核酸檢測與酶聯免疫法對無償獻血者血液中HBV HIV梅毒的檢測效果分析

湛玉武

作者單位：516003 廣東 惠州，惠州市中心血站

近年來，通過輸血而患各種傳染病患者的數量明顯增加，血液中含有的病毒，如乙型肝炎病毒(HBV)、梅毒及艾滋病病毒(HIV)等，可通過輸血而導致受血者感染[1]。導致這種情況發生的主要原因是在采血時沒有檢測到血液中的病毒。血液病毒通常應用酶聯免疫法進行檢測，但該方法具有一定的局限性，多種外界因素可影響其檢測結果[2]。因此，對無償獻血者的血液采取抗體和(或)抗原檢測，并選取合適的檢測方法對控制疾病的傳播具有非常重要的意義[3]。強化血液抗原和抗體檢測是血液篩查中關鍵的一步，可以有效防止因輸血而導致的病毒感染[4]。本研究對2015年5月—2017年9月我站采集的21 500份血液標本的檢測數據進行回顧性分析，探討核酸檢測和酶聯免疫法在無償獻血者血液病毒HBV、HIV和梅毒檢測中的效果。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 21 500份血液樣本中，男性供血者12 862例、女性供血者8 638例；年齡20～35歲，平均(25.8±3.4)歲。在5～8 ℃環境下，將所有血液樣本放置于5 mL和7 mL真空抗凝管中，5 mL真空抗凝管血液樣本血漿分離時間≤3 h，然后進行核酸檢測；7 mL真空抗凝管血液樣本血漿分離時間≤24 h，予以酶聯免疫法檢測。在血液采集72 h內完成兩種檢測。

1.2 儀器與試劑 儀器包括自動加樣機(瑞士哈密頓公司生產)、全自動酶聯免疫分析儀(瑞士哈密頓公司生產)、核酸提取儀(華益美生物科技有限公司)、PCR儀(上海賽默科技生物發展有限公司生產)；試劑包括HIV試劑、HBV試劑及梅毒試劑(由上海科華生物技術有限公司提供)。

1.3 檢測方法

1.3.1 酶聯免疫檢測法 將7 mL真空抗凝管血液樣本在室溫下(20～29 ℃)按照試劑操作說明書進行處理。首先以3 000轉/min的速度離心約20 min，隨后保存在2～8 ℃冰箱中。血液樣本離心結束后，用全自動加樣儀進行加樣。最后使用全自動酶聯免疫分析儀進行分析，并記錄最終的檢測結果。為保證血液樣本的準確性，可以對其進行二次確診，確診標準：陽性為波長A值＜1，反之為陰性。

1.3.2 核酸檢測法 對5 mL真空抗凝管血液樣本在室溫下(22～29 ℃)以3 000轉/min的速度離心約20 min，隨后保存在2～8 ℃冰箱中。常規檢查血液樣本，如果檢查結果未發現異常，且符合檢驗標準后將其放置在樣品條架上，并依據一級分配試劑程序按照說明書對其進行常規操作，具體如下：將600 μL結合液、50 μL磁珠加入到A號96孔深孔板中，將100 μL洗脫液及100 μL A、B洗液加入到B號96孔深孔板中，對血液樣本進行裂解；裂解結束后，按照三級程序從A號、B號96孔深孔板中提取核酸，與此同時配備擴增核酸反應液。結合血液樣本量，按照四級核酸擴增程序進行擴增，并將提取核酸后的結合液加入到八聯管中，使用PCR儀進行擴增，詳細、準確記錄擴增結果，挑出結果為陽性的血液樣本，之后進行拆分實驗，確定血液樣本的陽性率。

1.3.3 判定標準 以羅氏定量檢測作為兩種檢測方法判定的“金標準”，從而判斷兩種檢測方法在血液病毒檢測中的效果。

1.4 觀察指標 觀察兩種檢測方法對血液樣本HBV、HIV及梅毒的敏感度和特異度，對比兩種檢測方法的效果。敏感度=真陽性人數/(真陽性人數+假陰性人數)×100%。特異度=真陰性人數/(真陰性人數+假陽性人數)×100%。

