血清淀粉樣蛋白A及CD64在新生兒敗血癥診斷中的價值

危夷　嚴爭　林福忠

【摘要】 目的：研究血清淀粉樣蛋白A（SAA）及中性粒細胞CD64早期臨床診斷新生兒敗血癥及療效評價的意義。方法：選擇福建醫科大學附屬福州市第一醫院2016年3月-2017年9月收治的新生兒敗血癥患兒56例為觀察組，選擇同期非感染新生兒42例為對照組。采用膠體金法和流式細胞分析術分別檢測SAA和CD64，觀察這兩項指標對于新生兒敗血癥診斷的特異性、敏感性、陰性、陽性預測值及約登指數。結果：觀察組治療前SAA、CD64值明顯升高，與治療后、對照組比較，差異均有統計學意義（P<0.05），聯合早期診斷新生兒敗血癥優于單個指標獨立診斷。結論：SAA和CD64聯合測定在新生兒敗血癥早期診斷具有較高的敏感性及特異性，同時有助于判斷療效及預后。

【關鍵詞】 新生兒敗血癥； 血清淀粉樣蛋白A； 中性粒細胞CD64

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.23.020 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2018）23-00-03

【Abstract】 Objective：To evaluate the therapeutic effects of serum amyloid A（SAA） and neutrophil CD64 in early diagnosis of neonatal sepsis.

Method：Fifty-six cases of neonatal sepsis admitted to the Fuzhou First Hospital Affiliated to Fujian Medical University from March 2016 to September 2017 were selected as the observation group，and 42 non-infected neonates were selected as the control group.The DIGFA method and flow cytometry（FACS） were used to detect levels of SAA and CD64，respectively.The specificity，sensitivity，negative，positive predictive value，and the Youden index in both groups were compared.Result：Before treatment，SAA and CD64 levels in the observation group were significantly increased compared with the control group，and the differences were statistically significant（P<0.05）.It is believed that the early diagnosis of neonatal sepsis with multiple indicators was better than that of single indicator.Conclusion：The combined determination of SAA and CD64 levels has higher sensitivity and specificity in the early diagnosis of neonatal sepsis，which is helpful to evaluate the efficacy and prognosis.

【Key words】 Neonatal sepsis； Serum amyloid A； Neutrophil CD64

First-authors address：Fuzhou First Hospital Affiliated to Fujian Medical University，Fuzhou 350009，China

新生兒敗血癥是發生于新生兒期的嚴重全身感染性疾病，是指病原體（主要是細菌，也可為病毒、真菌等）侵入新生兒血液循環，并且在其中生長、繁殖、產生毒素引起全身炎癥反應綜合征[1]。新生兒敗血癥早期癥狀不典型，診斷困難，但該病進展迅速，病情險惡。血培養是目前診斷新生兒敗血癥的金標準，但血培養周期長、陽性率低。SAA是一種急性時相反應蛋白，CD64是一類中性粒細胞表面標記物[2]，在新生兒感染性疾病早期即可明顯升高。本文通過觀察新生兒敗血癥患兒血中SAA與CD64治療前后動態變化，并與非感染新生兒進行對比，探討其在早期診斷、療效判斷中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇福建醫科大學附屬福州市第一醫院2016年3月-2017年9月確診為新生兒敗血癥的56例患兒為陽性觀察組，臨床診斷標準參照2011年《實用新生兒學（第4版）》[3]；觀察組中男27例、女29例，胎齡35～41周，日齡1～6 d。對照組42例，為同期出生的非感染新生兒（病種包括：濕肺11例、新生兒出血癥9例、糖尿病母親的嬰兒13例、新生兒低血糖癥9例），對照組中男21例、女21例，胎齡36～40周，日齡1～5 d。兩組均排除了先天性心臟病、消化道畸形、嚴重肝腎疾病及遺傳與代謝性疾病，同時兩組患兒的胎齡、日齡、性別等基本資料差異無統計學意義（P>0.05）。本研究所有新生兒采血檢測均獲家長知情同意，并經過醫院倫理委員會審查批準。

