血清腫瘤相關(guān)物質(zhì)（TAM）在急性白血病中的應(yīng)用研究

鐘巧玉，廖長(zhǎng)風(fēng)，李冬，劉禮平，魏美甜，張晶紅，徐燕，高鰲

（1.贛州市立醫(yī)院血液科，江西 贛州 341000；2.贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液科，江西 贛州 341000）

急性白血病（acute leukemia，AL）臨床表現(xiàn)為不同程度的貧血、出血、發(fā)熱及肝脾、淋巴結(jié)腫大、胸骨壓痛等征象，可危及生命。疾病預(yù)后的評(píng)價(jià)手段有年齡、白細(xì)胞總數(shù)、白血病細(xì)胞免疫表型的監(jiān)測(cè)、染色體分析、PCR檢測(cè)基因突變及特異性的標(biāo)志基因等。但由于60%以上AML患者無(wú)特異性分子生物學(xué)標(biāo)志，治療后無(wú)微小殘留病（MRD）的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，以致無(wú)法準(zhǔn)確判斷預(yù)后。因此，尋找判斷預(yù)后的敏感性指標(biāo)具有重要意義。有研究表明血液中的腫瘤相關(guān)物質(zhì)（TAM）水平伴隨著腫瘤的形成發(fā)展呈現(xiàn)正相關(guān)，在早期惡性腫瘤的形成、生長(zhǎng)時(shí)，在單核／巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞自身分泌的生長(zhǎng)因子刺激下毛細(xì)血管大量增生，導(dǎo)致血液中腫瘤相關(guān)物質(zhì)含量升高，其組成成分如唾液酸等糖胺類物質(zhì)，羥脯氨酸類物質(zhì)出現(xiàn)代謝紊亂，因此，腫瘤相關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)也成為對(duì)早期惡性腫瘤檢測(cè)的有效手段[1]。目前TAM在各種臟器惡性腫瘤如鼻咽癌、肺癌、原發(fā)性肝癌、食管癌、大腸癌、乳腺癌、口咽癌、胃癌、卵巢癌、腎上腺皮質(zhì)癌、骨腫瘤均有檢測(cè)研究報(bào)道[2]。在腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移時(shí)，血清唾液酸水平上升可出現(xiàn)在臨床診斷之前的數(shù)周，因此，對(duì)于惡性腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、及時(shí)治療有著重要的意義。急性白血病是血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。那么，在急性白血病中TAM是否也同樣有相似的意義呢？本研究旨檢測(cè)急性白血病中TAM的表達(dá)情況，以探討TAM的表達(dá)與急性白血病的的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年6月～2018年3月在贛州市立醫(yī)院和贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液科急性白血病患者320例，分為急性淋巴細(xì)胞白血病組和急性髓系細(xì)胞白血病組。其中急性淋巴細(xì)胞白血病160例，急性髓系細(xì)胞白血病160例，每組男性及女性各80例，年齡20～70歲，平均年齡（42.9±12.6）歲。兩組急性白血病患者在初診時(shí)及化療后達(dá)緩解時(shí)進(jìn)行TAM檢測(cè)，分為初診組和緩解組。緩解組指骨髓象原始細(xì)胞≤5%，伴血細(xì)胞完全或不完全恢復(fù)。選取160名健康體檢人員進(jìn)行對(duì)照比較，設(shè)為對(duì)照組，男80名，女80名，年齡段同急性白血病組，平均年齡（38.7±9.1）歲。3組研究資料在性別、年齡，一般等臨床資料上比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者之間有可比性。

1.2 方法 分別觀察兩組急性白血病患者初診時(shí)、化療達(dá)緩解后與對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)，包括各組白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白濃度、血小板計(jì)數(shù)以及各組Wilms腫瘤基因（Wilms'tumor gene,WT1）陽(yáng)性表達(dá)率、骨髓原始細(xì)胞比例與腫瘤相關(guān)物質(zhì)（TAM）水平，探討各項(xiàng)指標(biāo)之間的相關(guān)性。

