李曉
一、食用菌定義及技術種類
食用菌廣義上講,是指一切可以食用的菌類,既包括真菌(fungus)和細菌(bacteria),又包括大型真菌蕈菌(mushroom)和小型真菌霉菌(mould)。例如:做酸奶的乳酸菌、做面包的酵母菌、燉小雞的蘑菇蕈菌、做醬油的霉菌等。
狹義的食用菌,是肉眼可見、徒手可采的大型真菌的總稱。通常所說的蘑菇,主要包括可食用菌的肉質、膠質大型真菌,如香菇、平菇、雙孢菇、黑木耳、杏鮑菇、金針菇、毛木耳、玉木耳等,以及可藥用木質、栓質或革質的大型真菌,如靈芝、云芝、桑黃、豬苓等。
食用菌大部分屬于擔子菌門,約占90%,如香菇、木耳等;少部分屬于子囊菌亞門,約占10%,如冬蟲夏草、松露、羊肚菌等。
目前,我國食用菌種類大致分為960多個分類單元,能夠馴化栽培的有100余種,大規模商業化栽培的有40余種。商業化人工栽培的多為腐生型食用菌,可分為草腐菌和木腐菌(圖1、圖2)。
食用菌栽培技術,依據腐生類型分為發酵技術(fermentation technology)和無菌技術(aseptic technology)。
發酵技術,在草腐菌培養料處理中也叫堆肥(compost),是將蘑菇喜歡的營養物質如稻草、麥草等植物殘體和雞糞、牛糞等動物排泄物混合堆積,在溫度、濕度適宜的情況下,利用微生物分解、發酵制作蘑菇適宜生長培養基的過程。草腐菌發酵過程,是一個無差別邀請的盛宴,邀請周圍環境中存在的所有微生物參與,盡情享用盛宴的過程。初始的培養料就是一個營養豐富的自助餐,每一種微生物各取所需,全部吃光自己喜歡的事物。為了競爭美味,每種微生物雖然沒有尖牙利齒,但無所不能,互相殘殺,有的分泌毒素毒害其他微生物,有的產生酶分解對手,有的利用高溫殺死對手,青霉素、氯霉素、頭孢霉素等統統登場,叢林法則,弱肉強食。宴會結束,食物耗盡,最后留下的是高溫菌類。因此,好的發酵過程,是一個讓每種菌類充分生長消耗的過程,以犧牲小分子、易吸收營養物質作為代價,讓微生物彼此殘害,最后只剩下一個利于周圍環境微生物生長的環境。以雙孢菇為例說明,其發酵的過程,既是殺滅培養料中低溫雙孢菇競爭性雜菌的過程,又是培養高溫型、雙孢菇無害或有益菌的過程,并不是一個簡單意義上的滅菌。所以,發酵成功結束,是在有菌的環境內,不生長雜菌。
無菌技術,是在細胞、微生物純培養及醫療護理操作過程中,保持無菌物品、無菌區域不被污染,防止病原微生物入侵的一系列操作技術。食用菌菌種及木腐菌生產是在無菌條件下的無菌操作技術,無菌條件是指培養基和接種工具的絕對無菌,以及冷卻、接種、培養環境的相對無菌。無菌技術中滅菌是無差別殺死所有競爭性微生物。無菌技術制作的培養基是一個不具有免疫力的肥美蛋糕,如果無菌環境受到破壞,微生物會不請自來,瘋狂生長,污染將難以控制。
二、食用菌栽培原理及特點
筆者用“123理論”概括食用菌栽培原理。“1”是要深刻理解“1個字”(菌字),“2”是要完全明白“兩件事”(做飯和建房),“3”是擁有“3個設備”(一鍋一燈一箱)。掌握了“123原理”就能生產食用菌。
1. 理解1個“菌”字
“菌”既包含細菌又包含真菌,真菌中包含大型真菌蕈菌和小型真菌霉菌。我們種植食用菌的目的是要獲得大型真菌,如木耳、香菇、金針菇等,除大型真菌外,所有菌都是雜菌或病菌。凡與目標栽培的食用菌競爭營養的,均稱為雜菌,如綠霉、毛霉、鏈孢霉、曲霉、青霉等,雞腿菇在雙孢菇栽培中同樣被視為雜菌。凡造成目標栽培的食用菌病變、畸形和死亡的,均稱為病菌,如造成黑木耳“流耳”病害的細菌及雙孢菇死亡的枝霉菌等。因此,“菌”在食用菌栽培中,既有我們需要獲得的,又有我們需要隔離的。
“菌”有以下4個特點:
