3種水產藥物對鱸鯉和白甲魚的急性毒性試驗

張建明，姜 華，田 甜，姜 偉，胡亞平

( 中國長江三峽集團公司 中華鱘研究所，三峽工程魚類資源保護湖北省重點實驗室, 湖北 宜昌 443100 )

鱸鯉(Percocyprispingi)，又稱花魚、金甲魚，屬鯉科、鲃亞科、鱸鯉屬，主要分布于宜昌以西的長江上游的干支流、西江流域、南盤江等水系[1]。鱸鯉是產區的大型經濟魚類，長江上游產量較大，但受到環境污染、過度捕撈等人為因素的影響，近年來鱸鯉數量急劇下降，現已被評為長江一級急切保護動物[2]和四川省珍稀保護魚類[3]。白甲魚(Onychostomasima)，又稱毛白甲、突吻魚，屬鯉科、鲃亞科、白甲魚屬，是長江重要的經濟魚類之一，自然分布于長江水系的干流、支流[4]。近年來，由于江河生態環境破壞、過度捕撈等因素的影響，白甲魚資源急劇下降[5]，已成為長江流域重點保護物種之一。

目前，鱸鯉、白甲魚的研究主要集中在馴養繁育、胚胎發育、苗種培育、生理特性等方面[6-9]，尚未見有關鱸鯉幼魚和白甲魚幼魚藥物急性毒性試驗的報道。筆者通過對鱸鯉和白甲魚幼魚開展水產藥物急性毒性試驗研究，旨在為鱸鯉和白甲魚幼魚培育階段用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗魚來自中國長江三峽集團公司中華鱘研究所烏東德增殖放流站人工培育的鱸鯉和白甲魚幼魚，規格整齊、行動敏捷、無病無傷。鱸鯉體長(14.07±1.29) cm，體質量(36.71±4.91) g；白甲魚體長(10.40±1.14) cm，體質量(21.55±4.68) g。試驗前在圓形暫養池(直徑3.0 m，水深0.7 m)中暫養5 d，試驗開始前2 d及試驗期間停食。

試驗用藥規格及生產廠家見表1。

表1 試驗藥物規格與成分

1.2 試驗條件

試驗在容積為20 L的塑料桶內進行，試驗用水為經過曝氣和沉淀后的金沙江水，水溫(22±1) ℃，pH 7.9±0.2，溶解氧(6.7±0.5) mg/L。試驗期間保持試驗場所安靜。

1.3 試驗方法

試驗采用靜態急性毒性試驗法[10-12]，試驗過程中為保持溶解氧含量，各試驗組微充氣。

1.3.1 預試驗

為確定正式試驗所需藥物質量濃度范圍，在正式試驗前根據魚病防治的藥物常用量[13]，適當調整質量濃度比例進行預試驗，觀察試驗魚活動情況和存活情況，預試驗持續觀察96 h，每日觀察并記錄死亡魚數量。

1.3.2 正式試驗

根據預試驗得出的結果，在試驗魚24 h全致死質量濃度和96 h無死亡質量濃度間按等對數間距設置5個質量濃度組(表2～表3)，每個質量濃度組設2個平行，另設1個空白對照組，每個試驗組放幼魚10尾。

配制好試驗藥物后，隨機放入試驗魚，同一試驗的試驗用魚在10 min內完成分組，由低質量濃度組到高質量濃度組依次進行，試驗過程中不更換藥液。試驗開始后，分別于24、48、72、96 h時記錄和統計魚的存活情況，當試驗魚停止呼吸、對外界刺激無反應時可判定為死亡。

表2 鱸鯉幼魚試驗藥物的質量濃度梯度 mg/L

表3 白甲魚幼魚試驗藥物的質量濃度梯度 mg/L

1.4 數據處理與分析

采用寇氏法估算半致死質量濃度(LC50)、安全質量濃度(SC)[14-15]：

LogLC50=Xm-d(p-0.5)

