武夷山脈金線蓮組培技術研究

摘 要：以武夷山脈金線蓮的嫩莖段作為外植體，研究其組培快繁技術體系，結果表明：10%次氯酸鈣溶液消毒15min對外植體消毒處理效果最佳，存活率達70.0%；嫩莖段在MS+ KT 0.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1培養基下進行增殖培養效果最佳，增殖系數達3.40；培養基中添加100g·L-1馬鈴薯泥有利于促進芽苗的健壯生長與生根培養。生根苗經過精心培育，成活率達95%以上。

關鍵詞：金線蓮；嫩莖段；組培技術

中圖分類號 S567 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）12-0074-3

金線蓮別名金線蘭、金絲草，為蘭科開唇植物花葉蘭屬多年生珍稀中草藥，使用范圍廣泛，素有“藥王”、“金不換”、“烏人參”等美稱。由于金線蓮對生長條件要求苛刻，自然繁殖率低，生長緩慢，加上人為過度采挖，致使野生資源瀕臨絕種。福建省武夷山屬亞熱帶海洋性濕潤季風氣候，夏無酷暑，冬無嚴寒，雨量充沛，光熱充足，相對濕度較大。得天獨厚的地理、氣候、水文條件及森林效應，形成了特殊的生態條件，為金線蓮生長創造了理想的生態環境，境內金線蓮種質資源豐富，藥用價值高。近年來，南平市規劃創建武夷新區生物產業核心區，同時也在積極建立天然藥物藥材良種繁育示范基地，以地道藥材為基礎，建設地道植物藥材培育示范基地，逐步建成集原料引種試驗、良種繁育、示范、觀光于一體的示范帶動區域。優質的種質資源是發展生物醫藥產業的先決條件，為此筆者以武夷山境內經過良種選育出來的野生金線蓮種苗作為試驗對象開展組培技術的研究，為武夷山脈金線蓮道地藥材的工廠化生產提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗材料取自福建省武夷山境內，以經過選優的野生金線蓮種苗作為外植體。

1.2 培養基配制和培養條件 以MS作為基本培養基，根據需要添加不同濃度的KT、NAA、IBA等植物激素，并附以瓊脂0.6%、蔗糖3%，調整pH值為5.6～5.8，煮沸，待瓊脂融化后分裝到組培瓶中，在121℃下高壓滅菌18～20min，取出冷卻凝固后待用。將培養苗置于光照培養架下培養，培養室溫度設置在23～27℃，光照強度1500～2000lx，光照時數12h·d-1。

1.3 試驗方法

1.3.1 材料的表面滅菌 將取回的野生金線蓮種苗剪去葉片后用自來水沖洗干凈。接著拿到接種室超凈工作臺上用75%酒精浸泡外植體20s，無菌水沖洗1次后再進行消毒處理對比試驗。把消毒好的外植體剪切成帶芽的莖段，接種到誘導培養基中進行培養，30d后統計比較消毒效果，篩選出最佳的外植體消毒方法。消毒試驗共設計3個處理（10%次氯酸鈣溶液消毒5min+0.1%HgCl2消毒5min、10%次氯酸鈣溶液消毒15min、0.1%HgCl2消毒10min）。

1.3.2 芽誘導與增殖培養 本試驗選擇在MS基本培養基的基礎上，外加不同濃度水平的KT和IBA激素，按正交設計組成9個處理，每個處理接種50個莖段，重復3次，40d后統計芽分化數及分化情況。

1.3.3 壯苗與生根培養 將誘導出的芽苗接種到添加不同濃度馬鈴薯泥的培養基中，研究不同濃度馬鈴薯泥對金線蓮壯苗與生根培養的影響。各試驗不同處理、水平代號見表1～表3所示。

2 結果與分析

2.1 不同消毒方法對外植體誘導存活的影響 外植體在接種之前，必須經過嚴格地消毒滅菌，特別是野外采集回來的外植體，因在自然環境下生長帶菌量大，增加消毒的難度。外植體消毒的基本原則是既要徹底地殺滅各種有害菌，又不致于過度損傷組織材料，而影響生長。由表4可知，3種不同消毒處理中，以10%次氯酸鈣溶液消毒15min效果好，外植體存活率高，達70%，10%次氯酸鈣溶液消毒5min+0.1%HgCl2消毒5min效果次之，達53.3%，單純用0.1%HgCl2消毒10min效果最差，外植體存活率僅為30%。這可能是因為野生金線蓮莖段組織幼嫩，細胞壁薄，而HgCl2溶液較次氯酸鈣具有較強的細胞滲透能力，過長消毒時間對組織細胞具有明顯的毒害作用，影響外植體存活。因此，武夷山脈金線蓮外植體消毒處理應以10%次氯酸鈣溶液消毒為主，時間以15min為宜。