①個體小。“菌”通常稱微生物,因為“菌”的個體或在個體發育的大部分時間段顯得十分微小,難以用肉眼發現。細菌形體,通常以微米為測量單位,須用顯微鏡放大數百甚至上千倍才能看到。一般球菌的直徑約l微米,中等大小的桿菌長2~3微米、寬0.3~0.5微米,而大部分霉菌孢子的直徑為2~10微米。因此,食用菌栽培可以說是在和分布在環境各處、眾多看不見的敵人作斗爭的過程,無差別的殺死或控制周圍的一切雜菌和病菌,完成食用菌生產的純培養。
②數量多。自然狀態下,“菌”的數量太多,幾乎無法計量,食用菌栽培通常引入無塵車間潔凈等級的概念,食用菌、醫療及食品微生物工作者通常熟知的百級、千級、萬級、十萬級實驗室,是指每立方米內的塵埃粒子數量。塵埃粒子是微生物的飛行器,每個塵埃粒子上可以乘坐上百位乘客(細菌或霉菌孢子)。無塵車間等級劃分:百級≥千級≥萬級≥十萬級≥百萬級。越排在前面,級別越高,食用菌無菌車間等級最常見的是萬級和十萬級,局部接種區域為百萬級。無菌區域隨著人員和物品的流動,以及工作時間的延長,會發生動態變化。比如接種間,消毒滅菌后達到了萬級標準,而接種人員數量、工作時間、衣著、工作習慣、職業素養等因素則會時刻影響無菌間級別的變化。因此,如何建立、維護無菌環境,在食用菌生產中尤為重要。
③繁殖快。細菌繁殖速度驚人。大腸桿菌在實驗室內,世代時間為20分鐘,按此計算,8小時后,1個細胞可繁殖200萬以上,10小時后超過10億,24小時后,細菌繁殖的數量將難以統計。因此,食用菌生產盡量在2~3小時裝滿1鍋后進行滅菌,若生產1鍋時間過長,第一批料裝袋后存放時間過久,則會發酸腐敗。霉菌,如鏈孢霉孢子萌發、菌絲生長速度極快,特別是氣生菌絲頑強有力,能穿出菌種的封口,擠破菌種袋,形成數量極大的分生孢子團,具有當日萌發、隔日產孢、高速繁殖的特性。20~30℃的溫度范圍內,在斜面培養基上,1晝夜可長滿整個試管;在木屑及棉籽殼培養料上,蔓延迅速,傳播力極強。發菌室若發現一部分菌袋被鏈孢霉感染,菌袋受污染,料面迅速形成橙紅色或粉紅色的霉層。霉層如在塑料袋內,可通過某些孔隙迅速布滿袋外,潮濕的棉塞厚可達1厘米。3天后整個生產場地都布滿了紅色的孢子,菌袋一經污染很難徹底清除,常引起整批菌種或菌袋報廢,造成毀滅性損失。霉菌來勢猛、蔓延快、為害大,一旦大面積發生,很難控制、很難清除。
④無處不在。“菌”雖小,卻無處不在,比如:空氣,土壤,水,人體內、衣服上、皮膚上、手上、口腔里、腸胃里……人體既是“菌”的發生器,又是無菌區域最大的污染源。因此,食用菌栽培的無菌區域盡量用機器替代人工,盡量不使用起塵的設施和有機的器具。
2. 明白“做飯和建房”
食用菌不同于自養型綠色植物,只能將外界環境中現成的有機物作為能量和碳的來源攝入體內,轉化為自身的組成物質,并儲存能量。其生長發育過程類似于人類和動物,需要食物(飯)和安逸舒適的環境(房)。因此,成功的食用菌生產者,視蘑菇為孩子,為他做好吃的飯、建舒適的房。
蘑菇小的時候,由生產者提供馬鈴薯湯汁加葡萄糖的高營養易吸收的PDA培養基,住在玻璃試管、平板的無菌育嬰室內或放在恒溫避光的培養箱內(稱母種生產)。蘑菇長大些了,生產者為其提供小麥、玉米等相對難吸收的谷粒,并將其放在稍大一點的瓶罐或恒溫避光的培養室內(稱原種生產)。當蘑菇成年時,蘑菇會吃木屑、麥麩等粗糧,這時需要更大的生存空間,超長加寬的塑料袋成了蘑菇的工作室,溫室、大棚、林下、田野以及人工氣候室成了蘑菇的生長環境。因此,食用菌生產的過程,就是分階段提供營養配餐、按目標提供適宜住處的過程。
3. 擁有“一鍋一燈一箱”
食用菌的無菌技術,既需要培養基和接種工具的絕對無菌,以及接種環境的相對無菌,又需要“一鍋一燈一箱”設備設施(圖3、圖4、圖5)。
“一鍋”(滅菌鍋,高壓或常壓)可以通過溫度和蒸汽殺死一切生命體,使培養基絕對無菌;“一燈”(酒精燈)可以高溫灼燒一切生命物質,使接種工具絕對無菌;“一箱”(接種箱,超凈工作臺或無菌室)可以創造相對密閉的孤立環境,通過多種消毒、滅菌手段,達到相對無菌的標準。
