固定電泳法檢測尿本-周蛋白的應用分析

譚鴻霞

（中山市小欖人民醫院檢驗科 廣東 中山 528415）

臨床醫師多應用血清蛋白電泳、免疫球蛋白定量方法監測M蛋白，但在多種因素的作用下，其特異性與靈敏度相對較低，本文探討免疫固定電泳法在尿BJP中的應用價值，本文做出如下詳細論述。

1.材料與方法

1.1 試劑和儀器

乙酸緩沖液、磺基水楊酸、十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠電泳（SDS-AGE）電泳試劑盒、免疫固定電泳試劑盒，儀器以Sebia全自動電泳儀、羅氏Cobas8000全自動生化分析儀等為主。

1.2 樣本

取2017年3月—2018年5月在我院進行住院治療的125例患者晨尿樣本，在3～8℃環境下保存，7d內統一先行檢測十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠（SDS-AGE）電泳，收集其中有異常區帶的尿標本。

1.3 檢測方法

（1）固定電泳法的應用流程：取適量緩沖液，將蛋白質溶入其中，實現電泳分離處理。取等量晨尿樣本分別行免疫固定電泳于熱沉淀反應試驗。對輕鏈2種血清進行免疫固定之前實施有效的分離處理干預，借用固定的條帶將電泳后蛋白質的整個面貌呈現處理，并把其設為參考泳道。沉淀后的蛋白質染色環節應用的染色劑為結晶紫后，利用酸性溶液把多余的染料沖洗掉，對最后獲得的監測結果僅掃描處理。將酸性介質沖洗多余染料。對檢測結果行掃描分析。（2）熱沉淀反應法參照相關實驗規程進行操作行。

2.結果

2.1 BJP免疫固定電泳

在對參與本次研究125例患者晨尿樣本監測后，發現63例患者有異常區，異常區段的相對分子質量為25000～50000。將以上63例患者進行BJP免疫固定電泳，結果提示有35例樣本尿中BJP為陽性，其中IgG 型21例，IgG 型14例。熱沉淀反應法檢測結果表明有19例患者尿樣中BJP陽性。

2.2 免疫固定電泳檢測的靈敏度

免疫固定電泳法檢測出尿BJP陽性的尿蛋白濃度是20mg/L，當濃度上升至2000mg/L時，沒有發現干擾；但是熱沉淀反應法檢測出尿BJP陽性的尿蛋白濃度達到310mg/L，但濃度上升至1270mg/L時，就有干擾出現。

2.3 尿蛋白電泳、熱沉淀反應法和BJP檢出情況統計

對63例尿蛋自SDS-ACE存在異常區帶的樣木行BJ P免疫固定電泳。結果提示，尿蛋白電泳出現異常BJP區帶的陽性率為55.56%（35/63）。蛋白異常的樣本經免疫固定電泳的BJP檢出率為54.28%，熱沉淀反應法的檢出率為30.16%。見表1、表2。

表1 非濃縮尿蛋白電泳的效率[n，(%)]

表2 BJP免疫固定電泳與熱沉淀反應法檢測的效率[n，(%)]

3.討論

因為身體中某一克隆出現病理性改變而分泌大量單一化、質地均勻的單克隆蛋白，又被叫做M蛋白。多發性骨髓瘤、白血病和淋巴細胞瘤等疾病均會伴有單克隆B細胞增殖，蛋白輕鏈通過腎小球濾過作用后在腎小管分解代謝。伴隨著腫瘤細胞的增殖，自由輕鏈的合成量增多，遠遠大于腎小管的重吸收能力，以致BJP在腎小管內和游離鈣結合、沉淀，破壞腎單位，促使腎功能減退，產生蛋白尿、管型尿，甚至是血尿。尿本-周蛋白為游離單克隆免疫球蛋白輕鏈，相對分子量為22500，是由具有213～216個氨基酸構成，輕分子鏈為 。現代臨床醫學研究發現，尿本周蛋白陽性和多發性骨髓瘤的發病存在相關性，其可以被視為診斷多發性骨髓瘤的標記性蛋白，他類疾病患者也可檢出本周蛋白為陽性[2]。熱沉淀法、免疫比濁法為臨床檢測尿中 BJP的常用方法，但受多種因素的干擾，其靈敏度與特異性普遍偏低，檢出率較低。在本次研究中，應用熱沉淀法尿 BJP的檢出率僅為30.16%，并且該檢測方法靈敏度偏低（尿BJP陽性的尿蛋白濃度達到310mg/L，但濃度上升至1270mg/L時，就有干擾出現），由此可間接的推測，如果把熱沉淀法運用在BJP陽性的篩選時間中，可能對檢測結果的正確率造成負面影響。而免疫固定電泳法是以瓊脂糖凝膠為媒介，對蛋白質進行電泳分離以后，將蛋白質固定劑、各類免疫球蛋白等眾多物質溶入其中，如果血清內有與之相對應的抗原，那么就會在相應部位產生抗原—體復合物，同時在凝膠介質底部有沉淀物生成，經過染色處理以后，沉淀區段就會外顯顏色，結合顯色條帶的位移情況辨識相關單克隆組分，進而實現精確對各類免疫球蛋白及輕鏈類型的劃分[3～4]。

在本次研究中，出現異常區帶的樣本中BJP檢出率為55.56%，有28例為假陽性，筆者認為這可能和某些小分子蛋白出現在該區帶中相關。總之，免疫固定電泳檢測尿BJP，具有較高靈敏度與特異性，值得在疾病診斷領域推廣。