胰腺導管腺癌中真核翻譯起始因子5A2和基質金屬蛋白酶-10、-11的表達

呂榮華 關 巍 李 肅 侯 明

(青海大學附屬醫院急救中心，青海 西寧 810001)

胰腺導管腺癌在中老年人中常見，也是胰腺中最常見的惡性腫瘤，來源于胰導管上皮，部分病例可以產生黏液。病變形成時與機體中相關蛋白表達失調有關，尤其是胰腺癌進展時轉移相關蛋白表達明顯異常。真核翻譯起始因子(EIF)5A2是在細胞惡性表型轉化過程中起重要促進作用的因子，其常作為上游基因參與腫瘤轉移和增殖〔1,2〕。基質金屬蛋白酶(MMP)-10和MMP-11是MMPs家族中的重要成員，其可以有效降解細胞外基底膜和細胞外基質成分，為腫瘤細胞的播散提供直捷通路，使細胞易于遷移〔3,4〕。本實驗對胰腺導管腺癌中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的表達進行檢測，分析其相關性及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 青海大學附屬醫院2014年1月至2017年12月行手術治療，并經病理醫師確診的胰腺導管腺癌53例為觀察組，年齡55～87歲，平均(67.6±11.5)歲，其中男28例，女25例。納入標準：①符合WHO中胰腺導管腺癌的病理診斷標準；②未進行放、化療；③無其他器官惡性腫瘤。選擇15例距腫物邊緣大于2 cm的非腫瘤性胰腺(正常胰腺)組織為對照組，年齡58～82歲，平均(68.9±10.8)歲。

1.2EIF5A2、MMP-10和MMP-11檢測方法 EIF5A2、MMP-10和MMP-11均為濃縮液，按不同比例進行稀釋后，先進行預實驗觀察，選擇最理想的濃度用于正式實驗，即EIF5A2(1∶100)、MMP-10(1∶150)和MMP-11(1∶150)。EIF5A2、MMP-10和MMP-11的檢測均基于石蠟包埋的切片，應用免疫組化二步法，二氨基聯苯胺(DAB)顯色。嚴格按步驟進行，均由同一人員操作，設陽性對照，做好質控工作。

1.3EIF5A2、MMP-10和MMP-11結果判讀 EIF5A2、MMP-10和MMP-11的陽性部位是細胞質，以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性，著色強度：無著色為0分；弱著色為1分，中等程度著色為2分，強著色為3分。選擇上皮細胞分布區且染色較為明顯的區域進行計數，共選擇4個視野，取平均值，以<5%為0分，≥5%且<10%為1分，≥10%且<30%為2分，≥30%且<50%為3分，≥50%為4分。按著色強度和陽性率的評分之和進行評定。以≤3分為陰性，以>3分為陽性。

1.4統計學方法 應用SAS6.12統計軟件進行χ2檢驗或線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的比較 兩組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組EIF5A2、MMP-10和MMP-11陽性表達的比較〔n(%)〕

2.2EIF5A2、MMP-10和MMP-11在觀察組不同臨床特征中的表達 觀察組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的表達與Ki67指數和脈管累犯相關，EIF5A2的表達與神經侵犯密切相關，MMP-10和MMP-11的表達與淋巴結轉移相關。三者均與性別、年齡、分化程度及炎細胞浸潤程度無關。見表2。

表2 EIF5A2、MMP-10和MMP-11在觀察組不同臨床特征中的表達〔n(%)〕

2.3觀察組中EIF5A2、MMP-10和MMP-11的相關性 EIF5A2和MMP-10(r=0.41，P=0.046 9)、EIF5A2和MMP-11呈正相關(r=0.43，P=0.035 6)。