1.5 統計學方法 使用SPSS 22.0軟件進行統計分析，計數資料以率表示，進行χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法對HBV的檢測結果比較 核酸檢測法的敏感度和特異度分別為95.31%和91.03%；酶聯免疫法的敏感度和特異度分別為89.06%和89.42%；兩種檢測方法的敏感度和特異度比較，差異均具有統計學意義(χ2值分別為12.254和14.218，P值均＜0.05)。見表1。

2.2 兩種方法對HIV的檢測結果比較 核酸檢測法的敏感度和特異度分別為96.77%和91.64%；酶聯免疫法的敏感度和特異度分別為85.48%和85.01%；兩種檢測方法的敏感度和特異度比較，差異均具有統計學意義(χ2值分別為14.127和15.315，P值均＜0.05)。見表2。

表1 兩種檢測方法對HBV的檢測結果 (份)

表2 兩種檢測方法對HIV的檢測結果 (份)

2.3 兩種方法對梅毒的檢測結果比較 核酸檢測法的敏感度和特異度分別為96.88%和91.07%；酶聯免疫法的敏感度和特異度分別為87.5%和89.41%；兩種檢測方法的敏感度和特異度比較，差異均具有統計學意義(χ2值分別為13.524和13.276，P值均＜0.05)。見表3。

表3 兩種檢測方法對梅毒的檢測結果 (份)

3 討論

傳染病的重要傳播途徑之一就是通過血液傳播，如乙肝、艾滋病、梅毒等，對人們的健康造成極大威脅，而輸血也成為傳染病通過血液傳播的一種特殊形式。加強對無償獻血者血液的檢測，可以降低因輸血而罹患傳染病的發生率。目前，我國大部分血站通常采用酶聯免疫法對血液進行檢測，但是單純應用該檢測方法容易出現漏檢、誤檢等情況，且存在一定的缺陷，對無償獻血者血液檢測的整體質量不是十分理想[5]。

臨床研究發現，血液病毒感染的大部分患者在前期無明顯臨床癥狀，且短期內無發病征象，甚至由于部分患者體內的抗體濃度過低而得不到有效檢測[6]。如果對有血液傳播疾病患者的血液出現漏檢、誤檢等，而此類血液輸入到其他人體內，則可導致受血者被感染。HBV、HIV、梅毒等為臨床常見可經血液傳播病毒，且此類病毒具有潛伏期長的特點，很多患者在不知情的情況下已經被感染。對于已經被感染卻不知情的患者，如果獻血，且在獻血檢測中沒有被準確排查，則會提高血液病毒的傳播率。

核酸檢測是采取病毒核酸擴增技術，在檢測中可以使病毒直接擴增，并匯集到陽性孔內。核酸檢測的優勢如下：①可以縮短病毒感染的窗口期[7]；②具有較高的特異性和敏感性；③可以避免病毒變異、人工操作導致的漏診情況發生[8]。核酸檢測的缺點包括：①進口試劑的價格相對較高；②需要多份血液標本混合篩查；③國產試劑雖然價格不高，但是靈敏度稍差。

酶聯免疫法的檢測目標主要是血液中的病毒抗原[9]，如果患者體內存在血液病毒，其波長會發生變化，實驗人員可以根據波長的具體變化情況判斷患者的病情變化。酶聯免疫法的優勢如下：①檢測速度快；②費用相對較低；③選擇性強、靈敏度高。酶聯免疫法的缺點包括：①操作繁瑣；②漏診率高；③其檢測結果受溫度等多種外界因素的影響。很多血液病毒存在潛伏期，只有過了潛伏期，該病毒才可以被檢測到，臨床通常將該時期稱之為“窗口期”，酶聯免疫法對處于窗口期的血液病毒不能進行有效檢測[10-11]，如HIV的潛伏期較長，非常容易出現漏診。

本研究結果顯示，核酸檢測法在無償獻血者血液HBV、HIV、梅毒的檢測中，其敏感度和特異度均優于酶聯免疫法。綜上，推薦使用核酸檢測法對無償獻血者血液HBV、HIV、梅毒進行檢測。