SC=48 hLC50×0.3/(24 hLC50/48 hLC50)2

式中，Xm為最大質量濃度的對數，d為相鄰質量濃度組比值的對數，p為死亡率。

2 結 果

2.1 聚維酮碘對鱸鯉和白甲魚幼魚的急性毒性試驗結果

將鱸鯉和白甲魚幼魚按照設定的聚維酮碘藥物質量濃度梯度放入各試驗組后，試驗初期各試驗組中鱸鯉呼吸正常，對外界刺激反應迅速，然而各試驗組白甲魚卻表現出了不同程度狂躁不安、上下竄游的現象，高質量濃度試驗組甚至狂游撞擊試驗桶，個別出現躍出桶外的現象。63.39、79.80、100.00 mg/L試驗組中的鱸鯉和77.45、88.00、100.00 mg/L試驗組中的白甲魚分別于3 h后和2 h后開始出現異常反應，主要癥狀相似，均呈現初期游動緩慢、漂浮于水面、對外界刺激反應遲鈍的現象，隨后試驗魚出現失衡、側翻、呼吸緩慢等癥狀，隨著試驗時間的增加，各試驗組開始陸續出現死亡，死亡的鱸鯉和白甲魚體表黏液增多，體色發白。鱸鯉對照組和40.00 mg/L試驗組在試驗過程中未出現死亡現象，50.35、63.39 mg/L和79.80 mg/L試驗組的鱸鯉24 h死亡率分別為0、5%和55%，48 h死亡率分別為0、15%和70%，72 h死亡率分別為0、20%和75%，96 h死亡率分別為10%、45%和85%。鱸鯉100.00 mg/L試驗組24 h死亡率為100%。白甲魚對照組和60.00 mg/L試驗組在試驗過程中未出現死亡現象。68.47、77.45 mg/L和88.00 mg/L試驗組的白甲魚24 h死亡率分別為0、0和5%，48 h死亡率分別為0、0和35%，72 h死亡率分別為0、5%和50%，96 h死亡率分別為15%、35%和75%。白甲魚100.00 mg/L試驗組的24 h死亡率為100%。

2.2 敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚的急性毒性試驗結果

將鱸鯉和白甲魚幼魚按照設定的敵百蟲藥物質量濃度梯度放入各試驗組后，試驗初期，各試驗組中鱸鯉和白甲魚均未出現異常反應。5 h后，3.85、6.00 mg/L試驗組中的鱸鯉和2.00、2.83、4.00 mg/L試驗組中的白甲魚均開始出現相似的異常行為，即反應遲鈍、游動遲緩，進而魚體出現側翻，間歇性呼吸，隨后各試驗組出現死亡現象，死亡的鱸鯉和白甲魚體表附有大量黏液，體色變淺發白。對照組和1.00 mg/L試驗組在整個試驗過程中未出現死亡現象。1.57、2.45 mg/L和3.85 mg/L試驗組的鱸鯉24 h死亡率分別為0、5%和30%，48 h死亡率分別為0、5%和55%，72 h死亡率分別為5%、10%和80%，96 h死亡率分別為10%、20%和85%。鱸鯉6.00 mg/L試驗組24 h死亡率為100%。白甲魚對照組和1.00 mg/L試驗組在整個試驗過程中未出現死亡現象。1.41、2.00 mg/L和2.83 mg/L試驗組的白甲魚24 h死亡率分別為0、0和15%，48 h死亡率分別為0、55%和85%，72 h死亡率分別為15%、90%和100%，96 h死亡率分別為35%、100%和100%。白甲魚4.00 mg/L試驗組24 h死亡率為100%。

