HPLC法分析土壤中烯丙苯噻唑

段亞玲，楊 浪，李景壯，何 鈺，楊鴻波，譚 紅

（貴州省分析測試研究院，貴陽 550000）

烯丙苯噻唑是由日本明治制果株式會社研究開發的苯并噻唑類化合物，最初作為殺菌劑應用。20世紀末期，隨著活化酯的上市應用，抗病激活劑的理論也隨之誕生。烯丙苯噻唑通過激發作物系統獲得抗性，抵御病原菌侵害，實現防病效果[1]。烯丙苯噻唑用于防治水稻稻瘟病，由于其低毒，對水稻安全，已經成為東南亞稻區使用面積最廣的抗病激活劑[2]。烯丙苯噻唑的相關研究主要集中在合成[1,3]、對稻瘟病的防治效果等[4-9]。關于烯丙苯噻唑殘留的液相色譜分析方法報道較少，其殘留分析主要采用氣相色譜法[10-13]。氣相色譜檢測法雖然檢測限低，但樣品前處理較復雜，耗時多，且成本高。為評價烯丙苯噻唑在土壤環境中的安全性，本試驗以3種具有代表性的土壤（黑土、水稻土和紅壤）為研究材料，建立液相色譜法測定烯丙苯噻唑在土壤中的殘留。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀，美國Waters公司；超聲波清洗器，上海科導超聲儀器有限公司；LT1002T電子天平，常熟市天量儀器有限責任公司；XSE105DU電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；移液槍，德國Eppendorf股份公司。

烯丙苯噻唑標準品（99%），國家農藥產品質量監督檢驗中心；乙腈（色譜純），德國Merck公司；甲醇（色譜純），美國Honeywell公司。

1.2 試驗材料

本試驗以黑土、水稻土、紅壤為試驗土樣，其中黑土采集于吉林省集安市，水稻土采集于貴州省關嶺縣稻田，紅壤采集于云南省宣威市。土壤樣品采集后，揀出碎石、砂礫及植物殘體等，風干后，研磨使其過2 mm篩，于4℃冰箱保存備用。土壤的理化性質見表1。

表1 土壤理化性質

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理

稱取20.0 g土壤（黑土、紅壤和水稻土）于250mL具塞三角瓶中，加入50 mL乙腈，將其置于超聲波中水浴超聲提取10 min，靜置后取上清液過0.45 μm有機濾膜，HPLC定量分析。

1.3.2 儀器條件

色譜柱：Shim-pack CLC-ODS（M）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：V（乙腈）∶V（水）=70∶30；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；檢測器：PAD；檢測波長：210 nm；進樣體積：10 μL。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用Waters e2695高效液相色譜儀-二極管陣列檢測器對烯丙苯噻唑的標樣溶液進行波長掃描。結果顯示，在210 nm波長附近，烯丙苯噻唑吸收峰最大，且土壤樣品在此波長下無干擾峰，靈敏度滿足分析的要求。因此，烯丙苯噻唑的檢測以210 nm為檢測波長。

2.2 色譜柱的選擇

烯丙苯噻唑色譜分析方法的報道相對較少，而關于其液相色譜分析方法的報道更少。試驗比較了填料為C18和ODS的色譜柱在液相色譜儀上的分離情況。結果表明，填料為ODS的色譜柱分離效果較好，峰形對稱，出峰時間快。因此，選用Shim-pack CLC-ODS（M）色譜柱分析土壤中的烯丙苯噻唑。烯丙苯噻唑標準品色譜圖見圖1。

圖1 烯丙苯噻唑標準品色譜圖

2.3 提取溶劑的選擇

烯丙苯噻唑在丙酮、乙腈、甲醇中均具有較好的溶解性。姜忠濤等[11]在提取糙米中的烯丙苯噻唑時，先加入水超聲振蕩混勻10 min，再加入丙酮振蕩提取。劉照清等[13]提取土壤中烯丙苯噻唑時，加入10 g NaCl、100 mL乙腈于振蕩器上振蕩提取2 h。2種溶劑均具有較高的回收率，為85.8%～99.1%。本試驗比較了乙腈和甲醇對烯丙苯噻唑的提取效率。結果表明：烯丙苯噻唑在乙腈和甲醇中的平均回收率分別為97.1%和83.7%，滿足農藥殘留分析的要求。相對而言，乙腈的提取效率更高。因此，提取土壤中烯丙苯噻唑選擇乙腈為提取溶劑。

