β-Catenin蛋白和Survivin蛋白在結直腸癌中的表達及臨床意義

曾 珍 陳文添 戴艷枝

（1.江西省贛州市尋烏縣人民醫院病理科，江西贛州 342200；2.江西省贛州市尋烏縣人民醫院內1科，江西贛州 342200；3.江西省人民醫院病理科，江西南昌 330006）

結直腸癌（CRC）是世界第3大流行性腫瘤，2015年的中國惡性腫瘤統計數據顯示，中國結直腸癌發病率和病死率在全部惡性腫瘤中均位居前5位[1]。美國癌癥協會預測，2018年其新發人數和死亡人數在男女性中均居第3[2]。其發病率在我國乃至世界范圍內逐年上升，除與動物蛋白在人們飲食結構中比重的增加，還與抑癌基因以及癌基因的改變密切相關[3]。在近幾年當中，人們對結直腸癌與細胞信號轉導通路、細胞凋亡機制異常之間的相關性進行了進一步研究，如：（1）Survivin基因為凋亡抑制蛋白家族中的一個新成員，于細胞分裂周期G2/M 期中呈現出高表達的情況，具有抑制細胞凋亡、調節細胞有絲分裂以及促進細胞增殖的作用，通過對該基因的表達進行有效地抑制，能夠加快腫瘤細胞凋亡的速度，其基因突變都與結直腸癌等多種腫瘤有關。（2）Wnt/β-catenin信號通路能夠對細胞的分化與增值進行調節，而β-catenin則是該通路的一個重要調節因子。本實驗應用免疫組化法檢測β-catenin蛋白和survivin蛋白在結直腸癌的表達情況并分析兩者表達的相關性，研究這兩種蛋白和結直腸癌的關系。

1 資料與方法

1.1 一般材料

選取2013年6月至 2017 年6月本院病理科保存的60例結直腸癌病理組織標本作為研究對象，患者術前未進行抗腫瘤治療，有完整的臨床資料。男性36例、女性24 例；年齡 32 ～ 86歲，平均年齡62歲；腫瘤直徑＞5 cm的32例，直徑＜5 cm的28例；高分化腺癌12 例，中分化腺癌 34例，低分化腺癌 14例；根據 Dukes分期： A + B 期33例，C + D 期 27 例，淋巴結轉移者27 例；無淋巴結轉移者33例。以同期結直腸腺瘤手術存檔的蠟塊以及癌旁超過5 cm的正常結直腸組織病理蠟塊各40例為對照組。

1.2 方法

標本固定利用10%中性福爾馬林，經石蠟包埋，并予以連續切片處理，厚度為4μm，然后再予以HE和免疫組化染色處理。本研究所用的試劑主要有：兔抗人 Survivin多克隆抗體（由“福州邁新公司”提供），β-catenin多克隆抗體（由“Abcam公司”提供），SP試劑盒、PBS緩沖液以及枸櫞酸鹽抗原修復液及SP試劑盒都由“福州邁新公司”提供。染色時，嚴格按照相關說明書中的內容進行，并在實驗過程中設置陰性和陽性對照。

1.3 結果評價

在機體的細胞膜、細胞核與細胞質中，β-catenin均可定位，陽性細胞為淡黃-棕黃色的顆粒，若細胞提示陽性，即可判斷為異常表達。若β-catenin≤50%細胞核陽性，提示低表達；若β-catenin＞50%細胞核陽性，提示高表達。

由兩名高資歷且臨床經驗豐富的醫師進行閱片，于光鏡下對陽性細胞進行觀察，發現細胞為棕褐色細顆粒狀。在細胞核亦或者是細胞質中，Survivin 都能定位和表達。按照相關標準，也就是從腫瘤細胞陽性數和染色反應強度這兩方面上進行判斷。其中，染色強度的判斷標準為：無陽性著色-0分，淡黃色-1分，棕黃色-2分，棕褐色-3分。采取隨機法并利用高倍視野計數100個腫瘤細胞所占的比例，將之分為5級，詳細如下：（1）0分：無陽性表達（或者陽性細胞數低于 5% ）。（2）1分：5 ～ 25 %。（3）2分：26 ～ 50 %。（4）3 分：51 ～ 75 % 。（5）4 分：＞ 75 %。計算兩項評分之和，4分提示陽性，0分提示陰性。

1.4 統計學分析

采用 SPSS 18.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料用（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

β-catenin能夠在細胞膜、細胞核和細胞質中進行定位，陽性細胞為淡黃-棕黃色的顆粒，見表1。細胞核陽在結直腸癌中的異常表達。β-catenin 在結直腸癌中的陽性率比結直腸腺瘤以及癌旁正常結直腸組織高，P=0。Survivin 蛋白在細胞質已著手細胞核定位。結直腸癌的Survivin陽性率比結直腸腺瘤與癌旁正常結直腸組織高，P=0 。

