galectin-1和VEGF在宮頸鱗癌中的表達及其與臨床特征的關系

鄧曉燕，林海燕，陳衛國

1南方醫科大學第一臨床醫學院，廣州 510515

南方醫科大學第五附屬醫院2超聲醫學科，3婦科，廣州 510900

4南京醫科大學南方醫院放射科，廣州 510515

作為女性最常見的生殖系統惡性腫瘤之一，宮頸癌在全世界范圍內每年新增病例約有50萬[1]。在中國宮頸癌也屬于最常見的婦科腫瘤，對中國婦女的健康造成了極大的威脅[2]。隨著醫療水平的發展，對宮頸癌的診斷也有了進一步的提高，但因早期宮頸癌患者沒有明顯癥狀，發現時往往已經出現擴散轉移。因此確定宮頸癌轉移相關蛋白對判斷預后和診斷治療具有極其重要的意義。研究表明，半乳糖凝集素-1（galactose agglutinin-1，galectin-1）作為一種單一糖類識別結構域，能夠和β-半乳糖苷鍵特異性非共價結合，從而促進細胞的增殖，還可以和血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）結合促進腫瘤血管的生成[3]。VEGF作為一種特異性血管生成調控因子，可以直接作用于內皮細胞，促進血管通透性增加，獲得更多的氧氣和養分，從而促進腫瘤細胞的生長，加速腫瘤向遠處轉移[4]。因此本研究通過觀察galectin-1和VEGF在宮頸癌組織中的表達，并分析其與宮頸癌患者臨床特征的關系，從而為宮頸癌的診斷治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年12月至2017年10月在南方醫科大學第五附屬醫院婦科就診的宮頸鱗狀細胞癌患者的石蠟標本。納入標準：①經病理學檢查證實為宮頸鱗狀細胞癌；②患者臨床資料齊全；③標本采集前患者均未接受過治療。排除標準：資料缺失患者。共納入患者80例，年齡34～72歲，平均（47.8±7.9）歲，其中＜45歲48例，≥45歲32例；分化程度：高分化10例，中分化25例，低分化45例；淋巴結轉移29例，無淋巴結轉移51例；大體類型：內生型35例，外生型45例；宮頸癌國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecologists and Obstetricians，FIGO）分期：I期21例，Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期28例。選擇同期30例宮頸上皮內瘤變患者的宮頸活檢組織石蠟標本（經病理學證實），年齡32～71歲，平均（47.3±7.6）歲。另選擇30例宮頸病變行宮頸錐切術后經病理學證實為慢性宮頸炎患者的正常宮頸上皮組織石蠟標本，年齡35～70歲，平均（47.3±8.2）歲。3組患者的年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 免疫組織化學檢測

取石蠟標本切片，采用二甲苯和梯度酒精進行脫蠟，然后在3%過氧化氫溶液中浸泡，阻斷內源性過氧化酶，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS）洗片，微波修復抗原，分別滴加一抗鼠抗人galectin-1單克隆抗體及鼠抗人VEGF單克隆抗體，4℃冰箱過夜，PBS清洗，滴加生物素標記二抗，室溫孵育15 min，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蒸餾水終止染色，蘇木素復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，烤干，顯微鏡觀察染色結果。

1.3 結果評定

免疫組化染色結果表現為細胞內出現棕黃色顆粒，通過染色的強度和陽性細胞比例評分判定是否陽性。染色強度：無特異性染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分；陽性細胞比例：無陽性細胞為0分，陽性細胞所占比例1%～25%為1分，陽性細胞所占比例＞25%為2分。兩項評分相加≥2分即為免疫組化染色陽性[5]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 16.0統-計軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman相關分析法。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 galectin-1、VEGF表達情況的比較

galectin-1、VEGF在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率均高于宮頸上皮內瘤變組織及正常宮頸上皮組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 galectin-1、VEGF在宮頸鱗癌、宮頸上皮內瘤變、正常宮頸上皮組織中的表達情況比較[n（%）]

