種雞場稀釋精液人工輸精技術*

劉開明 ，朱立軍 ，王壯波

（1.桃源青林回族維吾爾族鄉農業和農村經營管理服務站，湖南 桃源 415700；2.湖南佳牛牧業科技有限公司，湖南 長沙 410131；3.桃江縣畜牧水產局，湖南 益陽 413400）

湖南年出籠家禽約4億羽，在養殖業中位居第二。如采用自然交配，則公雞母雞比例為1：10。如果采用人工輸精，則為1：30左右。若將原精稀釋 2～3 倍，則可將公母比例擴大到l：60～90，能充分提高優秀種公雞個體的利用率、種蛋受精率，加速良種擴繁，還能大幅度減少種公雞的飼養量，節約飼料及其它費用開支、提高種雞場的經濟效益。

1 器具的準備

1.1 器具 20倍便攜式視屏溫控顯微鏡，冷藏箱，恒溫干燥箱，輸精器，2ml、10ml離心管，載玻片、蓋玻片，衛生紙，雞精液稀釋液或0.9%生理鹽水，10μl、1ml移液器及配套槍頭等。

1.2 器具清洗與消毒 需要重復使用的載玻片、蓋玻片、2ml離心管、移液器槍頭等，使用后立即用清水浸泡（新購器具添加洗滌液浸泡，再用毛刷清洗），清洗干凈，最后 100℃沸水煮30min消毒。包裝后置70℃烘箱或者消毒柜中備用。

2 雞精液稀釋液保存方法

可以選用雞專用精液稀釋液，如HF雞精液稀釋液(發明專利號ZL201510660641.4，生產許可批文號 Q/OCKA017-2016),應將5ml/支的稀釋液在采精前一晚提前從-20℃左右的冷凍室移入冰箱冷藏室解凍備用，稀釋液保存必須防止污染，用干凈塑料袋密封好，尤其是管口保持干凈，再放入冰箱冷凍室保存備用。如用生理鹽水作稀釋液，則為常溫保存。

3 種公雞采精方法

多采用背腹按摩采精法，具體操作因種雞場設備和技術人員而異，常采用雙人站立式和坐式兩種方法。現以雙人站立式背腹部按摩采精方法介紹如下：

1人保定公雞，1人按摩采精同時接取精液。首先公雞保定者從種公雞籠中用一只手抓住公雞的雙腳，將公雞腹部置于雞籠門沿上，尾部稍抬高。采精者站在保定者左側，用右手食指與中指或無名指夾住采精杯，采精杯口朝向手背防止雞身上灰塵掉進杯中。采精者左手大拇指和食指自然分開微彎曲，手掌心向下從公雞的背鞍部向尾羽方向由輕到重來回撫摩數次，同時持采精杯的右手大拇指和其余四指分開，從公雞的腹部向肛門方向緊貼雞體作同步按摩，左右手配合默契。按摩幾次后，公雞很快出現性反射動作，尾部向上翹起，肛門也向外翻，看到生殖器勃起時，左手迅速轉向尾下方，用左手拇指和食指迅速跨捏在泄殖腔上兩側，順勢將泄殖腔周圍羽毛向后壓（這種方法可以避免剪毛），輕輕擠壓，使肛門更明顯地向外翻出，當露出乳狀突起時，一松一緊地施加適當壓力，看到公雞射出乳白色精液時，右手迅速將集精杯口接外流的精液。精液排完后，采精者用吸管將精液吸入集精杯中 （也可將采精杯當集精杯進行連續采精），而抓公雞的保定助手將公雞關入籠中，接著換另一羽公雞采精。建議使用帶喇叭口的集精杯，一旦有污染的精液，可趁其在邊沿處時擦掉，有效控制糞便污染。

4 精液質量檢測

4.1 精液的外觀檢測 正常公雞精液的顏色為乳白色，不透明，精液略帶腥味。如果精液顏色混有血液則呈粉紅色，混有糞便呈黃褐色，混有尿酸鹽呈白色棉絮狀，混有大量透明液的呈清水狀，有病無精子的呈黃水狀，精液顏色異常者均不宜輸精。種公雞射精量在0.2～1.0ml左右，平均射精量為0.4ml，主要依雞的品種、年齡、生理狀況、光照制度、飼養與管理條件而不同，同時與公雞使用制度和采精的熟練程度有關。

4.2 顯微鏡檢測方法

4.2.1 原精液檢測 用2ml離心管采集公雞精液，每輪采集（5～10）只公雞，控制在 30min內檢測完，檢測完一批后再繼續下一輪采集。取載玻片置于32℃顯微鏡恒溫板上預熱至恒溫，吸7～12μl于載玻片上，選取5個不同部位的視野進行密度與活力評定，判定標準如下：

活力評定分3級：“A”，即大群精子像開水煮沸，或呈云霧狀旋窩、波浪狀翻滾；“B”，即大群精子呈快速直線前進運動，形成許多條抖動的S形曲線；“C”，即大群精子游動速度較慢，或者呈旋轉、轉圈運動。“B”以上等級精液判定為合格。

密度評定也分3級：“密”，指在顯微鏡下，整個視野完全被精子沾滿，幾乎看不到精子間的空隙和單個精子個體的運動情況，此時精子的密度每毫升為40億以上；“中”，指視野中精子之間有相當于1個精子長度的明顯空隙，可見到單個精子的活動，此時精子密度每毫升為20億～40億；“稀”，指視野內精子之間的空隙很大，稀疏分散，能容納2個或者2個以上精子，精液密度每毫升為20億以下。

