布魯氏菌病診斷技術的研究進展

布魯氏菌病是一種由布魯氏菌引起的危害嚴重的人畜共患傳染病。該病給人類健康帶來了嚴重危害，給畜牧業造成巨大的經濟損失。本文將從布魯氏菌病診斷技術的研究進展進行綜述。面的應用越來越廣泛。布魯氏菌特有的DNA序列使PCR技術的檢測效果特異而敏感。PCR技術主要用于人布魯氏菌病的檢測。然而，PCR技術用于布魯氏菌病的診斷中也有一定的問題：已治愈患者體內仍能檢測到布魯氏菌DNA。

一、病原學診斷

1.布魯氏菌的分離培養。細菌的分離培養是診斷布魯氏菌病的“金標準”，但失敗率高，對慢性布魯氏菌病幾乎無效，常用于羊種布魯氏菌病和豬種布魯氏菌病的鑒別診斷，很少用于牛種布魯氏菌。布魯氏菌生長困難而且緩慢，Araj對173位急性布魯氏菌病（可能是羊種布魯氏菌病）患者的細菌分離培養試驗中有91例成功。分離出細菌的時間間隔如下：1周～13%；2周～65%；3周～19%；4周～3%。

2.顯微鏡檢查。采集流產胎衣、絨毛膜水腫液、肝臟、脾臟、淋巴結、胎兒和胃內容物等組織，制成抹片，用柯茲羅夫斯基染色法或改良柯氏法染色，鏡檢，如染成紅色球桿狀或短桿狀，即為布魯氏菌，小桿菌，而其他細菌則呈現藍色。這種方法操作簡單，結果判定直觀明了，但失敗率較高。

3.PCR技術。今年來，隨著分子生物學技術的發展，PCR技術在布魯氏菌病的檢測，種型鑒定等方

二、血清學診斷

機體在感染布魯氏菌約一周后便可產生特異性抗體，血清學診斷技術通過對抗體的檢測來診斷布魯氏菌病，目前常用的血清學診斷技術主要有試管凝集試驗（SAT）、抗球蛋白試驗（AHG或Coombs試驗）、補體結合試驗（CFT）、以及酶聯免疫吸附（ELISA）試驗等檢測方法。

1.凝集試驗。試管凝集試驗（SAT）是目前使用最廣泛的布魯氏菌病檢測方法，對急性布病有很好的檢測效果，試驗操作簡單，但耗時較長。試管凝集試驗結果的判定標準為：牛、馬、駱駝等大家畜和人的血清稀釋度1∶100及以上為陽性，1∶50為可疑；豬、羊（綿羊、山羊）、犬等小家畜血清稀釋度1∶50以上為陽性，1∶25為可疑。

虎紅平板凝集試驗（RBPT）是用被虎紅染色并滅活處理后的布魯氏菌作為抗原，根據待檢血清是否與其發生凝集而判斷陰陽性，敏感性較高，操作簡便，耗時短，成本低，但準確性易受到溫度、緩沖液PH等因素的影響。

2.抗球蛋白試驗（AHG）或庫姆斯試驗（Coombs）。抗球蛋白試驗克服了前帶效應對凝集試驗的影響。許多情況下，AHG可以檢測出凝集反應的結果為陰性的陽性樣本。由于AHG檢測針對IgG抗體，所以將此法用于檢測慢性布病收到了良好的效果。

3.補體結合試驗（CFT）。補體結合試驗（CFT）原理是抗原與相應的抗體結合形成抗原抗體復合物時，抗體分子的構象變化，Fc片段上的補體結合位點暴露，補體與之結合，無法與加入的溶血素和紅細胞形成的復合物結合，就沒有溶血現象的產生；反之，當待檢血清中沒有相應抗體，游離的補體與加溶血素和紅細胞復合物結合導致溶血現象。因此可以根據溶血現象的發生與否來判斷受檢血清中是否存在布魯氏菌的特異性抗體。補提結合試驗操作復雜，結論受主觀因素影響較大，不利于基層工作的檢測。

4.酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是一項具有較高靈敏度的檢測技術，但其特異性卻比凝集試驗低。用于布魯氏菌病診斷的方法主要有間接酶聯免疫吸附試驗（iELISA）、斑點酶聯免疫吸附方法（Dot-ELISA）及競爭酶聯免疫吸附試驗（cELISA）等。Magee比較了ELISA（IgG），補體結合試驗和抗人球蛋白試驗，認為ELISA反應最敏感。

5.各種血清學診斷方法的分析。試管凝集試驗，虎紅試驗，ELISA（IgM）最好在急性感染的早期階段使用，因為這些試驗所檢測的IgM是機體從感染后

3 d左右就開始產生初始抗體。機體感染7 d左右產生IgG和IgA抗體，可以通過補體結合試驗，抗球蛋白試驗，巰基乙醇試驗和ELISA（IgG）試驗檢測。2002年，Nielsen根據多篇文獻分析了幾種常用的布魯氏菌免疫學診斷方法敏感性、特異性，具體結果結果見表1：

表1 各血清學診斷試驗敏感性、特異性及表現指數

目前存在多種布魯氏菌病的診斷方法，但都存在一定的缺陷，迄今為止沒有任何一種診斷方法能夠完全準確的檢測出布魯氏菌病，一般都是綜合多種方法的檢測結果用于診斷布魯氏菌病的。布魯氏菌病的凈化需要將疫苗免疫和陽性動物的淘汰相結合，而現有的診斷方法無法區別疫苗接種動物和自然感染動物，但相信隨著對布病診斷技術的不斷研究，快速、準確，能夠區分自然感染動物和疫苗免疫動物的布魯氏菌病診斷方法一定能夠建立出來，這將為布病的防制與凈化產生重大意義。