3 討 論

胰腺導管腺癌在胰腺癌中占據很大比例，腫瘤體積變化較大，病變為邊界不清的質硬腫塊，切面黃白色或白色，出血和壞死較為少見〔5〕。組織病理學上大多數呈現高分化，表現為較良好的腺體，與正常胰管不同程度地相似，間質纖維化明顯。中分化腫瘤的異型性差異較大，部分患者伴有混合性分化，低分化的腫瘤主要由排列密集的小腺體取代腺泡組織，細胞核大，染色深，間質可見壞死和出血〔6〕。腫瘤細胞多形性明顯，病變進展與蛋白異常表達有關。EIF5A2是生物體的一種保守蛋白，唯一包含賴氨酸殘基的蛋白。研究表明EIF5A2與腫瘤的生物學行為相關〔7,8〕。但是EIF5A2的表達常不穩定，且在不同腫瘤的表達可能不同，即有腫瘤細胞的特異性特征〔9〕。研究認為EIF5A2受翻譯后其修飾的分子質量大小可能有一定變化。其對胰腺癌的調控更多的是通過偽足富集的非典型激酶(PEAK)1實現的，并使黏附、細胞運動、細胞增殖及上皮間質轉化發生明顯改變〔10〕。EIF5A2在上皮間質轉化中也有作用，主要與上皮間質轉化時RhoA和Rac1的活化有關，并影響細胞骨架重構，加速腫瘤細胞遷移〔11〕。EIF5A2可能通過激活MMPs起作用。有研究認為消除內源性EIF5A2并通過減少MMP-2的表達來抑制腫瘤血管生成，因此EIF5A2與MMPs家族相關成員間可能具有一定的協同作用。EIF5A2的作用可能具有多樣性，其在不同病變中可以表現出對血管生成的促進或抑制作用〔12〕。MMP-10和MMP-11是MMPs家族中的重要成員，是重要的基質水解酶，二者對降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原蛋白、纖維連接蛋白和層黏連蛋白作用最強，其還可以促進生長因子的分泌，調節腫瘤細胞黏附作用，并多途徑參與腫瘤侵襲和轉移〔13,14〕。

本實驗結果提示EIF5A2、MMP-10和MMP-11三者可以促進腫瘤細胞的生成，即在癌變中起一定的作用。本文結果提示EIF5A2、MMP-10和MMP-11均參與腫瘤的增生繁殖和脈管浸潤的過程，使腫瘤細胞的繁殖能力增高，細胞生長活躍，腫瘤實質明顯增多，失控性增生明顯增強，同時對間質中新生成的脈管具有明顯的侵襲作用〔15,16〕。本文結果提示EIF5A2可能與腫瘤細胞神經細胞黏附作用相關，即EIF5A2在調節黏附性過程中，對神經細胞黏附起主要作用，而胰腺導管腺癌為嗜神經細胞生長的腫瘤，腫瘤細胞的增生中，EIF5A2對表皮生長因子(EGF)和轉化生長因子(TGF)等生長因子進行正向調節，神經侵襲能力也明顯增強。本文結果提示MMP-10和MMP-11二者與腫瘤細胞的淋巴道播散密切相關。雖然胰腺導管腺癌中可以觀察到明顯的炎細胞浸潤，尤其是低分化的腫瘤中，但是本研究未發現三者與腫瘤間質炎細胞浸潤的相關性，因此認為三者與炎性反應無明顯關聯性。本文提示EIF5A2和MMP-10、EIF5A2和MMP-11具有協同作用，也提示EIF5A2在腫瘤中分泌增多，可以調節MMP-10和MMP-11的表達，使腫瘤細胞中的表達升高進而調節腫瘤細胞的遷移。EIF5A2對微管蛋白組裝過程可能具有一定的作用，調節腫瘤細胞的穩定。此種作用的機制與EIF5A2具有核苷二磷酸激酶的特征有關，微管蛋白上的GDP轉化為GTP后使微管發生變化，微管的聚合程度不足，細胞也不能形成正常的形態，對誘發轉移有一定作用。EIF5A2在高表達時可以直接或間接引起細胞外基質蛋白酶的升高，對細胞外基質和基底膜屏障形成明顯破壞，腫瘤細胞易于離開原發部位，突破基底膜并形成轉移〔17〕。但是EIF5A2與MMP-10、MMP-11協同作用的關系尚不清楚，有待更多實驗證實。