細菌培養(yǎng)法與PCR法對細菌性陰道炎輔助診斷的價值

劉 渝

（荊州市沙市區(qū)婦幼保健院，湖北 荊州 434000）

陰道菌群失調所引起的致病菌大量繁殖是導致細菌性陰道炎病發(fā)的主要原因，若不能有效控制細菌繁殖則可能導致炎癥累及盆腔或子宮，嚴重者可導致患者不孕，因此盡早確診并采取有效措施進行治療是遏制細菌性陰道炎病情進展的主要措施[1]。本次研究基于以上背景，對細菌培養(yǎng)法與PCR法輔助診斷細菌性陰道炎的價值進行了對比，現回顧性分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取我院2015年5月至2016年6月的140例細菌性陰道炎患者為研究對象，年齡21～41歲，平均（30.34±1.66）歲。入選患者均符合《婦產科學》[2]中所述的細菌性陰道炎診斷標準，且經婦科查體確診為細菌性陰道炎。

1.2 方法：①標本準備。以無菌棉簽于患者陰道后穹隆處蘸取分泌物后置入無菌鹽水中保存送檢。②細菌培養(yǎng)法。將標本置于專用培養(yǎng)基中，在37 ℃二氧化碳孵箱中持續(xù)培養(yǎng)45 h，形成菌落后取出其中呈滴露狀、灰色且光滑的半透明菌群，按照細菌鑒定儀相關檢測標準進行操作鑒定。③PCR法（聚合酶鏈式反應檢驗）。取1000 μL含無菌鹽水的標本置入離心管，以12000轉/分的速率持續(xù)離心10 min后去除上清液，并在沉淀當中加入堿性裂解液后震蕩混勻，在干式金屬恒溫儀中孵育，溫度設為60 ℃，持續(xù)15 min，取出以12000轉/分速率離心10 min，再取上清液制作DNA模版進行PCR擴增，反應體系為：53.5 μL雙蒸餾水，10.0 μL DNA模版、引物、10×10.0 μL反應緩沖液，4×dNTPs各1.25 mmol/L，0.5 μL Taq聚合酶，總體積100.0 μL。加入反應體系后置于PCR儀中，反應條件為：94 ℃持續(xù)60 s，37 ℃持續(xù)60 s，72 ℃持續(xù)120 s，共25～30個循環(huán)，結束后以瓊脂糖凝膠電泳對檢測結果進行觀察。

1.3 觀察指標：①對兩種檢驗方法陽性檢出率、敏感性、特異性進行統計對比。陽性判斷標準分別為：細菌培養(yǎng)法：生化鑒定培養(yǎng)基上典型菌落為目的菌落則判定為陽性；PCR法：邊緣整齊、條帶＜1 mm，在預期堿基大小范圍內，背景無引物二聚體和藥斑，若出現其他條帶或預期堿基大小范圍外的情況則均視為檢驗無效。②對陽性菌分布情況進行觀察對比。

1.4 統計學分析：以SPSS19.0對數據進行統計分析，計數資料以[n（%）]表示，卡方檢驗，多指標對比采取F值檢驗，統計值有統計學差異的判定標準參照P＜0.05。

2 結 果

PCR法陽性檢出率、敏感性、特異性均明顯高于細菌培養(yǎng)法，P＜0.05。見表1。

表1 兩種檢驗方法陽性率、敏感性、特異性對比[n（%）；n=140]

兩種檢驗方法陽性菌中陰道加德納菌檢出率明顯高于其他菌種，P＜0.05，見表2。

表2 陽性菌菌種檢出率對比[n（%）]

3 討 論

相關研究表明，葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌和陰道加德納菌是引發(fā)陰道感染的常見致病菌，通常情況下菌群正常時不會致病，但若女性受陰道分泌物的影響導致陰道內pH值出現異常（＜3.8或＞4.4）則會導致菌群失調，從而形成致病菌[3]。本次研究結果表明，兩組陽性菌當中以陰道加德納菌檢出率最高，說明陰道加德納菌為引發(fā)細菌性陰道炎的高危因素。早期采取檢測以確定菌群對提高細菌性陰道炎的治療效果有重要意義，目前常用的輔助診斷法方法包括PCR特定基因表達情況檢測、細菌培養(yǎng)法等，醫(yī)師可以患者主訴和婦科查體為主，并采取實驗室輔助檢測用來確診疾病。

本次研究結果表明：PCR法陽性檢出率、敏感性、特異性均明顯高于細菌培養(yǎng)法，P＜0.05。原因分析為：①細菌培養(yǎng)法曾長期作為臨床診斷細菌性陰道炎的金標準，但這種方法對檢驗環(huán)境要求極為嚴格，且檢驗時間長，操作復雜，人工假陽性率頻發(fā)，因此近年來逐漸被PCR法取代；②PCR是基于DNA半保留復制的一種基因工程技術，檢測敏感性和特異性高，且對標本和檢測環(huán)境要求低，當天即可獲取結果，針對一些培養(yǎng)要求特殊的細菌可采用PCR檢測，從而減少普通細菌培養(yǎng)陰性而產生的誤診和漏診問題。此外，PCR還可通過陽性和陰性細菌濃度比較來確定陰道炎細菌感染的正常參考范圍[4]，若濃度超出參考范圍則可判斷為高度疑似細菌性陰道炎感染病癥，結合臨床體征和癥狀主訴即可做出準確診斷，為迅速控制感染，促進患者早日康復提供依據。綜上，PCR法對細菌性陰道炎的陽性檢出率、靈敏度和特異性更高，有利于臨床確診，值得推廣應用。