余甘子葉的研究概況

王捷 葉勇 梁浩 蔣俊俊 王羽中 石小燕 韋嘉佳 韋錦斌 陳勇 劉麗敏

【摘 要】 文章在實驗研究基礎之上，對余甘子葉主要活性成分、藥理作用、臨床應用、質量控制、專利等進行綜述，以期為深入研究開發利用余甘子葉提供參考依據。

【關鍵詞】 余甘子葉；主要活性成分；藥理作用；臨床應用；質量控制

【中圖分類號】R29 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2018）04-0040-05

Abstract：On the basis of experimental research， to overview the main active ingre-dients， pharmacological action， clinical application， quality control， patents and so on. For the development and utilization of indepth study of Phyllanthus emblica L.， to provide favorable basis.

Keywords：Leaves of Phyllanthus emblica L.； The Main Active Ingred-ients； Pharmacological Action； Clinical Application； Quality Control

余甘子（Phyllunthus emblaca L.）是大戟科（Euphorbiaceae）葉下珠屬（Phyllunthus）植物，又名余甘樹、油甘子、庵摩勒、橄欖、滇橄欖、園酸角、油柑、望果、牛甘子、久如拉（藏語）、麻項邦（傣語）等，生于海拔200～2300 m山地疏林、灌叢、荒地或山溝向陽處[1]，喜溫暖干熱氣候，分布在南亞熱帶、熱帶地區，包括中國福建、臺灣、廣東、海南、廣西、四川、貴州、云南等地，還有印度、斯里蘭卡、中南半島、印度尼西亞、馬來西亞和菲律賓等，美國、古巴、波多黎各、特立尼達、巴拿馬、肯尼亞、南非等有引種栽培[2]。其樹高達23m，樹姿優美，可作庭園風景樹和果樹，其木材棕紅褐色，堅硬，結構細致，有彈性，耐水濕，供農具家具用材。果實富含維生素C，生津止渴，潤肺化痰，治咳嗽、喉痛，解河豚魚中毒等，初食味酸澀，良久乃甘，種子、根、莖、葉、花亦可入藥，葉曬干供枕芯用料，種子油供制植物肥皂。余甘子始載于公元304年晉代《南方草木狀》，原譯名庵摩勒，常用清熱解毒藥，中國藥典2015版收載，廣西壯藥質量標準第一卷收載，藏藥標準、云南省藥品標準收載[3-4]。近年隨國內余甘子種植業規模化發展，余甘子葉引起學界和產業界關注和思考。本文在實驗研究基礎上，對檢索數據庫（中國生物醫學文獻數據庫、重慶維普數據庫、清華同方數據庫、萬方數據庫）、檢索時間范圍（2007年1月1日～2017年12月）等所得相關文獻統計分析總結后，對余甘子葉、主要成分、藥理作用、臨床應用、質量控制以及專利等進行綜述，以期為深入研究開發利用余甘子葉提供參考依據。

1 主要活性成分

余甘子葉含酚類、有機酸、還原糖、多糖、黃酮類、三萜等活性成分[5-7]。在研究余甘子葉脂溶性部位時，用一定濃度乙醇溶液滲濾提取后，以系統溶劑分離法進行部位分離，利用聚酞胺柱層析及制備型HPLC法對其石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位分離純化得11個化合物，經鑒定為：β-谷甾醇（β-Sitosterol，Ⅰ）、β-胡蘿卜苷（β-Carotene，Ⅱ）、萹蓄苷（Avicularin，Ⅲ）、山奈酚（Kaemferol，Ⅳ）、槲皮素（Quercetin，Ⅴ）、山奈酚-7-甲醚（kaempferol-7-methylether，Ⅵ）、鞣花酸（ellagic acid，Ⅶ）、沒食子酸（gallic acid，Ⅷ）、沒食子酸乙酯（ethyl gallate，Ⅸ）、正三十四烷酸（tetratriacontanoic acid，Ⅹ）和正三十烷醇（1-Triacontanol，Ⅺ）。采用氣相色譜-質譜聯用（GC-MS）分析廣西余甘子葉揮發油成分，分離29個色譜峰，鑒定2，6二甲基萘、水楊酸甲酯、a-紫羅蘭酮、香葉基丙酮、金合歡基丙酮、葉綠醇、芥酞胺、油酰胺、異植物醇、二叔丁基苯酚等26種成分，占已分離組分總含量的90%以上，其中葉綠醇、二叔丁基苯酚、異植物醇為相對含量較高成分[8-9]。

