Th17細胞與Treg細胞比例失衡對強直性脊柱炎發病的影響

孟 珊，范韶光，馬 超，馬秀芬，劉亞婧，蘇玉華

(1.濰坊醫學院附屬醫院 風濕免疫科，山東 濰坊261000；2.中國人民解放軍第89醫院 小兒骨科；3 .鄆城縣中醫醫院 內三科)

強直性脊柱炎的發生與多種因素有關，具體發病機制尚未完全明了[1]。有研究指出，在強直性脊柱炎的發生發展過程中，機體免疫功能受到嚴重影響，患者T細胞亞群數量可呈現出一定的失衡表現，提示T細胞免疫在強直性脊柱炎的發病過程中扮演著重要角色[2]。本研究主要探討T細胞亞群中的輔助性T細胞以及調節性T細胞在強直性脊柱炎中的表達水平的變化情況及與強直性脊柱炎發病的相關關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年12月-2016年12月期間來院就診的強制性脊柱炎患者65例為觀察組，所有患者均符合1984年紐約修訂的強直性脊柱炎診斷標準[3]，且未經任何治療。排除入院前半年內接受糖皮質激素治療者；排除合并急性感染及腫瘤患者；排除合并風濕病及其他自身免疫病患者；排除合并嚴重肝腎功能不全者；排除妊娠婦女。其中男34例，女31例，年齡18-56歲，平均年齡(31.32±2.42)歲。選取同期來院行常規體檢的65例健康者作為對照組。兩組患者一般資料無明顯差異(P均>0.05)，具有可比性。全部患者均簽署了關于本次試驗的知情權同意書，通過醫院倫理學審核。

1.2 方法

所有研究對象均抽取空腹靜脈血5 ml，置于肝素鈉抗凝負壓真空采血管，常規4 000 r/min離心10 min，棄去上清液分離血清后，-80℃保存待用。外周血Th17細胞百分率、Treg細胞百分率、Th17/Treg細胞比例檢測采用流式細胞技術，將血液樣本常溫復溫后，加入淋巴細胞分離液，采用密度梯度離心法分離外周血單核細胞，然后進行常規FTTC染色后進行流式細胞檢測，所用儀器、試劑及試劑盒均由美國BD公司提供。外周血IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子水平檢測采用雙抗體夾心ELIAs法，所采用的試劑盒均來自于北京福瑞生物科技有限公司，檢測步驟及方法嚴格按照試劑盒說明書要求進行，利用標準品建立吸光度與已知梯度濃度的標準曲線，通過樣品的OD值計算與標準曲線的對應濃度來測定樣品中目的白介素濃度。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 兩組研究對象外周血炎性細胞因子分布情況

與對照組水平相比，觀察組患者外周血IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子水平均明顯偏高(P<0.05)，組間差異顯著，具有統計學意義，見表1。

表1 兩組研究對象外周血炎性細胞因子分布情況

2.2 兩組研究對象外周血T細胞亞群分布情況

與對照組水平相比，觀察組患者外周血Th17細胞數明顯偏高(P<0.05)，其外周血Treg細胞數則明顯偏低(P<0.05)，觀察組患者外周血Th17/Treg比率明顯高于對照組(P<0.05)，組間差異具有統計學意義，見表2。

表2 兩組研究對象外周血T細胞亞群分布情況

2.3 兩組研究對象外周血T細胞亞群分布情況與強直性脊柱炎發病相關性分析

觀察組與對照組患者外周血Th17細胞數與Th17/Treg比率與強直性脊柱炎發病存在著明顯的正相關性(r=0.567、0.483，P<0.05)，且觀察組與對照組患者外周血Treg細胞數則與強直性脊柱炎發病存在著明顯的負相關性(r=-0.982，P<0.05)。

3 討論

強直性脊柱炎屬自身免疫性疾病，根據患者發病程度的不同，其相關中軸關節及肌腱韌帶附著處可出現不同程度的受累表現，主要好發于青壯年，發病往往較為隱匿[4,5]。隨著病情進展，患者可逐漸由發病之初的腰背部疼痛轉變為腰椎活動受限甚至脊柱僵直強直，嚴重影響患者的正常生活作息，是世界范圍內較為嚴重的公共衛生問題[6,7]。

盡管目前關于強直性脊柱炎的發病機制尚不明確，但免疫系統在疾病發病過程中的調節與拮抗作用，已受到廣泛重視。CD4輔助性T細胞是機體T細胞亞群中主要參與適應性免疫應答的T細胞，與巨噬細胞、B淋巴細胞以及肥大細胞的聚集和活化[8,9]。Th17細胞是近年來逐漸被認識的一類新型的Th細胞亞群，可合成并分泌Th17以及IL-22等細胞因子，可參與機體的炎癥反應工程[10]。有研究表明，Th17細胞在真菌感染和細菌感染的中性白細胞活化中也扮演著重要角色，主要參與機體的局部微環境炎癥介導，是系統性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病中的促進因子[11]。Treg細胞屬調控性T細胞，主要在機體的特異性免疫抑制中發揮調節作用，與機體的T細胞增殖抑制以及維持機體的免疫耐受均具有明顯的相關性[12]。動物實驗表明，許多自身免疫性疾病動物模型中，Treg細胞含量均明顯降低，提示Treg細胞與機體的自身免疫有一定關系[13]。國外有文獻指出，Treg細胞可通過抑制IL-10等炎性細胞抑制的分泌活性，影響相關轉錄因子FOXP3的功能，同時對Th17細胞也具有一定的階段性增殖抑制作用[14]。除此之外，Treg細胞還可表達一種促進ATP水解作用的核苷酸，也可在一定程度上抑制T細胞的增殖效應，從而介導免疫損傷的發生。本研究結果顯示，相較于健康人外周血水平，強直性脊柱炎患者外周血中Th17細胞百分比明顯偏高(P<0.05)，而Treg細胞百分比則明顯偏低(P<0.05)，且Th17/Treg細胞比率明顯偏高(P<0.05)，提示Th17細胞、Treg細胞百分比及平衡比例與強直性脊柱炎的發生具有一定關系，進一步探究其相關關系發現，強直性脊柱炎患者外周血Th17細胞百分比及Th17/Treg細胞比率與強直性脊柱炎的發病呈顯著正相關，患者外周血Treg細胞百分比則與強直性脊柱炎的發病呈顯著負相關。進一步探究強直性脊柱炎發病過程中患者外周血中炎性細胞因子的分泌情況發現，強直性脊柱炎患者外周血中IL-17、IL-23及IL-6等炎性因子表達水平均明顯高于健康人(P<0.05)，提示炎癥反應過程在促進強直性脊柱炎的發生發展過程中也發揮著一定的作用。