BRAF基因突變與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移的相關性研究

謝楚平

甲狀腺癌作為一種內分泌惡性腫瘤, 有著相當高的發病率且發病率逐年上升。PTC占甲狀腺癌的85%左右。PTC的發生涉及多個基因的突變, 如BRAF、NRAS、PD-L1、PD-1基因等［1,2］。但是BRAF基因突變和淋巴結轉移是否存在相關性以及其具體的情況在醫學界一直沒有定論, 爭議頗多。目前, 爭議主要有：BRAF基因突變可能和 PTC 的遠處轉移具有相關性；BRAF基因突變有可能讓PTC 分化情況更糟糕；如果BRAF基因突變那么會使得PTC 發生淋巴

結轉移的可能性增大；BRAF基因突變和淋巴結的轉移不相關［3］。不同研究間總會存有不同的干擾因素, 研究樣本情況等也不可能做到完全相同, 所以研究結論不一致［4］。因此,本研究主要探究BRAF基因突變與PTC淋巴結轉移的相關性。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月～2018年3月在本院病理診斷為 PTC 并進行了淋巴結清掃術的85例患者為研究對象。對參與本次研究患者的年齡、性別、發病情況、腫瘤大小、淋巴結轉移情況、是否有鈣化、癌灶情況、手術的具體情況等進行詳細記錄。本次研究采集85例PTC患者手術切除所得的新鮮組織, 負責的病理學醫生將患者瘤旁的正常和腫瘤組織進行區分后立即保存于液氮中, 要求每個病例至少有3名病理學教授嚴格根據世界衛生組織分類標準開展形態學觀察。

1.2 方法 DNA提取把石蠟切片切成厚度為 8 μm 的切片后, 一個離心管可放入1～ 2 片。之后進行DNA 脫蠟操作確認消化后用QINGEN石蠟組織 DVA 提取盒的使用方法進行 DNA抽取。BRAF基因突變的檢測：在抽取到 DNA 后進行PCR測序來檢測BRAF 基因第 15 號外顯子以判斷其是否發生突變。操作方法：在避光環境下將BRAF 混勻并完成配置。在反應體系 PCR 板中放入待測樣本的DNA以及標準品, 加增 26 個循環孔, 每個循環孔都要進行熒光素(FAM)以及ROX 參比熒光信號的搜集。樣本突變信號出現典型的S 型擴增曲線升起, 則代表樣本 BRAF基因突變陽性；樣本突變信號沒有典型的 S 型曲線升起或者Ct≥23 時認為該樣本 BRAF基因突變陰性。 在PCR反應體系中添加熒光基團,

通過熒光信號的積累來實時進行PCR過程的檢測。

1.3 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗；PTC 淋巴結轉移相關因素采用Logistic回歸分析。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 BRAF基因突變檢測結果 85例PTC 患者中有50例患者的腫瘤組織檢查發現有BRAFV600E點突變, BRAF基因突變率為58.82%(50/85), 樣本DNA的提取及突變基因檢測的實驗比較效果明顯。見表1。

表1 PTC 中BRAFV600E測序結果(n)

2.2 PTC 患者淋巴結轉移相關因素的單因素和多因素分析85例患者中有55.29%(47/85)的患者發生了淋巴結轉移。單因素分析結果顯示, 不同年齡、是否原發病灶包膜浸潤、是否單發病灶、不同腫瘤大小、有無腫物鈣化、有無神經壓迫癥狀者淋巴結轉移占比不同(P＜0.05)。將上述因素納入多因素分析中, 多因素分析結果提示年齡≥45歲、原發病灶包膜浸潤、多發病灶、腫瘤大小＞40 mm為PTC淋巴結轉移的危險因素 (OR＞1,P＜0.05)。

2.3 PTC 患者BRAF基因突變相關因素的分層分析 BRAF基因突變和淋巴結轉移具有關聯, BRAF基因突變和其他變量間可能存在一定的交互關系。故進行 BRAF基因突變與其他自變量的雙變量交互作用分析, 最終發現腫瘤鈣化和腫瘤大小＞40 mm均和 BRAF基因突變存在交互作用。見表2。

表2 PTC患者與BRAF基因突變相關因素的分層分析［n(%)］

3 討論

研究顯示BRAFV600E基因突變會讓腫瘤細胞出現增殖和分化, 這屬于甲狀腺癌中的一種遺傳學事件并且其在 PTC 中發生率最高, 目前有研究結果顯示幾率最高可達80%, 而甲狀腺癌患者有85%左右都屬于PTC［5］。所以深入探究 BRAF基因突變與 PTC 之間具有的關系是有利于進一步明晰甲狀腺腫瘤細胞的發生機制、病理內容等具體情況, 可以推進該方面的治療進展, 有利于患者更好地恢復。盡管現有的研究仍找不到BRAF基因突變的發生與PTC臨床病理特征具體關系, 但相信隨著醫學技術的不斷發展, 最后一定能探索到其中的奧秘。本次旨在對BRAF基因突變與PTC淋巴結轉移的相關性進行研究, 所得數據也具有一定的代表性。國內外對于該課題的研究自然也不少, 相關研究顯示：BRAF 的發生是和PTC有著緊密聯系的, 其中BRAF 基因突變很有可能是因為PTC 的征性遺傳學發生了變化；BRAF基因突變會讓患者的預后情況更差。不同的研究所顯示的BRAF 基因突變在PTC之中的突變率也是不一樣的：有研究選擇了100例甲狀腺癌患者作為樣本最后發現其 BRAF 基因突變只在PTC 中進行表達, 其陽性率為55%；也有研究給出PTC中BRAF的突變率發生區間為33%～78%［6-8］。我國近期的相關研究結果顯示BRAF基因在PTC中的突變率為64.63%。本次研究中85例PTC患者其BRAF 的突變率為58.82%(50/85)。這一數據和國內、外研究的結果相近, 因此認為PTC與BRAF基因突變是具有一定關聯的［9］。國外有關專家在對 PTC 患者進行研究時發現BRAF基因突變的患者有著很高的頸部淋巴結轉移率；有醫學團隊在深入研究了340例分化型甲狀腺癌的病理資料后, 通過數據分析發現 BRAF 基因突變和頸部淋巴結轉移已經成為了PTC術后復發與轉移的獨立預后因素［10］。本次研究中的85例患者有47例出現了淋巴結轉移, 轉移率為55.29%, 所以認為BRAF基因突變的患者發生淋巴結轉移的幾率很大。作者還對進行BRAF基因突變與其他自變量的雙變量交互作用進行了分析, 最后得出結論：PTC患者存有一定的淋巴結轉移率, 但BRAF基因突變是PTC的特征性分子事件, 年齡≥45歲、多發病灶、腫瘤＞40 mm的患者更有可能出現淋巴結的轉移。對于該課題的研究作者會一直進行,也希望該方面的研究成果越來越多, 以支持臨床的相關治療,讓更多的患者能恢復健康, 提高生活質量。