初始階段的菇農,在經費有限的情況下,利用簡陋的設備設施(一個手提式高壓鍋,一個酒精燈,一個接種箱)實現菌種的純培養和蘑菇栽培。隨著資本投入的增加,一鍋變成了多鍋,常壓變成了高壓,小鍋變成了大鍋,接種箱變成了超凈工作臺,工作臺變成了無菌生產車間,從而實現工廠化生產食用菌。
三、無菌化原則與傳統栽培優勢
現代工廠的食用菌生
產堅持無菌化、純培養的原則,而傳統食用菌生產則堅持帶菌生產、優勢培養的原則。
無菌化和純培養要求培養基、接種工具絕對無菌,接種環境無菌,通過資本、設備、工藝創造一個無菌化的理想狀態。只有保證一個目標菌株生長,才能達到自然生產的目的(圖6)。
優勢培養是簡陋設施條件下,栽培好食用菌的一種黃金法則。明白“菌”存在的廣泛性,盡可能地降低雜菌基數,削弱雜菌的戰斗力,不給雜菌生長留有余地,為目標菌株的群體性生長創造優越環境,使栽培菌株同雜菌在競爭中占有絕對優勢,抑制和殺死雜菌(圖7)。
1. 無菌化原則
無菌化原則就是要創造一個無菌的環境,盡可能做到不造“菌”、不積“菌”、不帶“菌”、能除“菌”(圖8)。
①不造“菌”。食用菌栽培的環境中除了培養基之外,盡可能避開一切能夠產生和制造“菌”的物質,不使用木頭的器具和有機的物質,如紙板、紙盒、棉布等造菌的物體,盡量用機器代替人工。
②不積“菌”。地面、墻面、臺面要光滑不起塵,結構要平滑無縫隙,易清洗,不藏污納垢。
③不帶“菌”。無菌區域和不潔凈區域分開,人員、物品、氣體流動要從設計原則上嚴格把關,人員著裝、物品及運輸工具要定期清洗消毒,保持無菌區正壓無菌風,確保不想要的“菌”不能進入無菌區域。
④ 除“菌”。運用物理、化學、輻射等消毒、滅菌手段,采用高效過濾系統,創造無菌正壓區域,利用臭氧、強氧化劑、紫外線等殺菌措施,把無菌區域內的漏網之“菌”及時清除,
保證環境的無菌級別。
2. 優勢培養原則
優勢培養原則是讓接入培養基中的目標菌株,在與
其他雜菌競爭領地及爭奪養分的過程中占有絕對的地位,保證菌種活性、菌種數量和菌種抗逆具有明顯優勢。
①菌種活性優勢。生產使用的菌種和雜菌的孢子對比,菌種處于快速生長時期,雜菌孢子則處于萌芽期,使菌種爭奪養料具有一定的優勢。為了使食用菌的生長更具競爭優勢,必須使用剛培養好、生長最旺盛的菌種,不能選擇老化、退化、有病蟲害的菌種。接種后,短時間內菌種快速萌發、快速定植,迅速占領料面,不給雜菌萌發滋生留下任何可乘之機。
②菌種數量優勢。大量接入菌種是傳統栽培的關鍵點。香菇長棒打孔栽培中,單面四孔或雙面五孔,塞滿菌種后,占菌棒體積為15%~20%,菌種萌發生長后,可快速覆蓋整個孔面,同雜菌競爭優勢明顯。北方黑木耳栽培,插棒體積占整個菌棒的20%左右,填滿菌種后,即使接種環境相對開放,接入部分雜菌孢子,黑木耳菌種仍優勢明顯,迅速占據培養基質,不給雜菌生存空間。而用單根枝條菌種的,因為留有太多雜菌生存空間,污染率較高,建議插入多根枝條菌種。
③菌種抗逆優勢。所謂逆境就是不適合食用菌生長環境,如低溫、高溫等不利環境下具有生長的特性,就是抗逆性。在5~10℃低溫條件下,滑菇(圖9、圖10)、香菇菌絲能夠生長,大部分雜菌孢子則不易萌發。東北地區半熟料栽培滑蘑和香菇,可利用菌種的抗逆優勢,在低溫季節接種、發菌、養菌。一些食用菌栽培成功與否,與雜菌競爭往往只有1~2℃的差距。
作者簡介:李 曉,副教授,吉林農業大學菌物科學與技術系主任,黑龍江省特聘專家,中國食用菌協會常務理事,商務部援外技術專家,12316專家,主要從事食藥用菌的教學、科研和產業化開發研究工作。聯系地址:吉林省吉林農業大學食藥用菌教育部工程研究中心郵編:130118。