2.3 氯胺T對鱸鯉和白甲魚幼魚的急性毒性試驗結果

將鱸鯉和白甲魚幼魚按照設定的氯胺T藥物質量濃度梯度放入各試驗組后，試驗初期各試驗組鱸鯉均表現出了不同程度狂躁不安、上下竄游的現象，高質量濃度試驗組甚至出現狂游，個別試驗魚出現跳出桶外的現象。而各試驗組白甲魚無明顯的異常行為。12.27、19.23、30.00 mg/L試驗組中的鱸鯉和15.81、19.88、25.00 mg/L試驗組中的白甲魚分別于2 h和7 h后，開始表現出反應遲緩、游動無力、漂浮水面等異常行為，進而身體失去平衡、側翻、呼吸緩慢，隨著試驗時間的增加，各試驗組陸續出現死亡，死亡的鱸鯉和白甲魚體表黏液增多，體色變淺發白。對照組和5.00 mg/L組的鱸鯉幼魚在試驗過程中未出現死亡現象。7.83、12.27 mg/L和19.23 mg/L試驗組的鱸鯉24 h死亡率分別為5%、20%和55%，48 h死亡率分別為10%、35%和75%，72 h死亡率分別為10%、55%和80%，96 h死亡率分別25%、60%和95%。30.00 mg/L試驗組的鱸鯉24 h死亡率為100%。對照組和10.00 mg/L組的白甲魚在試驗過程中未出現死亡現象。12.57、15.81 mg/L和19.88 mg/L試驗組的白甲魚24 h死亡率分別為0、10%和35%，48 h死亡率分別為0、50%和75%，72 h死亡率分別為15%、70%和90%，96 h死亡率分別為20%、95%和100%。25.00 mg/L試驗組的白甲魚24 h死亡率為100%。

2.4 3種水產藥物對鱸鯉和白甲魚幼魚的半致死質量濃度和安全質量濃度

3種水產藥物對鱸鯉幼魚的半致死質量濃度和安全質量濃度見表4。由表4可見，聚維酮碘、敵百蟲和氯胺T對鱸鯉幼魚的24 h半致死質量濃度分別為78.02、4.11 mg/L和16.83 mg/L；48 h半致死質量濃度分別為73.74、3.68 mg/L和14.09 mg/L；72 h半致死質量濃度分別為72.10、3.15 mg/L和12.60 mg/L；96 h半致死質量濃度分別為65.13、2.89 mg/L和10.79 mg/L；安全質量濃度分別為19.76、0.89 mg/L和2.96 mg/L。3種水產藥物對白甲魚幼魚的半致死質量濃度和安全質量濃度見表5。由表5可見，聚維酮碘、敵百蟲和氯胺T對白甲魚幼魚的24 h半致死質量濃度分別為93.21、3.19 mg/L和20.11 mg/L ；48 h半致死質量濃度分別為89.70、2.07 mg/L和16.74 mg/L；72 h半致死質量濃度分別為87.44、1.66 mg/L和14.93 mg/L；96 h半致死質量濃度分別為79.95、1.49 mg/L和13.62 mg/L；安全質量濃度分別為24.92、0.26 mg/L和3.48 mg/L。

表4 3種藥物對鱸鯉幼魚的半致死質量濃度和安全質量濃度

表5 3種藥物對白甲魚幼魚的半致死質量濃度和安全質量濃度

3 討 論

3.1 3種水產藥物對鱸鯉和白甲魚幼魚的毒性評價

半致死質量濃度常用來衡量藥物對試驗魚毒性的大小，半致死質量濃度值與藥物的毒性呈負相關，即半致死質量濃度值越小，藥物的毒性越大[15]。常以96 h半致死質量濃度值作為藥物毒性評價的指標，根據有毒物質對魚類急性毒性的評價標準，可分為4個等級[16](藥物96 h半致死質量濃度<0.1 mg/L，屬劇毒藥物；96 h半致死質量濃度為0.1～1，屬高毒藥物；96 h半致死質量濃度為1～10，屬中毒藥物；96 h半致死質量濃度>10，屬低毒藥物)。本試驗結果顯示，聚維酮碘、敵百蟲、氯胺T對鱸鯉幼魚的96 h半致死質量濃度為65.13、2.89 mg/L和10.79 mg/L，對白甲魚幼魚的96 h半致死質量濃度為79.95、1.49 mg/L和13.62 mg/L。參考有毒物質的評價標準，敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚是中毒藥物，氯胺T和聚維酮碘對二者是低毒藥物。

