血清8-羥基脫氧鳥苷水平對川崎病冠狀動脈損傷的預測價值

許海棠 榮星 何躍娥 仇慧仙 張松躍 任躍 褚茂平 吳蓉洲

川崎病是一種病理改變特點為全身性中小血管炎的疾病，并可累及冠狀動脈，主要發生在5歲以下兒童。目前川崎病分布于全球，其中以亞裔患兒最為常見[1-2]。然而，關于川崎病的發病機制至今尚未闡明，也無冠狀動脈損傷的預測指標。8-羥基脫氧鳥苷（8-OHDG）是一種新型氧化應激反應的生物標志物，常用于心血管疾病的檢測。本文收集60例川崎病患兒的臨床資料，以探討其血清8-OHDG水平對川崎病冠狀動脈損傷的預測價值。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2016年1至8月本院收治的60例川崎病患兒為研究對象，其中男44例，女16例；發病年齡3個月～9歲；發病第2周冠狀動脈超聲檢查提示冠狀動脈損傷17例，冠狀動脈正常43例；均符合川崎病的診斷標準。所有患兒發熱第6～10天給予丙種球蛋白針2g·kg-1·d-1沖擊治療；確診后給予阿司匹林腸溶片30～50mg·kg-1·d-1口服治療，待體溫正常3d后減量至3～5mg·kg-1·d-1；冠狀動脈正常者予以阿司匹林維持口服2～3個月，冠狀動脈損傷者予以阿司匹林片持續服用直至冠狀動脈恢復正常。選取同期住院且年齡匹配的20例發熱（發熱時間5～10d）患兒，其中上呼吸道感染6例，肺炎6例，急性支氣管炎2例，敗血癥4例，手足口病2例。選取年齡匹配的20例健康兒童進行對照。所有血清標本的采集，家屬均知情同意。

1.2 方法 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測3組兒童血清8-OHDG水平，川崎病患兒包括急性期及恢復期（發病后3～4周）。采集3ml空腹靜脈血，2%乙二胺四乙酸鈉抗凝，常規分離血清，-70℃凍存待用。試劑盒購自中國上海西唐生物科技有限公司（規格96T，批號589320-96S）。并檢測川崎病患兒C反應蛋白、WBC、中性粒細胞比值、AST、白蛋白、腦鈉肽等指標。

1.3 統計學處理 應用SPSS 17.0統計軟件。計量資料用表示，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗。采用多因素logistic回歸分析川崎病患兒發生冠狀動脈損傷的危險因素；繪制ROC曲線分析血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動脈損傷的效能；利用Pearson相關分析血清8-OHDG與C反應蛋白的相關性。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組兒童血清8-OHDG水平比較 川崎病患兒急性期血清8-OHDG水平為（57.99±29.24）pg/ml，明顯高于恢復期的（33.36±19.94）pg/ml（P＜0.05）；亦明顯高于發熱患兒的（41.85±20.00）pg/ml、健康兒童的（23.42±12.71）pg/ml（均P＜0.05）。川崎病患兒恢復期血清8-OHDG水平與發熱患兒、健康兒童比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）；而發熱患兒血清8-OHDG水平較健康兒童明顯上升，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 川崎病患兒血清8-OHDG水平與冠狀動脈損傷的關系 川崎病急性期冠狀動脈損傷患兒血清8-OHDG水平為（70.33±28.78）pg/ml，明顯高于冠狀動脈正常患兒的（53.63±28.42）pg/ml，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 川崎病患兒發生冠狀動脈損傷影響因素分析 經單因素分析，發現川崎病患兒血清C反應蛋白、WBC、中性粒細胞比值、AST、白蛋白、腦鈉肽、8-OHDG水平均與冠狀動脈損傷有關（均P＜0.05），見表1。將以上7個變量納入多因素logistic回歸分析，結果發現血清WBC（OR=1.472，95%CI：1.023～2.118，P＜0.05）、C 反應蛋白（OR=1.080，95%CI：1.014～1.149，P＜0.05）、8-OHDG（OR=1.534，95%CI：1.016～2.717，P＜0.05）均是川崎病患兒發生冠狀動脈損傷的影響因素。

表1 影響川崎病患兒發生冠狀動脈損傷的單因素分析

2.4 血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動脈損傷的效能分析 血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動脈損傷的截斷值為35.40pg/ml，靈敏度為0.82，特異度為0.58，AUC為0.763，ROC曲線見圖1。

