilent公司）；2695高效液相色譜儀、Kromasil-C18色譜柱（4.6 mm×100 mm，3.5 mm）（美國Waters公司）。

1.3 方法

1.3.1 聚山梨酯80的檢測方法

按照《中國藥典》2015版四部中對聚山梨酯80（供注射用）項下進行色譜分析[6]。

1.3.1.1 標準曲線

分別精密移取油酸甲酯對照品（30 mg/ml）0.5，1.5，2.5，4.0，6.0，10.0 ml、亞油酸甲酯對照品（8.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、硬脂酸甲酯對照品（10.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.5，4.0 ml、肉豆蔻酸甲酯對照品（6.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、棕櫚油酸甲酯對照品（11.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、棕櫚酸甲酯對照品（11.0 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml和亞麻酸甲酯對照品（12.0 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml，置于各10 ml量瓶中，取樣進行色譜測定。以相應脂肪酸甲酯濃度（mg/ml）為x，峰面積為y，繪制標準曲線，并以最小二乘法計算得回歸方程。

1.3.1.2 精密度試驗

取20141001批聚山梨酯80配制供試品溶液，連續(xù)進樣6次，計算RSD。

1.3.1.3 重復性試驗

取20141001批聚山梨酯80，經(jīng)過甲酯化處理后進行氣相色譜測定。分別處理6批，考察試驗的重復性。

1.3.1.4 不同廠家聚山梨酯80的測定

分別取A公司，B公司，C公司的聚山梨酯80樣品，按照《中國藥典》2015年版四部[6]中對聚山梨酯80（供注射用）項下的檢測方法進行檢查。

1.3.2 維生素K1注射液的制備方法

將處方量的無水醋酸鈉，醋酸加入適量的注射用水中，攪拌均勻，形成緩沖溶液。按順序將處方量的聚山梨酯80，維生素K1，丙二醇于燒杯中，不斷攪拌，使其乳化后加入醋酸鈉溶液中，接著稱取處方量的焦亞硫酸鈉于上述藥液中，并用注射用水將藥液稀釋至終體積，經(jīng)微孔濾膜過濾后，灌封即得維生素K1注射液。制備的維生素K1注射液，批號為150301采用A公司的聚山梨酯80，批號為150302采用B公司的聚山梨酯80，批號為150303采用C公司的聚山梨酯80。

1.3.3 維生素K1注射液有關物質的檢測方法

維生素K1注射液有關物質的檢測方法按照《中國藥典》2015年版二部[7]中對維生素K1注射液項下有關物質的檢查方法。

1.3.4 高溫影響因素試驗

將樣品按照《中國藥典》2015年版四部中原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則[6]354-356中的方法置于高溫60℃條件下進行試驗。

1.3.5 加速和長期穩(wěn)定性試驗

加速和長期穩(wěn)定性試驗均按《中國藥典》2015年版操作[6]354-356。

2 結果

2.1 聚山梨酯80的檢測結果

2.1.1 各脂肪酸標準曲線

以相應脂肪酸甲酯濃度（mg/ml）為x，峰面積為y，繪制標準曲線，并以最小二乘法計算得回歸方程，結果線性均良好（表1）。

2.1.2 精密度和重復性試驗

精密度試驗結果油酸甲酯、亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯峰面積的RSD值為1.1%，1.5%，0.8%，重復性試驗結果油酸甲酯、亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯峰面積的RSD分別為0.9%，1.1%，1.3%。

2.1.3 不同廠家聚山梨酯80的檢測結果

不同廠家的聚山梨酯80中除脂肪酸外的其他項測定結果均無顯著性差異（表2），而脂肪酸檢測結果有顯著性差異，根據(jù)《中國藥典》2015年版四部[6]的要求判斷，A公司產(chǎn)品的各項指標均不符合藥典要求，B公司產(chǎn)品中的油酸和亞油酸超過了藥典要求，而C公司產(chǎn)品的各項指標均符合藥典要求，表明C公司的聚山梨酯80質量最好（表3）。

2.2 聚山梨酯80對維生素K1注射液中有關物質的影響

自制3批維生素K1注射液中有關物質的測定結果表明150301和150302批維生素K1注射液經(jīng)過60 ℃存放10 d后有關物質均超過《中國藥典》2015版規(guī)定的要求，而用C公司的聚山梨酯80制備的制劑同條件下有關物質雖略有增加，但仍符合藥典要求（表4）。

2.3 加速和長期穩(wěn)定性試驗

加速和長期穩(wěn)定性試驗表明，使用A、B公司的聚山梨酯80制備的維生素K1注射液，不僅含量降解較快、單個雜質增加比較明顯，且有關物質含量均超過了藥典規(guī)定的要求；只有C公司制備的維生素K1注射液經(jīng)過長達24個月存放后有關物質含量均符合《中國藥典》2015版的要求（圖1）。表明使用油酸含量較高的聚山梨酯80制備的維生素K1注射液的質量較穩(wěn)定。

3 討論

不同來源的聚山梨酯80對維生素K1注射液的質量有著重要的影響。其原因是聚山梨酯80中的游離脂肪酸主要來自合成原料油酸，而油酸存在于植物或動物中，不同來源油酸的純度和價格差別很大。目前國內生產(chǎn)的聚山梨酯80的公司較多，產(chǎn)品質量包括外觀性狀、顏色等參差不齊，為了最大程度地攫取經(jīng)濟利潤，部分輔料供應商會選擇劣質的油酸合成聚山梨酯80，使得聚山梨酯80中含有較多的脂肪酸雜質[8-9]。因此，制備維生素K1注射液應該選擇純度高、雜質含量低的聚山梨酯80，以最大限度地保障聚山梨酯80產(chǎn)品的安全性，從而提高維生素K1注射液的質量，保證注射劑的安全性。本研究主要對聚山梨酯80的組成成分進行了分析，但其各成分與制劑的溶血和致敏等不良反應的關系尚有待于進一步研究闡明。

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