血IGRAs在結核性腦膜炎早期診斷中的臨床應用

廖偉祥

（廣州市胸科醫院，廣東 廣州 510180）

結核性腦膜炎（tuberculous meningitis，TBM）是由結核分枝桿菌所導致的腦膜非化膿細菌性炎性病變，有些患者并沒有出現肺結核的癥狀。現今，輔助檢查結核性腦膜炎，靈敏度和特異度不高。而結核性腦膜炎是一種重癥結核，病死率高，出現后遺癥的概率極高[1]。所以早期快速準確診斷結核性腦膜炎對于結核性腦膜炎患者的治療及預后尤為關鍵。本文對研究血IGRAs在結核性腦膜炎早期診斷中的應用價值進行了探討。

1 資料與方法

1.1 研究對象：TBM組45例，所有患者均未進行抗結核治療；男性25例，女性20例，年齡13～68歲，依據臨床癥狀、腦脊液生化和常規、細菌學、結核抗體、結核桿菌PCR檢查、抗結核治療有效而確診。對照組49例，根據其出院診斷排除結核病的患者；男性32例，女性17例，年齡17～81歲。

1.2 方法：全部試驗對象都在進行治療之前，進行外周血抽取，并且血量是4 mL，之后行IGRAs和ATA陽性率檢測。

1.2.1 血IGRAs是運用采購至英國Oxford企業的T-SPOT.TB試劑盒，基于試劑說明書及本科室SOP文件進行操作。運用4 mL外周靜脈血注到真空肝素鋰抗凝管中，并且馬上進行混勻的操作，在4 h內進行外周血單個核細胞（PBMC）的分離操作，并且借助AIM培養液，將其調節到250萬PBMC/mL，再傾倒至T-SPOT.TB試劑盒微孔板內，每例標本應該配備4個微孔板，并且添加AIM（空白）、陽性對照、抗原A（ESAT-6）及抗原B（CFP-10）。最后于5%CO：培養箱中培養16～20 h。第2天，將微孔板拿出，脫去PBS，添加堿性磷酸酶標記的抗1干擾素，在4 ℃的環境下進行培養，培養時間是2 h，再次脫去PBS，顯色，晾干。計算每孔中斑點數量，結果判定：當陰性對照斑點數＜6，A或B抗原孔與其所得差≥6即為陽性；當陰性對照計數≥6，檢測孔斑點數是2倍或2倍以上的陰性對照數值，即為陽性。

1.2.2 血ATA運用酶聯免疫手段進行血漿結核抗體（血ATA）的測定，試劑盒生產商是北京萬泰生物藥業股份有限公司，基于說明書進行試驗操作和結果判讀。

1.2.3 運用SPSS19.0進行分析。運用Pearson Chi-Square（χ2）進行測定方式觀察組和對照組陽性率的對比分析，運用Fisher確切概率法進行觀察組陽性率的對比分析，運用McNemar's test進行組內兩種測試手段所顯示的陽性率對比分析。P＜0.05表示差異具備統計學價值。

2 結 果

兩組研究對象進行治療之前的血IGRAs、ATA診斷陽性率比較，見表1。由表1可知，研究組內使用ATA和IGRAs兩組診斷方法結果存在顯著性差異（χ2=15.401，P=0.001＜0.05）；對照組內使用ATA和IGRAs兩組診斷方法結果存在顯著性差異（χ2=33.800，P=0.001＜0.05）。兩組ATA診斷方法無明顯差異（χ2=0.068，P=0.794＞0.05），兩組IGRAs診斷方法有明顯差異（χ2=78.771，P=0.001＜0.05）。

表1 兩組治療前IGRAs與ATA診斷陽性率比較（%）

3 討 論

結核性腦膜炎是一種嚴重的神經系統感染性疾病，若不能在第一時間進行診治，就會使患者出現神經系統并發癥，最終造成死亡或是導致嚴重殘疾[2]。針對肺外結核而言，TBM的致殘率及病死率都是不容忽視的[3]。TBM病患早期階段中，其臨床表現并不具備很強的典型性，誤診的事件常常發生。因此，早發現、早診斷、早治療是挽救TBM患者生命的關鍵。但目前尚未有一種方法可完全解決TBM的早期診斷問題[4]。基于最新TBM標準，臨床上診斷TBM的標準是運用鏡檢的方式，在腦脊液中發現抗酸桿菌、分離培養到結核桿菌，或是運用PCR的診斷手段，能夠發現結核桿菌[5]。可是，腦脊液涂片中發現抗酸桿菌陽性率并不高，并且結核桿菌的培養周期非常長，因此早期診斷具備極大的復雜性。但是針對腦脊液常規以及生化檢查來說，早期階段中，細胞數相對較高，主要分布的是中性粒細胞，7～14 d后，淋巴細胞不斷增多，并且腦脊液蛋白的含量也漸漸增加。而這時，一般性腦脊液常規檢查就幾乎不能對TBM及其他顱內感染進行鑒別。從影像學上分析，頭部CT或MRI的方式，能夠檢測出TBM病患顱內的病變主要是滲出性，并且能夠發現軟腦膜強化的現象，后期存在阻塞性腦積水征象，但早期改變并無特征性。因而臨床診斷需要結合免疫學和血清學方法。IGRAs是借助早期分泌ESAT-6及CFP-10當成是特異性抗原，對T淋巴細胞進行刺激，進而使其分泌γ-干擾素，分析ELISA檢測γ-干擾素的濃度，進而分析結核感染的情況。本檢測手段受性別、年齡、免疫狀態、BCG等影響較小，但也是臨床上敏感度最高的診斷手段之一。

綜上所述，IGRAs診斷結核性腦膜炎的敏感度及特異度較高，是一種早期快速完成結核感染診斷的免疫學手段，其具備極大的便捷性，并且能夠針對征象不明確、ATA診斷不典型、腦脊液涂片找抗酸桿菌陰性的結核性腦膜炎都有很高的診斷價值，有利于結核性腦膜炎早發現、早診斷、早治療，降低病死率及致殘率。