復方牛磺酸滴眼液對小鼠腸系膜微循環的影響及大鼠抗眼過敏試驗研究

劉錫軍，才 鳳，肖春瑩

（1.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧 沈陽 110032； 2.遼寧省食品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110015）

視疲勞是臨床常見病、多發病，發病率逐年升高。祖國醫學稱視疲勞為“肝勞”，認為是肝腎精虧、肝血不足，目失濡養所致。相關資料表明，應用中醫藥治療視疲勞具有良好的前景。牛磺酸是一種特殊的氨基酸，是人體必不可少的一種營養元素[1]。眼藥中大都含有牛磺酸，可強化角膜的自我修復能力，對抗眼疾[2－3]。牛磺酸是由中藥中提取的一種有效成分，在內科中作為解熱、抗炎和強肝利膽藥，不良反應極少[4－5]。復方牛磺酸滴眼劑是由牛磺酸、鹽酸萘甲唑啉、維生素B6、馬來酸氯苯那敏組方，具有無色、無味、無毒副作用等特點，原料容易獲得，且外源性的牛磺酸能順利地通過晶體細胞膜，無需載體，且不消耗能量，對于維持眼的代謝功能十分重要，臨床主要用于防治近視和眼疲勞。本研究中分別觀察了該滴眼液與萘撲維滴眼液對小鼠腸系膜微循環的影響和大鼠抗眼過敏作用，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

藥物：復方牛磺酸滴眼液（遼寧省藥物研究院自制，規格為每支10 mL），主方為牛磺酸、鹽酸萘甲唑啉、維生素B6、馬來酸氯苯那敏，含量分別為2%，1%，0.5%（以牛磺酸含量計）；空白溶劑為透明質酸鈉和氯化鈉；萘撲維滴眼液（山東正大福瑞達制藥有限公司，規格為每支10 mL），主方為鹽酸萘甲唑啉、馬來酸氯苯那敏、維生素B12，含量為0.02%（以鹽酸萘甲唑啉計）。

試劑：腎上腺素（上海禾豐制藥有限公司，批號為20030702）；卵清蛋白（美國 Sigmag公司，批號為041008）；烏拉坦（上海山浦化工有限公司，批號為030315）；硫酸鋁鉀（國藥試劑集團）；DL－二硫基蘇糖醇（美國Sigmag公司，批號為020606）；偶氮藍（國藥集團化學試劑有限公司，批號為20030531）；無水硫酸鈉（北京化工廠，批號為000701）；丙酮（北京北化精細化學有限責任公司，批號為051016）。以上試劑均為分析純。

動物：昆明種小鼠，體質量18～22 g，60只，雌雄各半，合格證號為 SCXK（遼）2003 －008。Wistar大鼠，體質量180～220 g，30只，雌雄各半，合格證號為SCXK（遼）2003－012。所有動物均由沈陽藥科大學動物室提供，自由采食和攝水。均嚴格符合眼科與視覺研究中使用動物的科學聲明。所有手術均在全身麻醉情況下進行，肌內注射1.25 g/kg烏拉坦，盡量減少其痛苦。

儀器：顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）；BJ－2000型微循環（四川成都泰盟科技有限公司）；UV－1601型紫外分光光度儀（Shimadzu公司）；離心機（金壇市榮華儀器制造有限公司）；電子秒表（深圳市泛華亞精密工具儀器公司）。

1.2 方法

1.2.1 對小鼠腸系膜微循環的影響[6－8]

分組：將雌雄各半小鼠隨機分為5組，空白對照組、萘撲維組、大劑量組（復方牛磺酸滴眼液2%）、中劑量組（復方牛磺酸滴眼液1%）、小劑量組（復方牛磺酸滴眼液 0.5% ），每組12只。