2 藥理作用

2.1 鎮痛抗炎和抗氧化作用 有研究者[10-15]采用二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性、棉球誘導小鼠肉芽組織增生試驗模型，通過胸腔白細胞游走試驗，應用交叉菜膠致足腫脹試驗，測定炎性組織中前列腺素E2（PGE2）含量，采用改良寇氏法測定其LD50等，結果顯示余甘子葉提取物明顯延長小鼠舔后足時間，減少扭體次數，降低甲醛測痛試驗第一、二時相疼痛強度；減輕小鼠耳腫脹，抑制毛細血管通透性增高及肉芽組織增生，有效抑制白細胞游走，明顯減少大鼠炎癥組織中 PGE2含量，其LD50為10.570g/kg，95%可信限為 10.52～10.62g/kg，余甘子葉提取物鎮痛、抗炎作用顯著，其機理可能與抑制 PGE2產生與釋放有關。另外，國內有用10種溶媒分別提取余甘子葉，體外研究其對人多形核白細胞（PMN）功能的抑制活性，甲醇、四氫呋喃和1.4-二噁烷3種提取物能90%抑制白三烯B4（LTB4）誘導的PMN游走，呈劑量相關；二氯甲烷和水2種提取物能50%抑制PMN游走。余甘子葉不同溶媒提取物中極性化合物所占百分含量越高，對PMN游走抑制作用越強。己烷、甲醇、四氫呋喃、1，4-二噁烷、甲苯和氯仿等7種溶媒提取物能抑制20%-35% N-甲酰-L-甲二磺酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸介導的白細胞脫顆粒。余甘子葉所含槲皮素可對抗急性痛風性關節炎，對抗衰老機體神經炎，所含沒食子酸、槲皮素、山奈酚和其它多酚物質能清除DPPH自由基，抗氧化作用顯著。

2.2 保護肺功能 余甘子葉提取物可對抗耐藥細菌性肺部感染。鐘振國等[16]建立慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠模型，采用病理組織切片及血氣分析方法觀察余甘子葉提取物對支氣管炎及肺氣腫病理及血氧含量影響，結果顯示余甘子葉提取物對由慢性支氣管炎并肺氣腫大鼠的支氣管炎癥及肺泡病理損害有明顯保護作用，減少支氣管壁炎癥細胞浸潤及肺大泡形成，提高動脈血氧含量，各項指標均優于模型對照組及陽性藥物組，接近于正常對照組，有保護肺功能[16-18]。

2.3 保肝作用 在余甘子葉沒食子酸誘導人肝癌細胞株BEL-7404產生凋亡機制研究實驗中，采用PI和Hoechst33342雙染色法流式檢測對人肝癌細胞株BEL-7404各周期的影響，細胞熒光免疫染色法和Western blot法檢測Bax和Bcl-2蛋自表達的變化，結果顯示余甘子葉化學成分沒食子酸作用BEL-7404細胞72h后，G2/M期細胞數增多，呈現細胞阻滯現象，并伴有大量的細胞凋亡；藥物作用人肝癌細胞株BEL-7404 72h后Bax蛋自表達升高，Bcl-2蛋自表達則降低，余甘子葉化學成分沒食子酸能阻滯G2/M期細胞，通過上調Bax和下調Bcl-2蛋自表達，致線粒體膜電位下降，激活Caspase，導致細胞死亡，可能是其誘導人肝癌細胞株BEL-7404凋亡的分子機制之一。余甘子葉所含沒食子酸誘導人肝癌細胞SMMC-7721凋亡，抗實驗性肝纖維化，所含槲皮素抗ConA誘導自身免疫性肝損傷等[19-22]。

2.4 影響免疫 在探討余甘子葉提取物（PLFs）對正常小鼠免疫功能影響實驗中，余甘子葉提取物的LD50為9.911g/kg，余甘子葉提取物顯著升高小鼠碳廓清能力、吞噬指數和NK細胞活力，促進正常小鼠非特異性兔疫功能，安全性較高。機體抗腫瘤免疫機制包括細胞免疫和體液免疫兩方面，相互協作共同殺傷腫瘤細胞，對免疫原性弱腫瘤，非特異性免疫應答有更重要意義[23]。

