HPLC法測定奧拉西坦膠囊中的有關物質

吳福鴻，李 娟

（寧夏康亞藥業股份有限公司，寧夏銀川 750002）

奧拉西坦膠囊為奧拉西坦的膠囊劑，奧拉西坦是一種新的GABA的衍生物，是近幾年來研制開發的新型促智藥。該藥對腦血管病、腦損傷、腦瘤（術后）、顱內感染、癡呆、腦變性疾病等引起的意識障礙、記憶和智能障礙、神經功能缺損等均有良好療效[1]。

奧拉西坦有關物質測定方法多為高效液相色譜法，奧拉西坦酸為奧拉西坦的水解雜質，目前只有2014年發布的奧拉西坦以及奧拉西坦膠囊的征求意見稿中有該雜質的檢測方法，本研究通過對方法的優化，建立了采用高效液相色譜法測定奧拉西坦酸的方法，該方法操作簡便、靈敏、準確。

1 儀器與材料

高效液相色譜儀（Chromaster 5110輸液泵、Chro master 5210自動進樣器、Chromaster 5310柱溫箱、Chromaster 5410紫外檢測器，日本Hitachi公司），ABS-135電子天平（梅特勒-托利多）。

奧拉西坦對照品（批號101032-200901）購自中國食品藥品檢定研究院；奧拉西坦酸雜質對照品（批號2010-12-8）購自深圳市雅索科技有限公司；奧拉西坦膠囊（規格：400 mg，石藥集團歐意藥業有限公司，批號：000101201；寧夏康亞藥業股份有限公司，批號20121207、20121208、20121209）；磷酸（色譜純），購自天津大茂化學試劑廠；水為實驗室二次純蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水（用磷酸調pH至3.6）為流動相，檢測波長為210 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為25℃。

2.2 溶液的制備

雜質對照品溶液：取奧拉西坦酸雜質對照品，精密稱定，用水溶解稀釋制成每1 mL中約含1 μg的溶液，作為雜質對照品溶液。

對照溶液及供試溶液：精密稱取奧拉西坦膠囊適量，加水稀釋制成每1 mL中約含奧拉西坦1 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用水稀釋制成每1 mL中約含奧拉西坦1 μg的溶液作為對照溶液。

2.3 專屬性實驗

精密稱取奧拉西坦膠囊，進行高溫、酸、堿、氧化以及光照破壞實驗，并配制成1 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。過濾，進樣，記錄色譜圖。在上述色譜條件下，奧拉西坦在高溫、酸、堿、氧化和光照破壞條件下所產生的降解產物與主峰均能達到基線分離，與各有關物質峰的分離度符合要求，說明該方法專屬性良好。

2.4 檢測限與定量限的確定

分別以3倍信噪比及10倍信噪比作為檢測限和定量限，測得奧拉西坦酸雜質的檢測限為5 ng/mL；定量限為20 ng/mL。

2.5 線性關系考察

取奧拉西坦酸雜質對照品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成含雜質分別為 0.02 μg/mL、0.6 μg/mL、0.9 μg/mL、1.2 μg/mL、1.5 μg/mL、1.8 μg/mL、2.1 μg/mL的系列線性溶液。按照上述色譜條件，分別精密量取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積（A）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程為A=22 501.624C-370.740 9，r=0.999 9，由實驗結果可知，雜質Ⅲ在濃度范圍 0.02 μg/mL～2.10 μg/mL 內呈良好的線性相關性。

2.6 精密度實驗

精密稱取奧拉西坦酸雜質對照品，置量瓶中，加水溶解并稀釋制成每1 mL約含1 μg的溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積，RSD為1.05%，表明精密度良好。

2.7 溶液穩定性實驗

按“2.2”項制備雜質對照溶液和供試品溶液，于室溫、避光條件下放置，在 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 和12 h，按“2.1”項色譜條件進樣分析，記錄峰面積。奧拉西坦酸雜質平均峰面積為23 636，RSD為1.91%。表明奧拉西坦膠囊有關物質檢查配制溶液室溫、避光放置12 h穩定性良好。

2.8 回收率實驗

精密稱取奧拉西坦膠囊適量，平行配制9份，分別加入奧拉西坦酸雜質對照品適量，加水稀釋配制成低（80%）、中（100%）、高（120%）三個濃度的溶液，進行加樣回收率實驗。實驗結果（見表1）。由表1實驗可知方法準確度良好。

2.9 重復性實驗

精密稱取奧拉西坦膠囊適量，加水稀釋并制成濃度為1 mg/mL的溶液，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液，配制6份，分別注入液相色譜儀，考察奧拉西坦膠囊有關物質檢查重復性。由實驗可知，按上述方法測定，雜質奧拉西坦酸的平均含量為0.06%，RSD為0.05%，奧拉西坦膠囊中雜質檢查重復性良好。

表1 奧拉西坦膠囊有關物質檢查方法3準確度實驗結果（n=9）

表2 奧拉西坦膠囊有關物質檢查結果

2.10 供試品測定

取奧拉西坦膠囊（批號000101201、20121207、2012 1208、20121209），按照“2.1”及“2.2”項下色譜條件及試驗方法，對有關物質進行測定，結果（見表2）。

3討論

（1）分別考察了柱溫以及流動相pH值對奧拉西坦有關物質測定的影響，結果柱溫對測定結果無影響，但是流動相pH值會影響出峰時間以及分離度，故規定流動相pH值為3.6。

（2）所用色譜條件，根據征求意見稿，其流動相為0.02 mol/L的磷酸二氫鈉溶液，對色譜條件進行優化，將流動相改為水（磷酸調節pH值至3.6），操作簡便，靈敏度高。

（3）奧拉西坦膠囊經酸、堿、氧化、高溫和光照破壞后均產生了一定的降解，說明樣品在以上條件下不穩定；主峰與降解產物在本文建立的色譜條件下均能得到良好分離，本方法可用于奧拉西坦膠囊中有關物質的檢查。