TAM檢測(cè)主要儀器有：①GF-EⅡ型生化分析儀（山東高密彩虹分析儀器有限公司，可設(shè)定波長(zhǎng)450 nm）；②Thermo微量移液器（Finnpipette 20-200 μl）；③HH-W420數(shù)顯三用恒溫水箱（金壇市醫(yī)療儀器廠，100℃）；④湘儀TDZ5-WS離心機(jī)（湖南湘儀離心機(jī)公司）；⑤電子計(jì)時(shí)器（精確到秒）；TAM檢測(cè)主要試劑有：①腫瘤相關(guān)物質(zhì)（TAM）試劑盒（青島博新生物技術(shù)有限公司）；②標(biāo)準(zhǔn)品100 U/ml（青島博新生物技術(shù)有限公司）；③質(zhì)控品（青島博新生物技術(shù)有限公司)。TAM結(jié)果判定：將TAM檢測(cè)值≥95 U/ml判定為陽(yáng)性，＜95 U/ml判定為陰性。

WT1基因定量檢測(cè)主要儀器是ABI7500熒光PCR檢測(cè)儀，主要試劑是WT1基因定量監(jiān)測(cè)試劑盒（上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司）。WT1基因定量檢測(cè)結(jié)果判定：WT1/ABL1＞0.6%判定為陽(yáng)性，WT1/ABL1≤0.6%判定為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均選擇SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理計(jì)量資料均用±s表示。陽(yáng)性率用百分率（%）表示，不同組間陽(yáng)性率用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)各組血常規(guī)測(cè)定值比較 320例急性白血病患者初診時(shí)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍（8.69～308.98）×109/L，白細(xì)胞計(jì)數(shù)平均值（46.23±2.11)×109/L，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍（1.2～4.5）×1012/L，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)平均值(2.63±0.21)×1012/L，血紅蛋白濃度范圍42～113 g/L，血紅蛋白濃度平均值（75.52±5.87）g/L，血小板計(jì)數(shù)范圍（4～370）×109/L，血小板計(jì)數(shù)平均值（71.74±3.09）×109/L，化療后各組值與初診時(shí)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與正常體檢組比較，急性白血病患者化療后各血液檢測(cè)值均接近于正常體檢者值，見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)各組血常規(guī)測(cè)定值比較Table 1 Comparison of blood routine measurement values in each group

2.2 急性髓系白血病組腫瘤相關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果 初診時(shí)WT1/ABL1范圍0%～107.4%，WT1/ABL1平均值為（19.74±18.1）%，WT1陽(yáng)性表達(dá)率為92.5%，骨髓原始細(xì)胞范圍33%～97%，骨髓原始細(xì)胞平均值（66.97±35.25）%，TAM范圍（67.96～162.3）U/ml，TAM平均值（109.17±40.32）U/ml，TAM陽(yáng)性率66.25%。AML緩解組WT1/ABL1范圍0%～25.02%，WT1/ABL1平均值為（1.24±1.11）%，WT1陽(yáng)性表達(dá)率為31.25%，骨髓原始細(xì)胞范圍0%～4.5%，骨髓原始細(xì)胞平均值（1.69±1.52）%，TAM范圍（45.07～171.23）U/ml，TAM平均值（77.42±23.15）U/ml，TAM陽(yáng)性率5.625%。AML緩解組較初診組比較，WT1陽(yáng)性率和TAM陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩者有一致性，詳細(xì)結(jié)果見表2和表3。

表2 急性髓細(xì)胞白血病（AML）組WT1陽(yáng)性率結(jié)果Table 2 Results of WT1 positive rate inAML group

表3 急性髓細(xì)胞白血病(AML)組TAM陽(yáng)性率結(jié)果Table 3 Results of TAM positive rate inAML group

2.3 急性淋巴細(xì)胞白血病組腫瘤相關(guān)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果 初診時(shí)WT1/ABL1范圍0.00%～76.17%，WT1/ABL1平均值為（7.60±6.54）%，WT1陽(yáng)性表達(dá)率為52.5%，骨髓原始細(xì)胞范圍23%～99%，骨髓原始細(xì)胞平均值（82.54±15.32）%，TAM范圍（60.25±177.62）U/ml，TAM平均值（102.23±32.65）U/ml，TAM陽(yáng)性率46.25%。ALL緩解組WT1/ABL1范圍0%～25.02%，WT1/ABL1平均值為（1.24±1.12）%，WT1陽(yáng)性表達(dá)率為31.25%，骨髓原始細(xì)胞范圍0%～4.5%，骨髓原始細(xì)胞平均值（1.69±1.15）%，TAM范圍（45.07～171.23）U/ml，TAM平均值（77.42±25.45）U/ml，TAM陽(yáng)性率5.625%。ALL緩解組較初診前比較，WT1陽(yáng)性率和TAM陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩者有一致性，詳細(xì)結(jié)果見表4和表5。

