SYSMEXXN-9000全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)外周血有核紅細(xì)胞的可靠性評(píng)價(jià)

黃丹 張彬 蘇建蓉（綿陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 四川 綿陽(yáng) 621000）

有核紅細(xì)胞（nucleated red blood cell，NRBC）一般僅存在于骨髓中，成年人外周血中無(wú)NRBC，在出生1周內(nèi)的新生兒外周血中可見(jiàn)到少量的NRBC。外周血中出現(xiàn)有核紅細(xì)胞多為病理因素導(dǎo)致，如病理狀態(tài)下的溶血性貧血、急性大量失血、惡性腫瘤、骨髓纖維化癥等導(dǎo)致骨髓及髓外紅系細(xì)胞代償性極度活躍增生，超出細(xì)胞自身衰亡程度而釋放入外周血中，?？梢?jiàn)晚幼紅細(xì)胞及中幼紅細(xì)胞或更幼稚的紅細(xì)胞[1-2]。因此，外周血NRBC檢測(cè)的準(zhǔn)確性與及時(shí)性對(duì)各類(lèi)疾病的診斷與鑒別診斷具有重要的臨床意義。目前，計(jì)數(shù)NRBC的“金標(biāo)準(zhǔn)”[3]是對(duì)瑞氏染色血涂片在油鏡下進(jìn)行分類(lèi)，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞時(shí)所見(jiàn)到的NRBC數(shù)量，即NRBC在外周血中的百分率（NRBC%）。SYSMEX XN-9000全自動(dòng)血液分析儀添加特殊Sysmex溶解試劑Lysercell WNR進(jìn)行紅細(xì)胞溶解，NRBC將只剩下細(xì)胞核，然后加入Fluorocell WNR對(duì)白細(xì)胞（white blood cell, WBC）的核酸和細(xì)胞器及NRBC的細(xì)胞核進(jìn)行熒光染色，通過(guò)鞘流式檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定前向散射光和側(cè)向熒光強(qiáng)度，依據(jù)細(xì)胞大小及熒光強(qiáng)度的差異可將NRBC與WBC區(qū)分開(kāi)并計(jì)算有核紅細(xì)胞數(shù)（NRBC#）與有核紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（NRBC%）。本研究通過(guò)對(duì)儀器法檢測(cè)NRBC結(jié)果與人工顯微鏡鏡檢法計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行比較，從而對(duì)SYSMEX XN-9000全自動(dòng)血液分析儀WNR通道檢測(cè)外周血NRBC的可靠性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

選取本院2018年1月到2018年6月SYSMEX XN-9000全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)出NRBC＞0/100個(gè)WBC的標(biāo)本共324例，其中男性165例，年齡0～90歲，女性159例，年齡0～77歲。隨機(jī)選取同時(shí)段儀器檢測(cè)出NRBC為0/100個(gè)WBC的標(biāo)本共100例，其中男性54例，年齡0～81歲，女性46例，年齡0～83歲。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器：日本SYSMEX公司XN-9000全自動(dòng)血液分析儀，日本SYSMEX公司SP-10全自動(dòng)血涂片制備儀，日本OLYMPUS公司CX23普通光學(xué)顯微鏡。

1.2.2 試劑：日本SYSMEX公司XN-9000配套試劑，日本SYSMEX公司SP-10配套染液及玻片，日本OLYMPUS公司CX23配套鏡油，美國(guó)BD公司K2-EDTA真空采血管。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 儀器法：嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上機(jī)檢測(cè)，記錄XN-9000全自動(dòng)血液分析儀在WNR通道中所得NRBC百分率（NRBC%儀器）（/100個(gè)WBC）。

