中藥消毒乳劑滅菌實驗研究

趙文嘉，趙 欣，金宏飛，吳品昌

（1.遼寧中醫藥大學2013級本科生，遼寧 沈陽 110847；2.遼寧中醫藥大學2014級本科生，遼寧 沈陽 110847；3.遼寧中醫藥大學，遼寧 沈陽 110847）

許多中藥在體外有較強的抗菌抗病毒效果，尤其是一些芳香化濕、清熱解毒的中藥有廣泛的抗菌作用和體內外抗病毒效果。本研究中用蒼術等7味中藥提取液進行滅菌實驗，報道如下。

1 材料與方法

實驗儀器。乙醇冷凝回流提取裝置、乙醇減壓蒸餾回收裝置、電熱恒溫培養箱（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）、超凈工作臺（梅州市紀元應用研究所）、高壓蒸汽滅菌鍋（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）、標準恒溫水浴、721型分光光度計、真空干燥箱（鞏義予華儀器設備有限公司）、EBAl2高速離心機（14000rpm）、30W紫外線燈、手動壓力噴壺。

實驗藥材。蒼術、板藍根、金銀花、連翹、廣藿香、薄荷、桂枝、天然香料熏衣草精油，均采購自安徽市安國藥材公司，經遼寧中醫藥大學中藥實驗室鑒定符合用藥要求。

實驗菌種和培養基。金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、白色念珠球菌，綠膿桿菌，均由遼寧中醫藥大學生化實驗室保存，提供。普通肉湯（瓊脂）培養基，主要用于金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌培養。沙保氏（瓊脂）培基，主要用于白色念珠菌和乙型溶血性鏈球菌培養。取對數生長期的各菌液接種于營養瓊脂斜面37℃進行24h培養（白色念珠菌28℃進行48h培養）。新鮮細菌培養物，用10g/L蛋白胨磷酸緩沖液洗下菌苔，麥氏計數法計數，將菌液調整至2×106/mL，供實驗用［1］。

2 中草藥消毒乳劑的制備

中草藥有效成分的提取。取蒼術、板藍根、金銀花等6味中藥，粉碎成20目，按比例配方、混勻，置于5L的圓底燒瓶中，分別加入8倍量水，浸泡6h，煎煮lh，提取3次，合并提取液，濃縮，加入95%乙醇，便加邊攪拌使含醇量為70%。減壓濃縮，調pH至中性，得濃縮液，制成中草藥抗菌劑，備用。廣藿香、桂枝采用蒸餾法，提取揮發油，將所得揮發油用無水硫酸鈉進行干燥備用。

乳化劑的篩選和制備。選擇一定量聚山梨酯-80與山梨醇酐單油酸酯-80按不同比例進行混合作為乳化劑，分別用離心法觀察乳化劑的穩定性，比較乳化結果，選擇最佳乳化劑。將篩選好的乳化劑加入揮發油中，再次離心，分別用室溫儲存、低溫儲存、高溫儲存方法測試其乳濁液的穩定性［1］。

3 試管法抗菌實驗

取一定量消毒乳劑，加入l%氯化鈉，再加入二倍量水，加熱至沸使其破乳，置冰箱中冷卻使其分層，分取水層，加入0.5%聚山梨酯-80，制成等比水溶液作為樣品原液。校準pH至7.4～7.6，離心，分裝，高壓滅菌，冷卻后4℃冰箱內保存，備用。試管法抗菌實驗結果見表1。1到6號試管中加菌液和消毒原液，并對消毒乳劑進行稀釋，第7管不加菌作為藥液對照，第8管不加藥作為菌液生長情況對照，置37℃溫箱中培養24h，觀察各管生長情況［2］。

表1 中藥消毒乳劑抗菌效果

凡能抑制試驗菌生長的最高藥物稀釋度為該藥物對試驗菌的最低抑制濃度見表2［3］。然后分別將未生長菌的培養液再接種于適當的瓊脂平板上，如培養后重新長出試驗菌，則說明僅有抑菌作用，如沒有細菌長出則說明該藥有殺菌作用，也可依次找出最小殺菌濃度。

表2 藍草空氣消毒乳抗菌測定結果

4 實驗室空間抗菌實驗

選擇密封良好、容積約1m2的金屬消毒柜，控制溫度37℃，濕度飽和，以1.5kg/cm2的氣壓向柜內霧噴菌液10min（噴菌為0.5mL/min），噴菌30min后，以1kg/cm2的氣壓向柜內霧噴消毒乳劑20min（噴藥量為1mL/min），進行滅菌，并同時在一對照組消毒柜內以相同實驗條件霧噴含2%乙醇溶液，兩組消毒時間均定于消毒前10min，消毒后10min、30min和60min，空氣采樣3次，對每一菌種進行3次實驗。采樣以負壓從出氣孔抽取柜內氣體1min，并使生理鹽水進行滅菌。采樣液經10倍連續稀釋后吸取0.1mL接種到普通瓊脂平板并用無菌玻璃推子涂勻，待菌液吸收后倒轉平板培養24h，計數菌落［4］。

中草藥消毒乳劑在噴藥后60min，對乙型溶血型鏈球菌的殺滅率為97.6%，金黃色葡萄球菌的殺滅率為91.8%，對白色念珠球菌的殺滅率為93.7%，對大腸桿菌的殺滅率為55.8%，對綠膿桿菌的殺滅率為90.8%（見表3）。對不同菌株的減少量進行單因素方差分析，結果F=15.22，P＜0.01，說明中草藥消毒乳劑對不同菌株的抑菌能力差異非常顯著，根據表3中消毒60min后殺滅率數據排序，中草藥消毒乳劑對受試各菌株的抑菌能力從高到底依次為：乙型溶血型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌（見表3）［4］。中藥消毒成本低、毒副作用小、刺激性小，所以中藥消毒乳劑有廣闊的應用前景。

表3 中藥消毒乳化劑抗菌實驗