1.2 方法

觀察組及對照組新生兒均在入院當日未使用任何藥物治療前抽取靜脈血進行SAA、CD64檢測，觀察組于抗生素（頭孢類、碳青霉烯類等）及對癥治療5 d后復查。SAA采用膠體金法進行測定（儀器及試劑盒購自上海市奧普生物醫藥有限公司），陽性診斷閾值為10 mg/L。流式細胞術檢測全血CD64，采用Coulter Immunotech公司生產的異硫氰酸熒光素標記的CD64單克隆抗體，每個樣本檢測104個細胞，經計算機分析后得出每個樣本CD64的平均熒光強度（mean fluorescence intensity，MFI），陽性診斷閾值為35 MFI。所采用的陽性診斷閾值為臨床常用診斷標準。

1.3 觀察指標

觀察新生兒敗血癥組患兒治療前后SAA、CD64動態變化，并與對照組比較。根據陽性診斷閾值，計算各組SAA、CD64檢測的敏感性、特異性、陽性預測值及陰性預測值，再計算約登指數（約登指數=敏感性+特異性-1）。

1.4 統計學處理

采用SPSS 13.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用獨立樣本t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清SAA、CD64水平

觀察組新生兒外周血中SAA、CD64含量明顯高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）；經治療，觀察組恢復期SAA、CD64明顯下降，與對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 SAA、CD64診斷價值

SAA、CD64聯合檢測對敗血癥的診斷效能優于單獨檢測，診斷指標的敏感性、特異性、陽性、陰性預測值及約登指數，見表2。

3 討論

新生兒敗血癥是新生兒時期的危重癥，出生體重越低，敗血癥發病率越高。臨床表現為反應差、少吃少哭、體溫不升或發熱等癥狀，早期癥狀常不典型，缺乏特異性，容易漏診；新生兒的免疫系統尚未完全發育，特異性免疫及非特異性免疫功能低下，對感染的局限能力差，如診療不及時，可引起休克、化膿性腦膜炎等并發癥，是引起新生兒死亡的重要原因之一。目前通常采用血培養的方法對新生兒敗血癥進行確診，但血培養周期長、一般需要5～7 d才能出結果，采血量大、陽性率低，且易受抗菌藥物等因素影響，不能達到早期診斷的目的。尋找快速而可靠的炎癥反應標記物，不僅有助于新生兒敗血癥早期臨床診斷、改善預后及降低敗血癥死亡率，而且可以幫助指導醫師調整治療方案。

SAA是一類多基因編碼的多形態蛋白家族，分子量12～14 KDa，

基因位于第11號染色體上，與C反應蛋白（CRP）一樣，同屬于急性時相反應蛋白。在生理情況下，血液中的濃度極低，1～5 mg/L；當機體發生急性炎癥、感染時，受白細胞介素-1、白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥介質的調控，由肝臟的巨噬細胞和纖維母細胞短時間大量分泌，故血液中的SAA含量迅速上升，通常在5～6 h可達最高值，為正常值的1 000倍以上[4]，其升高程度與病情嚴重程度呈正相關。與CRP白相比較，SAA在病毒和細菌感染中均明顯升高，而在病毒感染時，CRP不升高或升高不明顯[5]。SAA半衰期較短，只有50 min左右[6]，當感染控制、癥狀緩解后，在疾病的恢復期迅速下降，因此，血清SAA水平是反映新生兒感染性疾病的靈敏指標，有助于感染的早期診斷、病情嚴重程度評估、療效判斷及轉歸預測。