表1 β-catenin和Survivin在結直腸癌、結直腸腺瘤和癌旁正常組織中的陽性表達率[例（%）]

結直腸癌中β-catenin蛋白和Survivin蛋白表達的相關性。結直腸癌中β-catenin和Survivin 蛋白的表達呈正相關（ r= 0. 173，P= 0. 027），見表 2 。

表2 結直腸癌中β-catenin和Survivin表達的相關性

β-catenin蛋白和Survivin蛋白表達與結直腸癌臨床病理因素的關系。β-catenin蛋白和Survivin蛋白表達與結直腸癌患者性別、年齡和腫瘤大小比較差異無統計學意義（P＞0.05），與結直腸癌分化程度、淋巴結轉移及臨床Dukes分期比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表 3 。

3 討論與結論

大量研究[4-6]表明，在消化道惡性腫瘤類疾病中，結直腸癌具有比較高的發病率，且可致人死亡，近幾年來，該病的發病率顯著升高，已經對人類的生命健康造成了較大的威脅。 而凋亡抑制基因表達于直腸細胞中亦或者是抑癌基因突變則是引發直腸癌的重要原因[7]。

Wnt信號通路能夠對細胞的生長、分化以及運動進行調控，且其也參加了胚胎到成體的胚胎早期的發育過程，能夠對細胞的分化、增殖、凋亡與生長進行調控。作為生物進化期間比較保守的一條通路，在正常且成熟的細胞當中，Wnt信號通路處于關閉狀態。其在胚胎細胞黏附、細胞增殖和凋亡方面發揮重要作用[8]。Wnt包含有多條信號通路，其中比較常見的有經典Wnt信號通路，也就是Wnt/β-catenin信號通路。其中，β-catenin 是通路中比較重要的一個信號傳遞子，同時也是一個樞紐因子。而β-catenin 蛋白則能起到抑制癌細胞侵襲以及激活通路的作用。在正常細胞當中，β- catenin 蛋白以及細胞膜上的軸蛋白和鈣黏蛋白會相互結合，并形成一種降解復合物，使得細胞質中的β- catenin 蛋白較低[9]。Wnt異常激活后，會對β-catenin 蛋白的降解進行抑制，使得β-catenin 蛋白大量進入細胞質，隨后轉位入細胞核中，與TCF/LEF相結合并形成復合體，同時對通路下游的靶基因進行激活，使得細胞發生了異常增殖的情況，進而加快了腫瘤形成的速度[10]。相關資料中提及，Wnt/β-catenin信號通路的異常和多種腫瘤疾病密切相關，如胃癌、肝癌等[11-12]。此外，也有報道稱[13-17]，在胰腺癌、胃癌、肺癌、結腸癌以及卵巢癌等惡性腫瘤當中，Survivin 都呈現出了高表達的情況。

表3 β-catenin蛋白和Survivin蛋白表達與結直腸癌臨床病理因素的關系

近幾年來，人們通過研究發現了另一個凋亡抑制蛋白家族成員，也就是Survivin，為凋亡抑制劑，能夠起到促細胞增殖以及抑制細胞凋亡的作用，通過對該基因進行有效地抑制，能夠加快腫瘤細胞凋亡的速度。本研究顯示，在結直腸癌中β-catenin與Survivin的表達比結直腸腺瘤以及癌旁正常組織高（P＜0.05）。β-Catenin、Survivin 表達與腫瘤大小、性別以及年齡無任何相關性（P＞0.05），但與結直腸癌的 Dukes分期、分化程度以及淋巴結轉移密切相關（P＜0.05）。本實驗中，β-catenin細胞核高表達與多種因素密切相關，包括結直腸癌組織的Dukes分期、分化程度與淋巴結轉移（P＜0.05）。表明 β-catenin細胞核的表達量是診斷結直腸癌和判斷患者預后的一種重要指標[18]，主要可能為，β-catenin細胞核的表達和細胞增殖、襲轉移與凋亡基因的轉錄和表達密切相關。另外，本組實驗中，Survivin 在結直腸癌、腺瘤及正常組織中的表達是逐漸降低的，本研究結果與 Adamkov等[19]的研究一致。對于結直腸癌患者來說，腫瘤惡性程度的加重以及病情的進展，能夠增加Survivin 的表達，提示 Survivin 的表達能夠反映出結直腸癌的發生與進展，因此，Survivin具有非常高的應用價值，有助于臨床醫師診斷結直腸癌。

在結直腸癌的發病和進展中，β-catenin蛋白和Survivin蛋白高表達起著至關重要的作用。部分結直腸癌是從腺瘤發展而來的，聯合檢測β-catenin蛋白和Survivin蛋白有助于了解結直腸腫瘤的生物學行為并對患者的早期診斷、判斷預后提供分子生物學的支持，有望成為結直腸癌的基因分型及基因治療的新靶點。