2.5 抗惡性腫瘤 實驗研究余甘子葉提取物在體外抗腫瘤作用，采用滲漉法及加熱回流法從余甘子葉提取分離到G1、G2、A、B、C、D、E、 bb、cc、dd、ee等11個部位，采用MTT法、集落形成法觀察。MTT法是篩選抗腫瘤活性成分行之有效簡便快速方法，是美國國立腫瘤研究中心所采用抗癌藥物篩選方法，集落形成法及集落抑制率常用于抗癌藥物敏感試驗、腫瘤放射生物學試驗。結果顯示余甘子葉的11種提取物對白血病細胞株L1210和P388DL，宮頸癌細胞株Hela，胃癌細胞株SGC7901，黑色素瘤細胞株B16，神經性腫瘤細胞株NU108-15，肝癌細胞株Bele7404等7種腫瘤細胞株的增殖均有不同程度的抑制作用，其中cc部位，即黃酮類成分作用最強，余甘子葉提取物具有體外抗腫瘤活性。另外，建立荷瘤小鼠模型，觀察余甘子葉提取物對荷瘤小鼠外周血T淋巴細胞CD4+，CD8+亞群的影響，結果顯示余甘子葉提取物顯著提高荷瘤小鼠T淋巴細胞及其CD4+亞群相對數量，上調CD4+/CD8+亞群比例，通過提高T淋巴細胞及其CD4+亞群相對數量，使CD4+/CD8+比例接近正常值，可能是余甘子葉提取物抗腫瘤的免疫學機制之一。另外實驗證實余甘子葉所含沒食子酸能抑制人神經母細胞瘤增殖，抗胃癌細胞MGC-803；所含槲皮素抑制肺癌腫瘤細胞的生長和轉移，對膠質瘤U87細胞侵襲、遷移、增殖[ 24-29 ]。

2.5 抗菌和抗病毒作用 用體外細菌培養方法研究余甘子葉提取物抗菌作用，采用瓊脂稀釋法測定，結果顯示余甘子葉提取物在體外對肺炎克雷伯桿菌、金黃色葡萄球菌敏感株、金黃色葡萄球菌耐藥株、大腸桿菌、傷寒沙門菌、白色念珠菌等均有不同程度的抑制作用。余甘子葉所含多酚類可抑制人消化道常見菌[ 30-31 ]。

3 臨床應用

3.1 民族藥應用 傳統中醫藥認為，余甘子葉清熱解毒，利濕消腫，民族藥臨床應用有不同，民間常用于口瘡、疔瘡、濕疹、皮炎、水腫、高血壓、毒蛇咬傷、跌打損傷等[32]。

3.2 治療1型和2型糖尿病以及并發癥 臨床運用余甘子葉提取物治療糖尿病的效果明顯，其作用機制包括顯著提高人白細胞干擾素（IFN-α）含量，改善患者體內免疫功能紊亂；增加心肌糖原水平，調節脂肪能量供應比例、升高糖原儲備量、節省糖原的消耗等多方面調控低血糖，減少持續低血糖危害；保護β細胞及活性，抵抗胰島素分泌減少，維護生物膜穩定，保護胰腺組織等，對1型糖尿病治療發揮積極作用。同時其通過增強骨骼肌GLUT4mRNA 表達而增加GLUT4 生物合成，加速葡萄糖跨膜轉運及外周組織利用葡萄糖，改善胰島素抵抗，增加胰島素敏感性；顯著抑制組胺所致的毛細血管通透性增強和白細胞游出，減少高濃度的TNF-α、IL-1和NO造成的病理損害而改善糖尿病及其并發癥中慢性炎癥引起不同的病理刺激和組織損壞；消除自由基，改善氧化應激引起的活性氧（ROS）和活性氮（RNS）的產生與機體內抗氧化防御系統的清除之間失衡所造成的致胰島β細胞功能損傷及外周胰島素抵抗，對于治療2型糖尿病也發揮積極作用。另外，其緩解糖尿病神經病變及疼痛；有效降低總膽固醇（TC），低密度脂蛋白（LDL），甘油三酯（TG）和極低密度脂蛋白（VLDL），增加患者的高密度脂蛋白（HDL），抵抗糖尿病心血管病變；降低紅細胞、晶狀體和坐骨神經中山梨醇累積，使患者視網膜微血管瘤及血斑消退；抑制腎臟醛糖還原酶mRNA的表達而保護腎臟等，控制糖尿病引起的神經病變、心血管病、視網膜病、腎病等以及幾乎涉及全身組織和器官損害[33]。

