反相高效液相色譜法測定福多司坦片的含量*

易 紅 ，楊思蕓，王 鵬，崔健毓，袁浩宇

（1.核工業四一六醫院，四川 成都 610051； 2.四川省南充市中心醫院·川北醫學院第二臨床醫學院，四川 南充 637000）

福多司坦為黏液溶解劑，是具有司坦基本骨架的半胱氨酸衍生物，由日本三菱制藥和S.S制藥在20世紀80年代末研制出。其通過抑制氣管中杯狀細胞的過度形成和巖藻黏蛋白的產生，從而減少黏液分泌并降低痰液的黏性，還可以增加呼吸道黏膜的漿液分泌來稀釋痰液，并具有抗炎作用，適用于支氣管哮喘、慢性支氣管炎、支氣管擴張癥、肺結核、塵肺癥、肺氣腫、非典型分枝桿菌感染、彌漫性細支氣管炎等慢性呼吸系統疾病的祛痰[1]，臨床應用較廣泛。本研究中建立了測定福多司坦含量的反相高效液相色譜（RP－HPLC）法。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

2010C型高效液相色譜儀，LC－Solution型色譜工作站（日本島津公司）；PB－10型pH計，BS224S型電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 試藥

福多司坦對照品（含量為99.9%，上海江萊生物科

技有限公司）；福多司坦片（自制制劑，規格為每片0.2 g，

批號分別為 150301，150302，150303）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：大連依利特Hypersil BDS C18柱 （200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.02 mol/L 戊烷磺酸鈉溶液（磷酸調 pH 為 2.2 ±0.1）－乙腈（94∶6）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。理論板數按福多司坦峰計算不小于4 000，且和相鄰雜質峰的分離度大于或等于1.5。

2.2 溶液制備

供試品溶液：取福多司坦片10片，研細，稱取適量（約200 mg），精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液1 mL，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

對照品溶液：取福多司坦對照品20 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成1 mL含福多司坦0.2 mg的溶液。

空白輔料溶液：按處方比例稱取200 mg主藥對應的空白輔料，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.3 方法學考察

空白干擾試驗：將2.2項下3種溶液各吸取20 μL注入色譜儀，測定并記錄，結果見圖1。福多司坦的保留時間約為7.0 min，與其他雜質峰的分離度符合要求，空白流動相和輔料不干擾福多司坦的測定。

破壞性試驗：取3份福多司坦片，每份10片，研磨，取細粉，分別置100 mL容量瓶，待檢。1）酸解試驗，加0.1 mol/mL 鹽酸 10 mL，室溫放置 2 h后，用 0.1 mol/mL氫氧化鈉中和至中性；2）堿解試驗，加0.1 mol/mL氫氧化鈉10 mL，室溫放置2 h后，用0.1 mol/mL鹽酸中和至中性；3）氧化試驗，加30%H2O25 mL，室溫放置2 h；4）高溫試驗，取本品10片，在60℃下放置5 d；5）強光試驗，取本品10片，在強光[照射度為（4 500±500）lx]下照射5 d。隨后將分別處理后的樣品定容，并按2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定。色譜圖見圖2。

圖1 高效液相色譜圖

圖2 破壞性試驗色譜圖

線性關系考察：取福多司坦對照品50 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動相溶解并定容，作為貯備液。將貯備液制成質量濃度為 50.0，100.0，150.0，200.0，300.0 μg/mL 的溶液，分別注入色譜儀。以峰面積（A）對質量濃度（C，μg/mL）進行線性回歸，得線性回歸方程A=34 050C+5 247.2，r=0.999 9（n=5）。結果表明，福多司坦質量濃度在 50.0 ～300.0 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。按信噪比（S/N）為3和10，測得福多司坦的檢出限和定量限分別為0.2 μg/mL和 1 μg/mL。

精密度試驗：將同一對照品溶液注入色譜儀，結果峰面積的RSD為0.46%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為150301），按2.2項下方法平行制備供試品溶液6份，按外標法測定含量。結果福多司坦的平均百分含量為99.23%，RSD為0.62%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：于空白輔料中，按照處方量的80%，100%，120%加入對照品，用流動相稀釋制成低、中、高質量濃度（160.0，200.0，240.0 μg/mL）的溶液，每個質量濃度平行制備3份，照2.2項下方法分別精密吸取20 μL進樣，計算回收率。結果見表1。

表1 福多司坦加樣回收試驗結果（n=3）

穩定性試驗：將供試品（批號為150301）溶液置4℃進樣池中，分別于0～10 h每2 h分析1次。結果峰面積的RSD為 0.44% （n=5），表明在 10 h內 4℃環境中供試品溶液較穩定。

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入色譜儀，記錄峰面積，以外標法計算樣品中福多司坦的含量。結果3批樣品的標示百分含量分別為99.34% ，99.57%，100.01%。

3 討論

福多司坦不僅具有較好黏液溶解作用，還具有一定的抗炎作用，并同抗生素有一定協同作用，有利于疾病的治療[2－4]。

目前，測定福多司坦的方法主要有HPLC法[5－7]、熒光分光光度法[8]和液相色譜－質譜聯用（LC－MS/MS）法[9]，參考文獻[10－11]，建立了RP－HPLC法測定福多司坦片中福多司坦的含量。福多司坦為半胱氨酸衍生物，結構中無共軛體系。50.0 μg/mL的福多司坦對照品溶液在200～400 nm波長范圍內進行紫外掃描，圖譜中只有末端吸收，因而檢測波長選定為210 nm。

福多司坦結構中含有氨基和羧基2種官能團，極性較大，在C18柱中進行分析時保留時間很短，有學者直接以水為流動相[12－13]，考慮到對色譜柱的保護并參考文獻[11]，在流動相中加入離子對試劑戊烷磺酸鈉，調節流動相的pH，以增加福多司坦在C18柱上的吸附保留。當流動相為0.02 mol/L戊烷磺酸鈉溶液（磷酸調pH 為 2.2 ±0.1）－乙腈（94∶6）時，福多司坦的保留時間合適，對稱性和分離度均符合要求，因此確定為流動相。