1.3.2 鏡檢法：嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程上機(jī)推片，SP-10全自動(dòng)血涂片制備儀自動(dòng)進(jìn)行涂片制作與染色。有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的技師按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[4]進(jìn)行顯微鏡鏡檢，分類(lèi)計(jì)數(shù)200個(gè)WBC中NRBC數(shù)量，計(jì)算每100個(gè)WBC所見(jiàn)NRBC數(shù)，結(jié)果取平均值，即NRBC百分率（NRBC%鏡檢）（/100個(gè)WBC）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS19.0和MedCalc軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用Pearson相關(guān)分析評(píng)估儀器法和鏡檢法的相關(guān)性，采用Bland-Altman分析評(píng)估儀器法和鏡檢法的一致性。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果分析

2.1 儀器法與鏡檢法檢測(cè)NRBC的相關(guān)性分析

圖1 儀器法與鏡檢法的相關(guān)性分析

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析（見(jiàn)圖1），得回歸方程：y=0.97x-0.8402，R2=0.9994＞0.995，且Pearson相關(guān)分析得，P＜0.001,說(shuō)明儀器法與鏡檢法計(jì)數(shù)NRBC百分率的相關(guān)性良好。

2.2 儀器法與鏡檢法檢測(cè)NRBC的一致性分析

圖2 儀器法與鏡檢法的Bland-Altman散點(diǎn)圖

采用MedCalc軟件進(jìn)行Bland-Altman分析（見(jiàn)圖2），得回歸方程：y=0.03014x+0.8642，儀器法與鏡檢法計(jì)數(shù)NRBC的結(jié)果差異的95%一致性界限為（1.98±9.76）個(gè)NRBC/100個(gè)WBC，僅有7例（2.16%）在一致性界限范圍外，說(shuō)明儀器法與鏡檢法具有良好的一致性。

2.3 儀器法與鏡檢法檢測(cè)NRBC的結(jié)果比較

表1 儀器法與鏡檢法檢測(cè)NRBC的結(jié)果比較

由表1可知，對(duì)324例儀器法檢測(cè)NRBC陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行人工鏡檢，其中320例為陽(yáng)性，4例為陰性；對(duì)100例儀器法檢測(cè)NRBC陰性的標(biāo)本進(jìn)行人工鏡檢，其中99例為陰性，1例為陽(yáng)性。以鏡檢法為金標(biāo)準(zhǔn)，XN-9000全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)NRBC的靈敏度為99.7%，特異性為96.1%，假陽(yáng)性率為3.9%，假陰性率為0.3%。

3.討論

外周血NRBC可出現(xiàn)于多種疾病中，其不僅與諸多疾病的診斷與預(yù)后有關(guān)[5]，還可影響WBC計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，從而干擾臨床診斷與治療[6-7]。本研究中324例NRBC陽(yáng)性標(biāo)本的儀器法與鏡檢法計(jì)數(shù)NRBC結(jié)果呈明顯正相關(guān)（R2=0.9994），與文獻(xiàn)報(bào)道[8]一致。且儀器法與鏡檢法兩組結(jié)果比較，P＜0.001，表明兩種方法計(jì)數(shù)NRBC結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Bland-Altman分析，可知儀器法與鏡檢法計(jì)數(shù)NRBC具有良好的一致性，因此，XN-9000全自動(dòng)血液分析儀WNR通道檢測(cè)NRBC結(jié)果基本可替代鏡檢法檢測(cè)外周血NRBC。

本研究顯示，XN-9000全自動(dòng)血液分析儀WNR通道檢出NRBC的靈敏度為99.7%，特異性為96.1%，假陽(yáng)性率為3.9%，假陰性率為0.3%，其較高的靈敏度降低了NRBC的漏檢率，較高的特異性降低了NRBC的誤診率，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上，XN-9000全自動(dòng)血液分析儀WNR通道檢測(cè)NRBC較傳統(tǒng)鏡檢法優(yōu)越，在保證結(jié)果準(zhǔn)確性的同時(shí)，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了工作效率，且儀器法的陰性符合率高達(dá)99%，在儀器正常工作前提下，若未出現(xiàn)相應(yīng)的警示信息，基本可排除NRBC的存在。