中性粒細胞CD64，即IgG Fc片段受體1（FcγR Ⅰ），屬于免疫球蛋白超家族。正常情況下，CD64在外周血中主要表達于單核細胞、巨噬細胞及樹突狀細胞的表面，而在中性粒細胞表面僅少量表達、約1000分子/細胞；當機體患感染性疾病時，在粒細胞集落刺激因子（G-CSF）、細菌細胞壁的脂多糖（LPS）和干擾素-γ（IFN-γ）等因子作用下，中性粒細胞表面CD64表達迅速升高[7]，CD64在新生兒敗血癥發生后0～24 h均可保持較高水平，表明CD64在敗血癥早期的敏感度高[8]。刺激過后，CD64的表達可迅速恢復至正常水平。CD64能夠同時介導體液免疫以及細胞免疫[9]，CD64能夠識別IgG的Fc段，在抗原遞呈、細胞吞噬、清除免疫復合物起到關鍵性作用，還能釋放炎性因子[10]。中性粒細胞能依靠其表面的CD64參與抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用（ADCC），能夠促進巨噬細胞吞噬和清除免疫復合物以及顆粒性抗原。中性粒細胞CD64與新生兒感染程度的平行性好[11]，影響因素少，穩定性高，對于感染的診斷具有很高的敏感性和特異性，新生兒采血相對困難，但少量血液標本可檢測出CD64水平，為臨床診療提供指導。Fjaertoft等[12]研究表明，在急性細菌感染的早期階段，新生兒細菌感染組CD64明顯高過非感染組，而且感染組中CD64水平在早產兒、足月兒、年長兒與成人之間無差異，CD64表達在革蘭陽性菌和革蘭陰性菌感染之間無差異，說明CD64可以作為新生兒尤其是早產兒細菌感染的一個有效指標。Allen等[13]認為，病毒感染或者非感染性的炎性反應均不會引起CD64的表達增加，由此說明，CD64在診斷新生兒細菌感染具有很高的特異性。

綜上所述，聯合檢測SAA、CD64對敗血癥早期診斷具有較高的敏感性和特異性，在疾病恢復期，SAA及CD64可迅速降至正常水平，有助于判斷療效及預后。

參考文獻

[1]王衛平，毛萌，李廷玉，等.兒科學[M].第8版.北京：人民衛生出版社，2013：127-129.

[2] Jia L Q，Shen Y C，Hu Q J，et al.Diagnostic accuracy of neutrophil CD64 expression in neonatal infection：a meta-analysis[J].Journal of International Medical Research，2013，41（4）：934-943.

[3]邵肖梅，葉鴻瑁，丘小汕，等.實用新生兒學[M].第4版.北京：人民衛生出版社，2011：340-342.

[4] Lannergard A，Larsson A，Friman G，et al.Human serum amyloid A（SAA） and high sensitive C-reactive protein（hsCRP） in preterm nevborn infants with nosocomial infections[J].Acta Paediatr，2008，97（8）：1061-1065.

[5] Urieli-Shoval S，Linke R P，Matzner Y.Expression and function of serum amyloid A，a major acute- phase protein，in normal and disease states[J].Curr Opin Hematol，2000，7（1）：64-69.

[6]劉燕麗，劉勛，步軍.血清淀粉樣蛋白A在兒童感染性疾病早期診斷中的價值[J].中國衛生檢驗雜志，2017，27（24）：3596-3598.

[7] Hoffmann J J.Neutrophil CD64：a diagnostic marker for infection and sepsis[J].Clin Chem Lab Med，2009，47（8）：903-916.

[8] Streimish I，Bizzarro M，Northrup V，et al.Neutrophil CD64 as a diagnostic marker in neonatal sepsis[J].Pediate Infect Dis J，2012，31（70）：777-781.

[9] Fossati G，Bucknall R C， Edwards S W.Fc gamma receptors in autimmune diseases[J].Clin Invest，2001，31（9）：821-831.

[10] Fossati G，Bucknall R C，Edwards S W.Fc gamma receptors in autimmune diseases[J].Clin Invest，2001，31（9）：821-831.

[11] Wagner C，Deimh R，Dendleh B，et al.Expression Patterns of the Lipopolysaccharide Receptor CDI4，and the F[gamma] Receptors CDI6 and CD64 on Polymorphonuelear Neutrophils：Data from Patients with Severe Bacterial infections and Lipopolysaocharide-Exposed Cells[J].Shock Society，2003，19（1）：5-12.

[12] Fjaertoft G，Hakansson L，Ewald U，et al.Neutrophils from term and preterm newborn infants express the high affinity Fcgamma-receptor I（CD64） during bacterial infections[J].Pediatr Res，1999，45（6）：871-876.

[13] Allen E，Bakke A C，Purtzer M Z，et al.Neutrophil CD64 expression：distinguishing acute inflammatory autoimmune disease from systemic infections[J].Ann Rheum Dis，2002，61（6）：522-525.

（收稿日期：2018-03-30）