表4 急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）組WT1陽(yáng)性率結(jié)果Table 4 Results of positive rate of WT1 in acute lymphocytic leukemia(ALL)group

表5 急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)組TAM陽(yáng)性率結(jié)果Table 5 Results of TAM positive rate in acute lymphocytic leukemia(ALL)group

3 討論

WT1是目前研究者廣泛研究的抑癌基因[3]，在正常人群中WT1極低表達(dá)或不表達(dá)[4]。大量的研究表明，WT1在功能上能夠控制血細(xì)胞增殖以及分化。WT1蛋白表達(dá)值同樣反映出白血病的發(fā)生、發(fā)展以及治療的效果[5-6]。在初診過(guò)程中，WT1的表達(dá)往往處于較高的表達(dá)水平，從研究資料中顯示，在急性髓系白血病（AML）以及急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）中，WT1陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)90%以及50%以上，經(jīng)過(guò)化療后，普遍下降30%以上。本研究中，AML緩解組WT1陽(yáng)性率31.25%較初診組WT1陽(yáng)性率92.5%明顯下降，見表2，與多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]。本研究中，ALL緩解組WT1陽(yáng)性率21.875%較初診組WT1陽(yáng)性率52.5%亦有明顯下降，見表4。因此，WT1表達(dá)水平可以作為白血病尤其是AML的微小殘留病灶（MRD）監(jiān)測(cè)的指標(biāo)之一，特別是在沒(méi)有特異性分子學(xué)標(biāo)志的AML患者中。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)WT1表達(dá)水平對(duì)于評(píng)估白血病預(yù)后有重要的臨床價(jià)值。

TAM在急性白血病中的應(yīng)用目前處于較落后狀態(tài)，如何聯(lián)合各血液指標(biāo)在白血病前期判斷白血病早期發(fā)生、發(fā)展，一直受研究者的關(guān)注[8]。從研究資料顯示，TAM在急性白血病患者初診時(shí)、化療后檢測(cè)中有重要意義。TAM陽(yáng)性率在兩類急性白血病的表達(dá)顯示較高水平，在化療后，TAM表達(dá)結(jié)果陽(yáng)性表達(dá)率均明顯下降[9]。3組實(shí)驗(yàn)研究中，AML緩解組TAM陽(yáng)性率5.625%較初診組TAM陽(yáng)性率66.25%明顯下降，見表3；ALL緩解組TAM陽(yáng)性率8.75%較初診組TAM陽(yáng)性率46.25%明顯下降，見表5。

從上述結(jié)果中，我們發(fā)現(xiàn)，在AML和ALL中，TAM表達(dá)水平、陽(yáng)性率在初診組、緩解組和WT1表達(dá)水平、陽(yáng)性率具有相當(dāng)?shù)囊恢滦浴Ｒ虼耍籽≡缙诎准?xì)胞異常變化時(shí)，血紅蛋白出現(xiàn)異常偏低時(shí)，血小板異常減少時(shí)[10]，可通過(guò)血清腫瘤相關(guān)物質(zhì)（TAM）檢測(cè)進(jìn)一步初篩，同時(shí)，進(jìn)一步檢測(cè)WT1表達(dá)和其他骨髓相關(guān)檢查進(jìn)一步明確診斷[11]。同時(shí)在化療后，繼續(xù)監(jiān)測(cè)血細(xì)胞分析、TAM、WT1和其他相關(guān)指標(biāo)[12]。TAM可以與WT1檢測(cè)、血細(xì)胞分析、骨髓原始細(xì)胞比例等一起作為監(jiān)測(cè)急性白血病療效判斷、監(jiān)測(cè)病情復(fù)發(fā)的指標(biāo)。因目前TAM檢測(cè)時(shí)間以及納入此次討論的患者數(shù)量、隨訪時(shí)間尚不足，期待繼續(xù)加大觀察樣本量以及延長(zhǎng)患者隨訪時(shí)間以繼續(xù)觀察、總結(jié)[13-14]。