2.4 提取方式的選擇

試驗比較了超聲和振蕩2種方式下烯丙苯噻唑的提取回收率。結果表明，超聲10 min、20 min和30 min時的提取回收率無顯著差異，且與振蕩30 min的回收率相當，均超過95%?？紤]時間等因素，故采用超聲10 min的方式來提取土壤中的烯丙苯噻唑。

2.5 標準曲線與線性范圍

準確稱取0.105 3 g（準確至0.1 mg）烯丙苯噻唑（質量分數為95%）于稱量瓶中，用乙腈少量多次溶解，轉移至100 mL容量瓶中，定容，搖勻制得1 000 mg/L烯丙苯噻唑母液，冷藏備用。分別移取不同體積的母液，配制成質量濃度分別為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mg/L的系列標樣溶液。以烯丙苯噻唑的質量濃度為橫坐標（x），響應峰面積為縱坐標（y），進行線性回歸，見圖2。

圖2 烯丙苯噻唑標準曲線

結果表明，烯丙苯噻唑的峰面積與質量濃度具有良好的線性相關性，線性方程為y=84 055 x＋884.79，R2=1.00。此條件下土壤中烯丙苯噻唑的保留時間約為4.0 min。

2.6 儀器的精密度

在1.3.2儀器條件下，待儀器基線穩定后連續對同一質量濃度的烯丙苯噻唑標樣溶液（5.0 mg/L）進行6次平行測定，進樣量為10 μL，結果見表2。

表2 儀器精密度試驗

峰面積的變異系數（RSD）為0.67%，保留時間的RSD為0.09%。該方法重現性好，儀器精密度高。

2.7 方法的準確度和精密度

方法的準確度和精密度通過添加回收率和變異系數來表示[14]。在3種土壤中分別加入0.20 mL質量濃度為100.0、1 000.0 mg/L的烯丙苯噻唑標樣溶液，使添加質量分數分別為1.0、10.0 mg/kg，每組設5個平行試樣。土壤樣品經處理后，HPLC測定3種土壤中烯丙苯噻唑殘留量，結果見表3。由表3可以看出，烯丙苯噻唑在黑土、水稻土和紅壤中的平均添加回收率分別為96.2%～98.4%、98.0%～98.2%和96.4%～97.1%，RSD分別為1.3%～1.4%、0.8%～1.3%和1.1%～1.7%。方法的準確度和精密度均滿足農藥殘留分析要求[15]。烯丙苯噻唑在土壤中的添加色譜圖見圖3。

表3 烯丙苯噻唑在3種土壤中的平均添加回收率

圖3 烯丙苯噻唑在土壤中的添加回收譜圖（a—黑土、b—水稻土、c—紅壤）

2.8 最小檢出量和最低檢測濃度

以S/N=3和S/N=10計算最小檢出量（LOD）和最低檢測質量濃度（LOQ）。本方法中烯丙苯噻唑的LOD為1.0×10-9g，LOQ為0.2 mg/L。

3 結論

本文建立了一種液相色譜分析方法測定土壤中烯丙苯噻唑的殘留量。土壤樣品經乙腈超聲提取，靜置后過有機濾膜，HPLC-PAD直接測定。當添加質量分數為1.0～10.0 mg/kg時，烯丙苯噻唑在3種土壤中的平均添加回收率為96.2%～98.4%，RSD為0.8%～1.7%。方法最小檢出量為1.0×10-9g，最低檢測質量濃度為0.2 mg/L。方法分析速度較快，前處理簡單，準確度、精密度及靈敏度均滿足農藥殘留分析的要求，可用于土壤中烯丙苯噻唑殘留量的檢測。