造模：取小鼠腹腔注射烏拉坦1.25 g/kg麻醉，開腹，輕取小腸一段放微循環觀察架上，顯微鏡下（40×）觀察。將血管粗細、血流速度相近的腸系膜毛細血管置顯微鏡視野中央，滴腎上腺素 0.03 mL（0.015 mg），待毛細血管血流停止后，立即局部滴藥0.1 mL，記錄滴藥后至毛細血管中血液開始流動的時間為循環恢復時間。分別測定各組對循環恢復時間的影響，滴藥體積均為0.1 mL。

1.2.2 抗眼過敏作用[9－12]

分組：將雌雄各半Wistar大鼠隨機分為5組，空白對照組、萘撲維組、大劑量組、中劑量組、小劑量組，每組6只。

造模：各組大鼠均腹腔注射卵清蛋白磷酸鹽緩沖液1 mL（含卵清蛋白 100 g，硫酸鋁鉀 20 mg）免疫。14 d后，各眼滴1 mol/LDL－二硫基蘇糖醇溶液20 μL，以消除結膜黏液屏障，提高攻擊效果。15 min后，鼠尾靜脈注射偶氮藍（每100 g體質量1.25 mg）溶液1 mL，并立即用微量加樣器，取10%卵清蛋白磷酸鹽緩沖液10 μL滴眼攻擊。于攻擊前3 h開始給藥，30 min 1次，每次滴0.05 mL，共滴眼 4 次。攻擊后 30 min，放血，處死大鼠，剜出眼瞼、結膜和眼球，去除脂肪，置入5 mL硫酸鈉－丙酮浸液中振蕩，24 h后離心，吸取上清液，采用分光光度計在620 nm波長處比色，即得光密度值（OD）。

1.3 統計學處理[13]

數據均以均數±標準差（）表示，行t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對小鼠腸系膜微循環的影響

結果見表1。可見，空白對照組循環恢復時間為3.53 min，各給藥組循環恢復時間縮短至1.18～2.03 min，與空白對照組比較均有顯著性差異（P＜0.01），大劑量組作用明顯強于萘撲維組（P＜0.05），表明該藥局部應用可顯著改善局部微循環。

表1 各組小鼠腸系膜微循環比較（n=12）

2.2 對大鼠偶氮藍滲出量的影響

結果見表2。可見，各給藥組對偶氮藍滲出量抑制率為24.3% ～59.1%，與空白對照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），且大劑量組作用明顯強于萘撲維組（P＜0.01）。結果表明，復方牛磺酸滴眼液高、中、低劑量均能明顯抑制偶氮藍的滲出量，具有明顯的抗眼過敏作用。

表2 各組大鼠偶氮藍滲出量比較（±s，n=6）

表2 各組大鼠偶氮藍滲出量比較（±s，n=6）

注：與空白對照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

組別OD 抑制率（%）0.419 ±0.072 0.188 ±0.050**0.172 ±0.045**0.225 ±0.046**0.317 ±0.124*空白對照組萘撲維組大劑量組中劑量組小劑量組55.3 59.1 46.6 24.3

3 討論

根據模型的發展，證候動物分為生化模型、病理模型、病理生理模型，模型的成功與否多是通過動物機體的生物化學、細胞酶學、激素水平、神經因子、基因組學、蛋白組學等相關指標的測定結果來判斷，有時所測指標并不能解釋或不能完全解釋中醫證候的變化。因此，建立或有效反映生物表征的動物模型，使中醫臨床研究和病理學研究緊密結合起來，可促進中醫癥－證研究的快速發展。

牛磺酸是一種特殊的氨基酸，為含硫氨基酸，也存在于動物體內，具有多種藥理學活性，具有自由基清除劑作用，在維持正常眼功能方面發揮著重要作用，牛磺酸缺乏可使視網膜產生病理改變，甚至導致失明。

本研究結果顯示，復方牛磺酸滴眼液可明顯改善小鼠腸系膜微循環作用，對大鼠具有明顯的抗眼過敏作用，且與萘撲維滴眼液的作用較接近，表明復方牛磺酸滴眼液具有改善局部微循環和抗眼過敏作用。