2.2 宮頸鱗癌中galectin-1、VEGF表達情況與臨床特征的關系

galectin-1的陽性表達可能與FIGO分期有關（P＜0.05），而與年齡、大體類型、分化程度及淋巴結轉移無關（P＞0.05）。VEGF的陽性表達可能與分化程度、FIGO分期和淋巴結轉移有關（P＜0.05），而與年齡、大體類型無關（P＞0.05）。（表2）

表2 宮頸鱗癌中galectin-1、VEGF表達情況與臨床特征的關系（n=80）

2.3 宮頸鱗癌中VEGF與galectin-1陽性表達的相關性分析

Spearman相關分析結果顯示，VEGF陽性表達與galectin-1陽性表達呈顯著正相關（r=0.949，P=0.004）。

3 討論

宮頸癌作為當今社會威脅婦女健康的主要疾病之一，近些年來逐漸趨于年輕化，因為其高轉移的特點，很多患者在確診時已經出現轉移。因此研究腫瘤轉移成為科研工作者不斷探尋的課題。

galectin-1蛋白結構上含有1個或2個糖識別域，能夠參與細胞信號轉導，在炎性反應以及腫瘤的侵襲轉移等諸多生理過程中起著重要的作用。在前列腺癌、肝癌以及胃癌組織中galectin-1蛋白均呈現高表達狀態[6]。研究認為galectin-1可以增強酪氨酸磷酸化[7]，也有研究稱其可以通過激活ERK/MAPK通路來完成細胞的分裂增殖[8]。本研究檢測galectin-1在宮頸鱗癌、宮頸上皮內瘤變、正常宮頸上皮組織中的表達情況，結果顯示galectin-1在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率為90.0%，高于宮頸上皮內瘤變及正常宮頸上皮組織，提示galectin-1在宮頸鱗癌中起著重要的作用。且有研究證明，在神經膠質瘤細胞中通過siRNA方法干擾galectin-1表達，細胞的增殖受到抑制[9]。本研究結果顯示，galectin-1的表達與FIGO分期有關，而與年齡、大體類型、分化程度及淋巴結轉移無關，提示galectin-1的陽性表達與宮頸鱗癌的惡性程度密切相關。Sundblad等[10]研究發現，galectin-1可以和骨骼肌上的整合蛋白發生結合，促進腫瘤細胞和細胞外基質發生黏附，從而促進腫瘤發生侵襲和轉移。

惡性腫瘤的侵襲轉移與血管生成密切相關，VEGF作為一種特異性極高的血管調控因子，主要通過增加血管通透性和促進內皮細胞分裂增殖，來促進腫瘤的生長和轉移。有學者采用免疫組化法檢測腎母細胞瘤中VEGF的表達，發現其陽性表達與臨床分期有密切關系，并認為VEGF是腫瘤新生血管的增強因子，能夠促進腫瘤細胞的增殖和轉移[11]。Zuo等[12]通過細胞轉染方法干擾VEGF的表達，結果顯示，促進血管形成通路MAPK信號通路中的相關蛋白表達降低，腫瘤的增殖能力明顯減弱。本研究結果顯示，VEGF在宮頸鱗癌組織中的陽性表達率均高于正常宮頸上皮和宮頸上皮內瘤變組織。VEGF的陽性表達與分化程度、FIGO分期和淋巴結轉移有關。國內學者通過對體內移植宮頸癌的小鼠進行放化療，結果顯示VEGF的表達受到抑制，腫瘤的侵襲和轉移能力也受到抑制，從而為宮頸癌靶向治療提供了新的靶點[13]。Lin等[14]通過體外實驗證明galectin-1和腫瘤血管生成密切相關，且galectin-1可以與VEGF的一個協同受體神經纖毛蛋白-1（neurpilin-1，NRP-1）相結合促進血管的生成。本研究采用Spearman相關分析法，結果顯示VEGF陽性表達與galectin-1陽性表達呈顯著正相關。

綜上所述，galectin-1和VEGF在宮頸鱗癌中可能通過共同調節血管生成來促進腫瘤的侵襲和轉移，galectin-1和VEGF在宮頸鱗癌中的表達與腫瘤惡性程度、轉移有關，可為宮頸鱗癌治療提供新的靶點。