2.5 川崎病患兒血清8-OHDG與C反應蛋白的相關性分析 川崎病患兒血清8-OHDG與C反應蛋白呈正相關（r=0.507，P＜0.05）。

圖1 川崎病患兒冠狀動脈損傷血清8-OHDG診斷的ROC曲線

3 討論

川崎病是一種以彌漫性、全身性血管炎為主要病變的急性發熱出疹性小兒疾病，主要發生在5歲以下嬰幼兒。目前認為川崎病是一種免疫介導的血管炎，屬于自身免疫性疾病。冠狀動脈損傷是川崎病常見且很難處理的一種并發癥，嚴重影響患者預后，目前尚無相關預測指標。近年來報道川崎病發病機制的相關研究包括遺傳學說、感染學說、超抗原學說、免疫細胞異常活化學說、細胞因子及炎癥介質學說、血管內皮功能紊亂學說、基質金屬蛋白酶9學說[3-4]。目前有學者發現氧化應激伴隨炎癥反應參與川崎病發生、發展[5-7]。8-OHDG是目前國際上公認的一種評價DNA氧化損傷和氧化應激狀態的新型敏感指標[8]。它在活性氧簇（ROS）引起DNA氧化損傷修飾過程中產生，表現為人體細胞受外源性物質刺激產生過量的ROS，ROS準確地攻擊DNA中的鳥嘌呤（dG），使得脫氧鳥苷氧化為8-OHDG，在特異性DNA修復酶作用下，8-OHDG被剪切清除，經腎臟以原型排出。筆者前期小樣本研究發現川崎病患兒急性期血清8-OHDG水平較其恢復期、發熱患兒、健康兒童均明顯升高，從而推測氧化應激可能參與川崎病的發病機制[9]；但是關于血清8-OHDG水平對川崎病冠狀動脈損傷的預測價值尚不清楚。

本研究加大樣本量，對60例川崎病患兒的臨床資料進行分析。結果發現川崎病患兒的急性期血清8-OHDG水平明顯高于發熱患兒及健康兒童，再次證實氧化應激可能參與川崎病的發病機制。經多因素logistic回歸分析，發現血清WBC、C反應蛋白、8-OHDG水平均是川崎病患兒發生冠狀動脈損傷的影響因素。Kobayashi等[10]研究認為C反應蛋白較高者冠狀動脈瘤發生率明顯升高，且川崎病復發率與C反應蛋白呈正相關。Mori等[11]研究表明C反應蛋白是川崎病合并巨大冠狀動脈瘤的危險因素。亦有研究表明經過靜脈丙種球蛋白治療后，C反應蛋白仍較高的患兒易合并冠狀動脈損傷[12]。Kobayashi等[10]研究認為C反應蛋白是川崎病患兒發生冠狀動脈瘤的獨立危險因素。川崎病急性期炎癥反應劇烈，WBC升高且與血管炎癥反應程度呈正相關。Zhang等[13]研究發現川崎病合并冠狀動脈病變的患兒WBC明顯高于無冠狀動脈病變者。江瑩子等[14]研究證實WBC、C反應蛋白是川崎病發生冠狀動脈損傷的獨立危險因素。本研究結果發現血清8-OHDG水平診斷川崎病冠狀動脈損傷的截斷值為35.40pg/ml，靈敏度為0.82，特異度為0.58，AUC為0.763；指出血清8-OHG水平也能預測川崎病合并冠狀動脈損傷。筆者認為炎癥反應和氧化應激反應在川崎病血管炎發病過程中可能起如下作用：受炎癥刺激物作用，內皮細胞受損從而引發炎癥反應；TNF-α誘導血管內皮細胞表達黏附分子，促進炎癥細胞向炎癥部位遷移；炎癥細胞釋放炎癥介質及細胞因子，刺激肝臟產生C反應蛋白；炎癥因子促使炎癥細胞中的NAD（P）H氧化酶活化，導致快速產生大量ROS。此外，炎癥因子誘導巨噬細胞和血管內皮細胞產生和釋放NO，而NO是一種不穩定自由基，易變為過氧亞硝酸鹽；而過氧亞硝酸鹽非常敏感，其強氧化活性能直接使血管組織失活。NAD（P）H氧化酶在內皮細胞膜上與黃嘌呤氧化酶系統反應并引起花生四烯酸級聯反應，產生促炎物質如白三烯并產生ROS[15]。在炎癥反應過程中產生的氧自由基，能使體內氧化反應增強，同時進一步加強氧化及炎癥間的連鎖反應。可見，川崎病的發生與發展是炎癥和氧化應激共同作用的結果。

綜上所述，血清8-OHDG水平是川崎病患兒發生冠狀動脈損傷的獨立危險因素，可作為早期預測川崎病冠狀動脈損傷的標志物。