3.3 抗艾滋病 有研究利用余甘子葉開展余甘子藥物組合物及其制備方法、制劑和抗艾應用研究，傳承傳統中醫藥理論，通過清熱解毒（抗毒抗菌）、扶正祛邪（增免）相結合原則治療艾滋病，在治療艾滋病引起的皮膚病黏膜病變，如：反復口腔黏膜潰瘍、單純皰疹性口炎、脂溢性皮炎、全身皮疹瘙癢、濕疹、帶狀皰疹、痤瘡，多種感染混合存在等，取得明顯療效，減少機會性感染，明顯改善患者飲食睡眠及生活質量[34-37]。

3.4 治療皮膚病 運用配伍余甘子和余甘子葉提取物或成分的軟膏治療濕疹、慢性濕疹、皮炎濕疹、神經性皮炎、外耳道濕疹等的臨床觀察，療效明顯，且復發率低，無嚴重不良反應[38-39]。

3.5 其它 利用余甘子葉及其制劑可應用于治療慢性支氣管炎并肺氣腫、肝病、感染、免疫低下癥、心腦血管病、惡性腫瘤等[40]。

4 質量控制

4.1 鑒別方法 利用薄層色譜法和對照物質，可鑒別余甘子葉。余甘子葉提取液在紫外-可見光區都有吸收峰，石油醚、乙酸乙酷、乙醇提取液特征吸收峰較多、較強；不同提取溶劑冷浸液、回流液特征吸收峰峰位相同，其導數光譜是吸收度或光強度對波長變化的曲線，解決相鄰吸收帶重疊、峰位移動、峰形不對稱、肩峰等現象，使譜帶寬度變小，分辨率增高，有一定的鑒別意義。建立余甘子葉指紋圖譜鑒別方法，采用高效液相色譜法測定，乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫25℃，紫外檢測波長218 nm，結果：余甘子葉中有 15 個共有峰被確定為指紋峰，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統 A 版》計算機軟件評價10批余甘子葉指紋圖譜相似性，其結果均>0.9，方法簡便可靠，可用于余甘子葉鑒別和質量控制[41]。

4.2 含量測定 以榭皮素為對照品，利用紫外可見分光光度法測定余甘子葉提取物中總黃酮含量，測得其總黃酮平均含量51.60%，可作為測定余甘子葉提取物中總黃酮含量方法。另有采用HPLC法檢測余甘子葉中槲皮素和山奈酚含量，色譜柱為Thermo HypersilBDSC18（4.6mm×250mm，5μm），流動相乙睛-1%磷酸，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，檢測波長360～370 nm，結果顯示不同產地余甘子葉，均檢出沒食子酸，但含量有差異，相差近10倍，槲皮素含量0.12%～0.68%和山奈酚含量0.033%～0.12%。另有采用HPLC法檢測余甘子葉中沒食子酸含量，迪馬C18色譜柱，流動相甲醇-0.2%磷酸（3∶97），流速1.0 mL/min，檢測波長269 nm，室溫，結果：不同產地余甘子葉沒食子酸含量差異大，沒食子酸含量0.022～0.498 mg/g。HPLC法可用于廣西余甘子葉的定性定量檢測方法[42]。

5 專利

主要有利用余甘子葉配伍其它中藥民族藥制成保健茶、抗艾滋藥物[43]、抗癌中藥等申請國內專利保護。

6 結語

余甘子是一種極富特色的天然植物資源，藥食同源[44]，價廉物美，保健和醫藥價值明確可靠，食用藥用歷史悠久。余甘子葉為沒食子酸、槲皮素、山奈酚等生物活性成分的天然來源藥庫，對抗心腦血管病、惡性腫瘤等作用明確，藥性平和，藥食同源程度較高，在已有成果基礎上，仍需加強余甘子葉多方面的研究和利用。

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