2.2 芽誘導與增殖培養 金線蓮增殖快繁技術可以通過原球莖增殖和芽苗增殖2種方式進行，采用芽苗增殖方式可以保持原種的優良特性，為良種快繁最主要采用的方式。通過芽苗增殖方式除了選擇正確的培養基和適宜的培養環境外，最主要的影響還在于生長調節物質種類和配比濃度。我國植物生理學家發現適宜的細胞分裂素與生長素的濃度比，可以有效地控制植物組織培養過程中芽和根的發生。

由表5可知，培養基中添加KT與IBA激素組合可以有效促進金線蓮芽苗增殖。不同濃度激素組合對金線蓮芽苗的誘導與增殖影響較大，芽苗的分化系數變動范圍為1.72～3.40。本試驗中，以中濃度的KT與中高濃度的IBA配合促進芽的增殖效果最明顯，芽苗分化系數可達3.0以上。高濃度的KT對金線蓮芽的誘導有明顯的抑制作用，生長素IBA對芽的伸長生長有明顯的促進作用。在試驗使用的KT與IBA激素組合中，以KT0.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1組合效果最佳，分化系數達3.40，這對于武夷山脈金線蓮組培快繁生產具有重要的現實意義。

2.3 壯苗與生根培養 蘭科類植物在組織培養過程中需要添加一定量的馬鈴薯泥、香蕉泥或椰子汁，可有利于促進培育健壯的植株。在本試驗中，通過培養基中添加一定濃度的馬鈴薯泥（先煮熟再用攪拌機攪成糊狀），研究不同濃度的馬鈴薯泥對芽苗增壯和生根培養的影響。從表6分析得知，培養基中添加一定濃度的馬鈴薯泥對金線蓮植株的生長與生根培養具有明顯的促進作用。當每升培養基中添加100g·L-1的馬鈴薯泥時，金線蓮芽苗莖桿粗壯，葉色深綠，芽苗健壯，根數可達3～5條，基本符合馴化移栽的要求，過多或過少均不利于壯苗與生根培養。

2.4 煉苗與移栽 當金線蓮瓶苗根系長至1.5～2.5cm左右時，應將生根瓶苗搬到馴化室進行自然環境中煉苗培養。經過約30～50d左右的煉苗培養后，當芽苗莖桿顏色轉為褐色，葉片肥厚時，打開瓶蓋，再煉苗1～2d，然后小心取出，洗凈根部附著的培養基，移植于經過消毒處理的混合基質中。種植前7d，用0.1%高錳酸鉀溶液對基質進行消毒。金線蓮性喜陰涼、潮濕、通風的環境，基質要求疏松通氣。移栽基質應以腐殖土為主，外加一定量的珍珠巖，移栽后應嚴格控制澆水量，只要保持基質濕潤即可。晴天應加蓋2層遮陽網，以減少陽光直射，避免灼傷。7d后，可噴多菌靈800倍或托布津1000～1200倍溶液殺菌。經過30d精心培育，小苗平均成活率達95%以上。

3 結論與討論

（1）外植體滅菌處理應選擇合適的消毒劑和消毒方法，既要保證外植體能徹底滅菌，又不至于過度地傷害外植體細胞。武夷山脈金線蓮的嫩莖在10%次氯酸鈣溶液消毒15min處理下，外植體存活率最高，達70.0%。

（2）武夷山脈金線蓮嫩莖誘導與增殖培養基以KT 0.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1組合效果最佳，分化系數達3.40，這對于武夷山脈金線蓮組培快繁生產具有重要的現實意義。

（3）在壯苗與生根培養過程中，培養基中添加100g·L-1馬鈴薯泥有利于促進芽苗的健壯生長，培育壯苗。

（4）金線蓮性喜陰涼潮濕通風環境，在移栽管理過程中，應嚴格控制澆水量，保持基質濕潤即可，同時注意做好通風降溫遮光處理，經過40d的精心培育，平均成活率可達95%以上。

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（責編：張宏民）