有機陰離子轉運多肽OATP1B1基因多態性與瑞格列奈藥物療效的相關性研究*

何新苗，趙福蘭，姚 飛，傅存冀，馬曉麗

（新疆維吾爾自治區烏魯木齊市第一人民醫院，新疆 烏魯木齊 830002）

瑞格列奈是較有效的餐時血糖調節劑，可有效抑制胰腺β細胞三磷酸腺苷（ATP）敏感的鉀通道，恢復胰島素早期分泌的時相，有效減少就餐時的血糖高峰值[1]，起效快，半衰期短，不良反應少，廣泛用于治療2型糖尿病（T2DM）。瑞格列奈在治療T2DM過程中療效常出現較大的個體差異，倍受關注。有機陰離子轉運多肽OATP1B1是特異性分布于肝細胞基底膜上的轉運蛋白，瑞格列奈主要通過其轉運。瑞格列奈口服后被迅速吸收并消除，在消除過程中OATP1B1對藥物的轉運作用是肝細胞攝取藥物的關鍵[2]。有研究表明，OATP1B1的單核苷酸多態性（SNPs）影響瑞格列奈的藥物濃度，可能是造成瑞格列奈療效和不良反應個體差異的部分原因[3]。本研究中選取OATP1B1 388A＞G及521T＞C 2個位點探討其與瑞格列奈藥物療效的相關性，旨在提高藥物治療的療效和安全性，為臨床個體化合理用藥提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：確診為T2DM且未服用任何降糖藥物；若已接受過T2DM藥物治療者經過5～7個藥物半衰期后；年齡 25 ～70 歲；體質量指數（BMI）18.5 ～ 30 kg/m2；無胰島素使用史；本研究方案經醫院醫學倫理委員會批準，患者知情且自愿簽署同意書。

排除標準：CYP2C8，CYP3A4和 OATP1B1的誘導劑和抑制劑同時使用；其他家族疾病史，嚴重肝腎疾病；妊娠期、哺乳期。

病例選擇：選取我院2014年3月至2016年3月初診為T2DM的患者45例。其中，男27例，女18例；平均年齡（64.52 ± 5.18）歲。

1.2 方法

治療方案：入組患者均常規口服瑞格列奈片（商品名諾和龍，諾和諾德公司，進品藥品注冊證號H20130023，規格為每片1.0 mg），初始劑量1 mg/d，持續治療1個月后，根據血糖控制情況逐步調整服藥劑量為1.0，1.5，2.0 mg/d 至 3 個月。治療期間患者飲食、運動習慣保持不變，降壓、調脂藥物使用者劑量維持不變，檢測用藥前后各項指標。

SLCO1B1基因388A＞G，521T＞C多態性檢測：使用磁珠法提取血液DNA試劑盒（I30505，北京全式金生物技術有限公司）提取全血中的DNA，用Nano－100型核酸定量儀（杭州奧康生物科技公司）測定DNA濃度，電泳檢測DNA完整性。引物設計與合成，388A＞G（rs2306282）位點以 5′－ CACTTTTACCCATCACATC －3′及 5′－ TAGTGGGAAAAGGTAAGAA －3′為引物，521T ＞ C（rs41409056）位點以 5′－ AGAATGGACTAATACACCA －3′及 5′－ TTTCCCTTTGTCTACTTTT － 3′為引物；PCR 體系總體積 30 μL，其中 3 μL 10×Pfu Buffer，0.6 μL dNTP Mix（10 mmol/L），0.6 μL 上游引物（10 μmol/L），0.6 μL 下游引物（10 μmol/L），0.6 μL Template（模板 －DNA 樣本），0.3 μL Pfu DNA Polymerase Polymerase（2.5 U/μL），24.3 μL ddH2O2。PCR 反應條件，95℃預變性5 min，然后95℃ 30 s，退火溫度55℃，30 s，共計40個循環，再于72℃ 60 s，72℃延伸5 min，4℃終止反應。PCR產物送往測序。

1.3 觀察指標

治療前后，抽取患者空腹靜脈血檢測糖、脂代謝及腎功能指標，檢測空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FINS）、血脂和糖化血紅蛋白（HbA1C）后采用放射免疫法測定FINS，計算胰島素敏感指數（ISI）=1/（FINS ×FBG），胰島素抵抗指數（HOMA －IR）=FBG×FINS/22.5。

1.4 統計學處理

采用SPSS 19.0統計軟件處理數據。糖、脂代謝相關指標以（表示，行t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 OATP1B1 388A＞G，521T＞C基因變異頻率