3.2 鱸鯉和白甲魚幼魚對3種藥物的耐受性差異

3.3 生產過程中3種藥物的用藥安全及注意事項

聚維酮碘為廣譜消毒劑，主要用于魚卵、水生動物體表消毒。聚維酮碘常規使用量因疾病種類、水生動物種類、藥浴時間和頻次而差別較大，如草魚出血病預防用藥30 mg/L浸浴15～20 min，鰻鱺(Anguillajaponica)爛鰓病治療用藥0.8～1.5 mg/L浸浴24 h，連用2次，紅頭病用藥1～2 mg/L浸浴24 h，連續2～3次[13]。聚維酮碘對鱸鯉和白甲魚幼魚的安全質量濃度分別為19.76 mg/L和24.92 mg/L，遠高于長時間低用藥量，稍低于短時間高用藥量，但40 mg/L試驗組鱸鯉和60 mg/L試驗組白甲魚在96 h內未發生死亡現象，說明在實際生產過程中可按常用量使用。

敵百蟲，可防治魚體外寄生指環蟲(Dactylogyrus)、三代蟲(Gyrodactylus)等吸蟲，腸內寄生的絳蟲、棘頭蟲等蠕蟲，此外還可驅殺錨頭蚤(Lernaea)、魚虱(Argulus)等甲殼動物、劍水蚤(Cyclops)、龍虱(Dytiscus)幼蟲和蚌殼蟲(Cyzicus)等。敵百蟲常規藥浴用量為0.2～0.5 mg/L[13]。敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚的安全質量濃度分別為0.89 mg/L和0.26 mg/L，鱸鯉安全質量濃度高于常用量，白甲魚安全質量濃度處于常用量中間值，但白甲魚1.0 mg/L試驗組96 h內未出現死亡現象，表明對鱸鯉和白甲魚寄生蟲性疾病可按常規用藥量開展防治工作。此外在實際使用過程中，敵百蟲除與碳酸鈉合用外，不得與其他堿性藥物合用，且操作過程中不宜采用金屬器皿。

氯胺T，可用于治療三代蟲病、小瓜蟲(Ichthyophthirius)病等寄生蟲性疾病，同時是一種較強的殺菌消毒劑，具有殺菌譜廣，消毒作用緩慢而持久，刺激性小的特點，主要用于防治細菌爛鰓病和真菌病。氯胺T常規用量為1～10 mg/L、常規消毒藥浴用量為4～20 mg/L[13]。氯胺T對鱸鯉和白甲魚幼魚的安全質量濃度分別為2.96 mg/L和3.48 mg/L，低于消毒用量的最低值，但處于殺蟲用量的中間值。試驗結果顯示，5 mg/L試驗組鱸鯉96 h未出現死亡現象，但7.835 mg/L試驗組鱸鯉24 h的死亡率為5%，10 mg/L試驗組白甲魚96 h未出現死亡，但12.57 mg/L試驗組白甲魚72 h死亡率為15%。故在實際生產過程中為保障魚類的用藥安全，氯胺T對鱸鯉幼魚無論是消毒還是殺蟲，其用量不可高于5 mg/L；氯胺T對白甲魚幼魚可按常規殺蟲用量進行寄生蟲性疾病防治，但消毒用量不應高于10 mg/L，且在施藥過程中不可使用金屬容器。

4 結 論

合理使用藥物是控制水生動物病害蔓延的重要環節，藥物用量過低無法達到藥效而使病情惡化，藥物用量過高對機體產生毒害作用而出現新的征兆。因此，選擇藥物時要注意其安全性和有效性。本次試驗結果表明，敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚是中毒藥物，氯胺T和聚維酮碘對其是低毒藥物。在鱸鯉和白甲魚幼魚培育過程中，要做到科學診斷，對癥下藥。細菌性疾病和日常消毒操作建議首選聚維酮碘，推薦使用方法為：(1)0.8～2.0 mg/L浸浴24 h，連用2～3次(二者相同)；(2)15～30 mg/L浸浴15～30 min(二者相同)。備選氯胺T，推薦使用劑量為：鱸鯉，3～5 mg/L浸浴24～72 h；白甲魚，4～10 mg/L浸浴24～72 h。治療蠕蟲和甲殼動物建議使用敵百蟲，推薦使用方法為：0.2～0.5 mg/L浸浴1～2 h，連用2～3次(二者相同)。治療小瓜蟲、三代蟲等建議使用氯胺T，推薦使用方法為：鱸鯉，1～5 mg/L浸浴24 h；白甲魚，1～10 mg/L浸浴24 h。