氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑增加骨密度作用的研究

郁樺 石根勇 朱勤

【摘要】目的：對(duì)氨基葡萄糖硫酸鹽、硫酸軟骨素、維生素D3及碳酸鈣等為主要成分的氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑增加骨密度的功效進(jìn)行驗(yàn)證，方法：每天經(jīng)口給予大鼠含有0. 3g/kg. bw、0.6g/kg. bw、1.8g/kg. bw氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑（相當(dāng)于人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍）的飼料90天，同時(shí)設(shè)一個(gè)低鈣對(duì)照組（150mg/lOOg飼料）和一個(gè)碳酸鈣對(duì)照組（與高劑量鈣水平相同的碳酸鈣對(duì)照組）。測(cè)定大鼠的股骨骨密度、鈣含量及鈣的表觀吸收率；觀察大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育情況。結(jié)果：高劑量組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)┑纳黹L(zhǎng)顯著高于低鈣對(duì)照組（p<0.05）；高劑量組動(dòng)物股骨中心及遠(yuǎn)心端骨密度、股骨鈣含量、總鈣量顯著高于低鈣對(duì)照組（p<0.05）；中計(jì)量組和高劑量組大鼠攝入鈣、糞鈣和尿鈣含量顯著高于低鈣對(duì)照組，鈣的表觀吸收率和存留率顯著低于低鈣對(duì)照組，差異具有顯著性（p<0.05）。高劑量組實(shí)驗(yàn)大鼠的以上各項(xiàng)指標(biāo)與相應(yīng)的碳酸鈣對(duì)照組比較差異沒有顯著性（p>0.05）。結(jié)論：根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》增加骨密度功能檢驗(yàn)方法的判定標(biāo)準(zhǔn)；氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑具有增加骨密度功能。

【關(guān)鍵詞】保健食品 骨密度氨基葡萄糖硫酸軟骨素

【中圖分類號(hào)】R9

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】2096-5249（ 2018） 03-023-02

骨質(zhì)疏松癥是一種由多種原因引起骨量減少和骨組織觀念顯微結(jié)構(gòu)退行性改變?yōu)樘卣鳎谴嘈栽黾印⒁装l(fā)骨折的一種全身代謝性骨病。增加骨密度功能食品是市場(chǎng)需求較大的保健食品，其中以鈣劑輔以氨基葡萄糖、硫酸軟骨素、維生素D3配方較多見，維生素D3具有促進(jìn)鈣吸收的作用。氨基葡萄糖是一種氨基單糖，是形成所有結(jié)締組織包括軟骨基質(zhì)葡糖胺聚糖的基本成分[1-2]。硫酸軟骨素是存在于人和動(dòng)物結(jié)締組織中的酸性黏多糖，主要分布于軟骨、骨、肌鍵、肌膜和血管壁中，因具有多種生物活性而得到廣泛應(yīng)用。硫酸軟骨素能夠預(yù)防和改善骨關(guān)節(jié)病，對(duì)受損的軟骨組織進(jìn)行修復(fù)[3]，本實(shí)驗(yàn)為了驗(yàn)證其增加骨密度的作用，旨在為補(bǔ)鈣類產(chǎn)品配方評(píng)價(jià)提供思路，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法：

1.1 受試物：

氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑，推薦量為60mg/kg.bw，本產(chǎn)品鈣攝人量約460mg/d，氨基葡萄糖硫酸鹽攝入量約800mg/d，硫酸軟骨素?cái)z入量約630mg/d，維生素D3攝人量約6.75μg/d，受試物是以補(bǔ)鈣為主，按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）增加骨密度功能檢驗(yàn)方法方案一的檢驗(yàn)方法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。

1.2 劑量設(shè)計(jì)：本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組，劑量分別為0.3g/kg.bw、0.6g/kg.bw、1.8g/kg.bw，相當(dāng)于人體推薦量的5、10、30倍，另設(shè)一個(gè)低鈣對(duì)照（ 150mg/lOOg飼料）和一個(gè)碳酸鈣對(duì)照組，該組與高劑量組鈣含量相同。

1.3 受試物配制：將受試物摻入低鈣飼料中喂養(yǎng)，低鈣基礎(chǔ)飼料配方按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》推薦方法，飼料攝入量按體重的8%折算。按0.38%、0.75%和2.25%比例，分別將受試物摻人低鈣飼料中制成低、中、高劑量組受試物。另在低鈣飼料的基礎(chǔ)上摻人0.74%碳酸鈣，制成碳酸鈣對(duì)照組飼料。

1.4 給予受試物：將摻入不同劑量受試樣品的低鈣飼料分別給予各劑量組大鼠自由攝食，飲用去離子水。

1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室：SPF級(jí)雌性SD健康大鼠，體重70.4±2.7g，由長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2009-0012，飼料由北京綠恒泉營(yíng)養(yǎng)保健食品技術(shù)開發(fā)有限公司提供；動(dòng)物房為屏障環(huán)境，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2010-0010，環(huán)境溫度22-24℃，濕度50-56%。

1.6 主要儀器與設(shè)備：骨礦物測(cè)定儀（SD-1000℃）。

2.方法

2.1 試驗(yàn)方法：大鼠檢疫3天后，將50只大鼠按體重隨機(jī)分成5組，分別為受試物低、中、高三個(gè)劑量組，低鈣對(duì)照組和碳酸鈣對(duì)照組，每組10只，單籠飼養(yǎng)，連續(xù)喂養(yǎng)90天。

2.2 觀察指標(biāo)

2.2.1 體重：每周稱重一次。

2.2.2 股骨重量測(cè)定

大鼠喂養(yǎng)90天后處死，剝離出右側(cè)股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，稱量骨干重。