OATP1B1 388A＞G位點AA，AG，GG基因型頻率分別為 21 例（46.67%），19 例（42.22% ），5 例（11.11%）；A，G等位基因頻率分別為67.78%和32.22%；521T＞C位點 TT，TC，TT基因型頻率分別為 31例（68.89%），14 例（31.11% ），0 例（0）；T，C 等位基因頻率分別為84.44% 和 15.56% 。但由于 521T＞C位點不符合Hardy－Weinberg平衡定律，未達到遺傳平衡，不具群體代表性，因此，本研究中僅分析OATP1B1 388A＞G與瑞格列奈藥物療效的相關性。

2.2 OATP1B1 388A＞G多態性與療效的相關性

將基因型分為 AA組（AA型）、AG組（AG型）和GG組（GG型）進行對比分析，結果顯示，使用瑞格列奈治療前后，AA組FBG和HbA1C均顯著降低（P＜0.05），AG組僅有HbA1C顯著降低（P＜0.05），GG組FBG等相關指標均無顯著改善（P＞0.05）。3組間比較，GG組治療前后總膽固醇（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）降低幅度最顯著，且優于其他2組（P＜0.05）；但FBG相關指標的改善程度3組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1和表 2。

表1 基因rs2306283不同等位基因糖、脂代謝指標對比（（±s）

表1 基因rs2306283不同等位基因糖、脂代謝指標對比（（±s）

注：“*”為 P ＜0.05，差異有統計學意義。表 2 同。

指標 治療前 治療后 t值 P值FBG（mmol/L）TC （mmol/L）TG（mmol/L）HDL －C（mmol/L）LDL－C（mmol/L）ISI（mU/L）HOMA－IR FINS（mU/L）HbA1c（% ）AA組9.55 ± 2.11 4.78 ± 1.33 2.13 ± 1.63 1.29 ±0.58 2.75 ± 0.96 13.26 ± 1.14 5.52 ±0.33 18.43 ±2.02 9.11 ± 1.30 AG組10.15 ± 3.41 5.15 ± 0.80 2.20 ± 0.90 1.29 ±0.26 3.12 ± 0.59 11.57 ± 0.62 4.89 ±0.19 16.21 ±2.11 9.75 ± 1.79 GG組8.81 ± 1.25 4.64 ± 0.82 1.71 ± 0.43 1.33 ±0.16 3.06 ± 0.53 13.26 ±1.14 5.52 ±0.33 17.74 ±2.28 9.43 ± 1.89 AA組8.12 ± 1.74 4.94 ± 1.30 1.87 ± 0.61 1.32 ±0.51 2.93 ± 0.98 16.85 ± 1.84 4.79 ±0.61 20.43 ±2.21 7.80 ± 1.47 AG組8.53 ± 2.45 4.76 ± 0.64 1.87 ± 0.92 1.34 ±0.29 3.04 ± 0.49 14.26 ± 0.75 4.21 ±0.26 17.89 ±1.89 8.35 ± 1.50 GG組7.11 ± 2.26 5.82 ± 2.10 1.84 ± 1.27 1.22 ±0.25 4.13 ± 1.07 16.85 ± 1.84 4.79 ±0.61 19.64 ±2.25 7.90 ± 2.57 AA組2.39－ 0.38 0.63－0.20－ 0.57－ 2.07－0.09 0.25 3.07 AG組1.68 1.54 1.05－0.57 0.38－ 0.07 0.89－0.42 2.61 GG組1.47－ 1.07－ 0.21 0.66－ 1.74－ 0.07 0.89－0.42 1.07 AA組0.022*0.708 0.533 0.840 0.572 0.077 0.932 0.813 0.004*AG組0.102 0.133 0.302 0.572 0.705 0.946 0.401 0.691 0.013*GG組0.180 0.344 0.846 0.546 0.157 0.826 0.702 0.781 0.316

表2 基因rs2306283不同等位基因糖、脂代謝指標差值對比（（±s）

表2 基因rs2306283不同等位基因糖、脂代謝指標差值對比（（±s）

基因rs2306283指標FBG（mmol/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL－C（mmol/L）LDL－C（mmol/L）FINS（mU/L）HOMA－IR FINS（mU/L）HbA1C（% ）AA組1.43 ±1.37 0.59 ±1.21－0.01 ±0.76 0.07 ±0.44 0.08 ±0.79 2.00 ±1.02 3.59 ±1.50 0.73 ±0.41 1.32 ±1.24 AG組1.62 ±1.80 0.39 ±0.82 0.10 ±0.61 0.02 ±0.11 0.04 ±0.68 2.03 ±1.02 3.71 ±1.23 0.75 ±0.38 1.38 ±1.58 GG組1.70 ± 1.32 3.20 ± 2.93 0.93 ± 0.81 0.89 ± 0.79 2.08 ± 1.90 1.90 ± 1.05 4.02 ± 1.58 0.80 ± 0.44 1.53 ± 0.92 F值P值0.11 4.91 2.11 5.47 6.01 2.34 1.27 0.75 0.05 0.901 0.019*0.148 0.013*0.009*0.216 0.208 0.455 0.952

