侵襲性骨腫瘤組織中P53、P21、Bcl-2的表達

董孝龍

(商丘市第四人民醫院骨科，河南 商丘 476005)

侵襲性骨腫瘤有骨巨細胞瘤、動脈瘤樣骨囊腫、成軟骨細胞及骨細胞瘤等。侵襲性骨腫瘤細胞凋亡及P53、P21、B細胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)的表達關系是目前基因研究的熱點問題。本文選取我院2014年1月至2017年1月收治的侵襲性骨腫瘤患者62例，對其腫瘤組織凋亡情況及P53、P21、Bcl-2表達進行檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性分析我院2014年1月至2017年1月收治的62例侵襲性骨腫瘤患者臨床資料，其中男37例，女25例；年齡18～52(45.47±1.47)歲；骨肉瘤21例，骨巨細胞瘤25例，軟骨肉瘤3例，軟骨母肉瘤4例，骨母細胞瘤5例，尤文肉瘤4例，其中骨巨細胞瘤、軟骨母肉瘤、骨母細胞瘤為良性骨腫瘤，骨肉瘤、軟骨肉瘤、尤文肉瘤為惡性骨腫瘤。納入標準：1)病理確診的患者；2)病情穩定的患者；3)知情同意的患者。排除標準：1)合并其他惡性腫瘤的患者；2)白血病患者；3)合并傳染病患者。

1.2檢測方法手術切除腫瘤組織，所得組織經質量分數10%中性甲醛溶液常規固定，骨標本固定經體積分數5%硝酸溶液脫鈣處理，然后進行常規脫水、透明、石蠟包埋，連續切片(常規厚度)，分別進行免疫組化染色和凋亡檢測。石蠟切片的制作需嚴格按照實驗要求進行。蛋白抗體、免疫組化試劑盒及細胞凋亡試劑盒均購自上海賽默飛生物科技有限公司。

細胞凋亡的檢測：檢測程序需嚴格按照試劑盒說明書進行，原位DNA斷裂位點的3’-羥基末端標記法。DAB顯色，使用蘇木素液輕度染色，脫水，并應用二甲苯透明，封固切片，使用已知陽性組織切片作為陽性對照。

P53、P21、Bcl-2檢測：切片用60 ℃連續燒烤3 h，SABC法免疫組化染色，使用蘇木素液輕度復染，脫水，二甲苯透明處理，封固切片，將已知陽性的組織切片作為陽性對照。三者均以出現黃色或棕黃色染色顆粒為陽性標準。

2 結果

2.1良惡性骨腫瘤細胞P53、P21和Bcl-2蛋白的表達P21陽性著色部位在細胞核，P53、Bcl-2陽性著色部位主要在細胞核及細胞質內，未見其他部位著色。良性骨腫瘤的細胞凋亡率(76.31%)高于惡性骨腫瘤(53.28%)，差異有統計學意義(P<0.05)。良性骨腫瘤組織中P53、P21、Bcl-2陽性表達表達率分別為66.51%、45.58%、0.00%，低于惡性骨腫瘤的79.54%、72.89%、22.56%，差異均有統計學意義(P均<0.05)。

2.2惡性骨腫瘤組織中P53、P21和Bcl-2蛋白表達與各臨床病理特征關系的COX比例風險模型分析結果COX比例風險模型分析顯示惡性骨腫瘤組織中P53、P21和Bcl-2蛋白表達與年齡、類型、病程、侵襲程度有關(P均<0.05)。見表1。