2.2.3 股骨骨密度測(cè)定

用骨礦物測(cè)定儀測(cè)量左側(cè)股骨骨中點(diǎn)及遠(yuǎn)心端的骨密度。

2.2.4 骨鈣含量及飼料含鈣量測(cè)定

用原子吸收法測(cè)定。

2.2.5 鈣吸收實(shí)驗(yàn)

2.2.5.1 生長(zhǎng)發(fā)育

大鼠從單籠給予受試物始至4周，每周測(cè)量身長(zhǎng)、稱重1次。

2.2.5.2 代謝實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)3周后進(jìn)行3天鈣代謝實(shí)驗(yàn)，記錄3天進(jìn)食量，收集72小時(shí)糞便，用原子吸收法測(cè)定飼料及糞便中鈣含量。

攝入鈣（mg/天）=飼料中鈣含量（mg/g）×飼料消耗量（g厭）

糞鈣（mg/天）=糞便中鈣含量（mg/g）×糞便非出量（g/天）

鈣的表觀消化率（%）=（攝入鈣一糞鈣）/攝入鈣×100%

2.3 統(tǒng)計(jì)處理

數(shù)據(jù)用SPSS軟件包進(jìn)行方差分析，按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊計(jì)算F值，F(xiàn)值（F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥F0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行研究適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行研究統(tǒng)計(jì)。

3 結(jié)果

3.1 氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑對(duì)大鼠體重的影響（見表1）。實(shí)驗(yàn)前各組大鼠的起始體重差異沒有顯著性（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)?zāi)└鲃┝拷M大鼠的體重和體重增加值與低鈣對(duì)照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）；高劑量實(shí)驗(yàn)組大鼠的終體重及其凈增加值與碳酸鈣對(duì)照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.2 氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑對(duì)大鼠身長(zhǎng)的影響（見表2）。實(shí)驗(yàn)前各組大鼠的起始身長(zhǎng)差異沒有顯著性（P>0.05）；高劑量組大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)┑纳黹L(zhǎng)顯著高于低鈣對(duì)照組（P<0.05）；高劑量組實(shí)驗(yàn)?zāi)┐笫蟮慕K身長(zhǎng)及其凈增加值與碳酸鈣對(duì)照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.3 氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑對(duì)大鼠股骨長(zhǎng)度和骨密度的影響（見表3）。實(shí)驗(yàn)前各組大鼠的起始股骨長(zhǎng)度差異沒有顯著性（P>0.05）；高劑量組大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)┑墓晒沁h(yuǎn)心端骨密度、股骨中心骨密度顯著高于低鈣對(duì)照組（P<0.05）；高劑量組實(shí)驗(yàn)?zāi)┐笫蟮墓晒沁h(yuǎn)心端骨密度、股骨中心骨密度與碳酸鈣對(duì)照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.4 氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑對(duì)大鼠股骨長(zhǎng)度和骨密度的影響（見表4）。實(shí)驗(yàn)前各組大鼠的起始股骨長(zhǎng)度差異沒有顯著性（P>0.05）；碳酸鈣對(duì)照組大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)┑墓晒强傗}量顯著高于低鈣對(duì)照組（P<0.05）。高劑量組大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)┑墓晒氢}含量、總鈣量顯著高于低鈣對(duì)照組（P<0.05）；商劑量組實(shí)驗(yàn)?zāi)┐笫蟮墓晒侵亓俊⒐晒氢}含量及總鈣量與相應(yīng)的碳酸鈣對(duì)照組相比沒有顯著性差異與碳酸鈣對(duì)照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.5 氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑對(duì)大鼠攝入鈣、糞鈣、尿鈣的影響（見表5）。中高劑量組、碳酸鈣對(duì)照組大鼠攝入鈣、糞鈣及尿鈣含量顯著高于低鈣對(duì)照組（P<0.05）；高劑量實(shí)驗(yàn)組大鼠的攝入鈣、糞鈣和尿鈣含量與相應(yīng)的碳酸鈣對(duì)照組相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

3.6 氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑對(duì)鈣表觀吸收率和鈣存留率的影響（見表6）。中、高劑量組、碳酸鈣對(duì)照組大鼠鈣的表觀吸收率及鈣的存留率與相應(yīng)碳酸鈣對(duì)照組相比沒有顯著性差異（P>0.05）。

4.討論

氨基葡萄糖硫酸鹽復(fù)合制劑按其推薦劑量，鈣攝入量約460mg/d，氨基葡萄糖硫酸鹽攝人量約800mg/d，硫酸軟骨素?cái)z入量約630mg/d，維生素D3攝入量約6.75μg/d，對(duì)于改善骨質(zhì)疏、增加骨密度，效果顯著。高劑量組大鼠股骨中點(diǎn)及遠(yuǎn)心端骨密度高于低鈣對(duì)照組（P<0.05），且與碳酸鈣對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，可以認(rèn)定該產(chǎn)品具有增加骨密度作用。

參考文獻(xiàn)：

【1】劉茵，顏耀東，張娟等.氨基葡萄糖，硫酸軟骨素與膠原蛋白治療骨關(guān)節(jié)炎的研究工作進(jìn)展[J].慢性病學(xué)雜志：2013 ，14（12）：919-921.

【2】王亞，陳彥，戛樹開等硫酸軟骨素制備工藝的純化[J].中國(guó)生化藥物雜志，2006，27（1）： 12-14.

【3】魏慶宏硫酸軟骨抑制實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的體內(nèi)研究[J].中國(guó)生化藥物雜志，2016，5（36）：47-50.