3 討論

藥物經血液循環進入人體肝臟，由Ⅰ相或Ⅱ相酶介導代謝產生氧化或結合性代謝產物排出體外，肝細胞攝取轉化體在這一過程中至關重要。目前，已知分布于肝細胞上的OATP1B1對多種藥物攝取作用明顯，其基因多態性可直接影響藥代動力學（簡稱藥動學）及藥物效應學，與藥物療效及藥品不良反應密切相關[4－5]。

OATP1B1也是瑞格列奈的主要轉運蛋白，其遺傳多態性可能也是造成瑞格列奈藥動學及療效差異的因素之一。SLCO1B1在亞洲人群中最常突變為c.388A＞G（rs2306283）和 c.521T ＞ C （rs41409056），中國健康人群的突變發生率分別為73.03%和6.25%[6]，與本研究結果相近。既往研究顯示，OATP1B1的以上2個位點突變對瑞格列奈的藥動學有顯著影響[7－8]。而c.388A＞G的突變與單劑量口服2 mg瑞格列奈的藥動學相關，可減少瑞格列奈藥物濃度－時間曲線下面積（AUC）并增加瑞格列奈的清除，但3種基因型對血糖濃度的影響無顯著差異[9－11]。本研究中，選取388A＞G及521T＞C 2個位點探討其與瑞格列奈藥物療效的相關性，但由于521T＞C位點不符合Hardy－Weinberg平衡定律，不具群體代表性，因此僅分析388A＞G基因型為AA，AG，GG 3組患者瑞格列奈藥物治療后的血糖相關指標改善程度。結果顯示，使用瑞格列奈藥物治療前后，AA組FBG 和 HbA1C均有顯著改善（P＜0.05），AG 組僅有HbA1C有顯著改善（P＜0.05），GG 組血糖等相關指標均無顯著改善（P＞0.05）。可見，AA組 FBG 及HbA1C改善最顯著，療效最好，GG組基本無改善，3組療效指標改善程度的趨勢可能在一定程度上印證了c.388A＞G的突變可減少瑞格列奈AUC并增加其清除這一結論導致的結果，同樣3組基因型間療效的比較發現，FBG等相關指標的改善程度在各組間無顯著差異（P＞0.05），這也和c.388A＞G的3種基因型對FBG濃度的影響無顯著差異這一結果基本一致。

OATP1B1c.388A ＞ G（rs2306283）和 c.521T ＞ C（rs41409056）的突變，對于主要通過肝臟HMG－CoA還原酶代謝的他汀類藥物有較大影響而被廣泛研究。多項研究顯示，c.521T＞C使血清中TC水平降低減少，從而降低他汀類藥物的調脂療效[12－13]，c.388A＞G可顯著降低血清中TC和LDL－C含量，提高他汀類藥物的調脂療效[14－15]。劉志軍等[16]通過對52例高血脂患者氟伐他汀群體藥動學特征的研究發現，OATP1B1 388A＞G，OATP1B1 521T＞C對氟伐他汀的 PPK參數有顯著影響，其中OATP1B1 388位點突變降低氟伐他汀清除率。本研究中發現，388A＞G位點AA，AG，GG 3組間比較，治療前后TG，HDL－C，LDL－C的降幅以 GG組最顯著，且優于其他2組（P＜0.05）。GG組血脂指標降低最顯著，這一結果排除了瑞格列奈本身對血脂的影響，同時也從另一側面反映c.388A＞G位點的突變可提高他汀類藥物療效的研究結果。本研究結果提示，對于388A＞G位點GG型患者，臨床應用他汀類調脂藥時可能選用小劑量，調脂效果良好，大劑量可能會增加不良反應的發生率。

綜上所述，OATP1B1 388位點變異可能與瑞格列奈藥物治療T2DM療效無相關性，影響瑞格列奈療效的因素具有復雜性，CYP2C8，CYP3A4，SLCO1B1 和 MDR1等與藥物代謝和轉運有關的基因多態性都可能間接影響瑞格列奈的療效，藥物治療的個體差異不能用單個SNP完全解釋，往往是多個遺傳因素的疊加表現。因此，后續需加大樣本量，采取多位點聯合研究結合多因素綜合分析的方法，進一步開展藥物療效與基因多態性的遺傳藥理學研究，可為臨床合理用藥提供新思路。