表1 惡性骨腫瘤組織中Bcl-2蛋白表達與各臨床病理特征關系的COX比例風險模型分析結果

3 討論

骨巨細胞瘤是最常見的原發性骨腫瘤之一，其發生率占全部骨腫瘤的20%[1]，中國人發生率是歐美地區人群的3倍[2]。該腫瘤介于良惡性之間，但局部侵襲性強,主要表現為溶骨性病變,部分良性骨巨細胞瘤可發生遠處轉移，具有潛在惡性，常規手術治療復發率高。骨巨細胞瘤的病理學特征是破骨細胞樣多核巨細胞和單核基質細胞并存。由于破骨細胞樣多核巨細胞是骨巨細胞瘤的重要組成部分。因而很多學者認為，多核巨細胞是骨巨細胞瘤骨吸收的原因，然而在病理分級中，Ⅰ級骨巨細胞瘤組織中的多核巨細胞數量多于Ⅲ級，但局部溶骨性改變比Ⅰ級嚴重，因此，骨巨細胞瘤的溶骨性并非單一多核巨細胞作用所致，可能是多種細胞成分參與的結果[3]。近年來研究[4]表明，腫瘤的發生及生物學特性與細胞凋亡有密切關系。骨細胞凋亡是惡性腫瘤普遍自發現象。目前已清楚P21蛋白與細胞信息傳遞有關，是癌基因突變后編碼的突變，P21蛋白可使得信號系統開展，持續不斷傳導生長信號，導致細胞生長紊亂及腫瘤的發生，但當前相關報道較少。有研究[5]報道認為，部分骨腫瘤組織存在Ras癌基因的異常表達，84%的骨肉瘤的陽性率較高。C-myc蛋白過度表達，可能單獨或與因子協同引起細胞惡性轉化。良性骨腫瘤患者中未見C-myc表達。本文研究結果顯示，惡性骨腫瘤的總細胞凋亡率低于良性骨腫瘤，表明惡性腫瘤惡性程度較高。葉彬等[6]研究神經母細胞瘤椎管內細胞凋亡發生，細胞凋亡多者預后較好。檢測膀胱癌及乳腺癌組織中的細胞凋亡指數，發現凋亡指數高者預后較差，凋亡指數及增殖指標之間呈正相關。目前，臨床只能檢測一定時刻的細胞凋亡發生情況，不能連續檢測，且重復檢測費用較高，耗資較大，基層醫院或地方醫院現無此研究條件。P53突變蛋白能促進細胞惡性轉化，獲得癌基因功能。王玉峰等[7]研究發現，P53基因異常與其蛋白高表達有關，P53蛋白隨著腫瘤進程的發展而增加。P21多發生在惡性腫瘤組織中，P21基因高表達。腫瘤細胞增殖活性受組織中P21表達影響。惡性骨腫瘤組織是一種生長旺盛的增殖組織，Bcl-2陽性表達是一種良惡性鑒別輔助指標。

本文研究結果顯示，P53、P21在惡性骨腫瘤組織中高表達，且細胞凋亡率降低，提示惡性骨腫瘤細胞快速增殖，細胞凋亡率較低，表明惡性骨腫瘤細胞在快速增殖的同時也有部分細胞在趨于凋亡；本研究只在惡性骨腫瘤中檢測到Bcl-2的表達，驗證了其是一種良惡性鑒別輔助指標。腫瘤細胞凋亡與增殖是一個不斷變化的過程，兩者之間的平衡受內外因素共同影響，目前還沒有一種確切技術能準確預估細胞增殖與凋亡，無特定儀器對P53、P21、Bcl-2及凋亡指數進行追蹤及檢測。Kim等[8]研究認為，P53、P21、Bcl-2等3種基因蛋白表達不均衡，這主要與腫瘤細胞的自身特性有關。COX比例風險模型分析顯示惡性骨腫瘤組織中P53、P21和Bcl-2蛋白表達與年齡、類型、病程、侵襲程度有關，年齡越大、惡性程度越高、病程越長、侵襲程度越大，其P53、P21、Bcl-2表達越高。

綜上所述，P53、P21、Bcl-2在侵襲性骨腫瘤中異常表達，且三者在良性骨腫瘤組織中的表達顯著低于惡性骨腫瘤。惡性骨腫瘤組織中P53、P21、Bcl-2的表達水平與年齡、類型、病程、侵襲程度有關，這說明這些指標與侵襲性骨腫瘤的發生、發展有密切關系。