4.2.2 稀釋精液檢測 根據待檢公雞數量，準備含稀釋液的2ml離心管，并根據公雞所在欄舍位置在管上標記對應編號，置于室溫。手緊握含稀釋液（0.5ml）的2ml離心管，每只公雞單獨采集精液(0.5ml左右)，采完后搖勻，放入冷藏箱，依次采完所有公雞，帶入顯微鏡室集中檢測。

為了不影響正常輸精，也可以在每只公雞的2ml離心管只留下一定量稀釋后精液 （如0.2ml）并冷藏，其余抽取到集精杯中用于輸精。

從冷藏箱中拿出稀釋精液，輕輕搖勻，按以上方法進行檢測，密度按原精方法判斷，活力在0.7以上為合格，判定方法方法見表1。

表1 雞精子活力等級判定表

種公雞開始采精時，即25周齡左右檢測1次；使用至中期，即60周齡左右檢測1次；或者根據生產需要隨時檢測。對于原精液檢測不合格的，應稀釋后檢測，如果稀釋后檢測仍不合格的，應隔天稀釋后復檢。對于復檢不合格的，應加強飼養管理或淘汰處理。

5 精液稀釋程序

5.1 預熱方法 精液稀釋的原則是“等溫及時溫和稀釋”。采用34℃左右水浴或者恒溫箱預熱20～30min，或者提前至少30min將稀釋液放入貼膚口袋中預熱（冬天上身貼近皮膚口袋，夏天為貼近皮膚褲袋），稀釋液越貼近皮膚接近體溫越好，稀釋時稀釋液與雞精液的溫差不超過3℃。稀釋后就沒有必要保溫了。

5.2 稀釋液用量 輸精工作人員應根據當天需要進行人工輸精的母雞數，按原精與稀釋液1:1～2的比例計算稀釋液量進行。

5.3 精液稀釋方法 可以采用以下兩種方式進行稀釋：

5.3.1 先加稀釋液后采精 按指定稀釋倍數，先將已經預的稀釋液倒入容量為10ml的集精管中，再逐步采集相應體積的精液，精液與稀釋液自然混勻。

5.3.2 先采精再加稀釋液 用10ml離心管采集4ml精液后，再緩緩倒入相應體積的稀釋液，用集精管蓋蓋住管口，輕輕顛倒混勻6次左右，觀察混合精液顏色是否均勻，如不均勻要繼續顛倒混勻。

5.4 稀釋精液品質要求與注意事項 稀釋后活力，不低于0.8。輸精量，采用稀釋精液輸精時，一次輸精有效精子數不低于0.43億，1：1稀釋的輸精量不低于 0.03ml，1：2稀釋的輸精量不低于0.035ml。如果種雞場采用異地或遠距離輸精時，應將稀釋后精液密閉于離心管中，管中留有約1/3空間，5℃左右冷藏運輸，途中避免劇烈顛簸，4h內完成輸精。

6 母雞輸精技術

6.1 輸精方法 母雞輸精操作一般為兩人協作完成，一人抓雞并翻肛，一人輸精。兩人輸精操作時，負責抓雞員用左手握住母雞的雙腳，將雙腳拉至籠門外，使雞的胸部貼于籠門下緣，以增加母雞腹腔內壓力。抓雞員用右手大拇指和食指橫跨泄殖腔上下兩側，用大拇指擠壓腹部使母雞產生腹壓，肛門會自然外翻，當看到粉紅色陰道時（輸卵管的開口在泄殖腔的左側），就可將吸有一定量精液的吸管插入陰道約1.5cm深，并迅速輸入精液，隨即讓翻肛的手離開，抽出輸精管即可。抓雞人員松開右手，左手將母雞推回籠內。輸精后的吸嘴用脫脂棉擦拭消毒，再吸入精液等待給下1只母雞輸精。

6.2 輸精時應注意事項

6.2.1 輸精過程中要保持雞舍環境安靜，降低公雞和母雞的驚恐，減少應激。

6.2.2 在給種雞輸精時人員要固定。翻肛用力不能太猛，輸精時動作要輕緩，插入輸精管不要用力過大，損傷母雞和造成輸卵管發炎。

6.2.3 輸精時遇到子宮內有硬殼蛋時動作要輕，而且要將輸精管偏向一側緩慢插入輸精。防止將輸卵管內的蛋擠破，造成輸卵管炎或腹膜炎。

6.2.4 由于稀釋的精液粘稠性降低，很容易造成精液倒流，輸精時助手要放松對母雞腹部壓力，防止稀釋精液倒流。

6.2.5 母雞一般每間隔4～5d輸精1次，如果母雞是首次輸精，那么建議第二天繼續輸精一次，輸精后48h后收集種蛋。每次輸精應在大部分母雞產完蛋后進行，一般在下午3～5點較好。因為這段時間母雞基本都已產蛋，子宮內無蛋時輸精才會得到較高的受精率。如提前輸精，因子宮里有硬殼蛋，會影響精子在輸卵管逆向運動，使種蛋受精率明顯下降。

7 小結

種雞場采用稀釋精液進行人工輸精時，盡量進行公雞精液顯微鏡檢測，保證每只公雞精液都是合格的。采用本文的精液檢測方案，可以檢測原精，可以不影響正常輸精，可以一天檢測幾百只公雞精液。采用本文精液稀釋技術，比原精輸精節約公雞飼養量，同時降低采精勞動強度，減少公雞育成費用，又增加母雞籠位，還可提高種受精率；一輪使用4ml一支的稀釋液，再采集4ml精液，免去了繁瑣的定量吸液操作，也更容易混勻；采用體溫預熱稀釋液，免去繁瑣的水浴加熱等，這些改進可以達到種雞場推廣精液稀釋技術不需額外增加人員的目的。